C57-ras致癌性转基因模型杂交1代的脏器及血液学参数测定

目的测定自主建立的致癌性转基因动物模型C57-ras小鼠杂交F1代的血液生理生化值和主要脏器重量,计算脏器系数并作统计学分析。方法选取同窝C57-ras转基因阳性鼠和BALB/cJ小鼠交配后的杂交1代CB6F1-Tg小鼠,雌雄各半,采血,测量血液生理指标和血清生化指标,并称主要脏器重量。结果血液生理指标中,CB6F1-Tg转基因阳性(+/-)雌鼠和阴性(-/-)雌鼠间比较,MCHC存在极显著性差异(P<0.01);CB6F1-Tg转基因阳性(+/-)雄鼠和阴性(-/-)雄鼠间比较,PLT、PCT、EOS%、NEUT、NEUT%、LYM%存在显著性差异(P<0.05),NEUT%、LYM%存在极显著性差异(P<0.01)。血清生化指标中,CB6F1-Tg阳性(+/-)雌鼠和阴性(-/-)雌鼠比较,ALT、TP、ALB存在显著性差异(P<0.05),TG存在极显著性差异(P<0.01)。主要脏器重量和脏器系数均无显著性差异(P>0.05)。结论测定了新建C57-ras致癌性转基因小鼠模型F1代阳性小鼠和阴性小鼠的主要生物学特性,为该模型在致癌性安全性评价等领域的实际应用中提供参考。     

EV71病毒感染动物模型研究进展

人肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）是引起手足口病的主要病毒之一,并可导致严重的神经系统疾病,近年随着发病率的升高,严重威胁了婴幼儿的生命健康。可感染EV71的动物模型是研究其致病机理、疫苗评价和药物研发等的重要工具,然而目前尚未建立有效的EVT1感染标准化动物模型。本文将对不同物种的EV71病毒感染模型进行总结,并着重就利用基因修饰手段建立的EV71病毒感染模型进行讨论和展望。     

p53+/-基因敲除小鼠尿烷致癌性初步验证试验

目的：观察自主建立的p53^+/-敲除小鼠（命名为B6-Trp53tm1/NIFDC）模型,在给予尿烷后的体重、脏器重量、血液学及血生化指标变化,为该模型将来用于临床前药物短期致癌性试验的替代试验提供背景数据。方法：共设计3个组：阴性对照组（野生型小鼠,给予生理盐水）、尿烷组1（B6-Trp53tm1/NIFDC小鼠,给予1000 mg·kg^-1尿烷）、尿烷组2（野生型小鼠,给予1000 mg·kg^-1尿烷）,各组动物数量均为20只,雌雄各半。试验期间及试验结束测定各组动物的体重、脏器重量和相对脏器重量、血液学及血生化指标,并进行统计分析。结果与结论：与阴性对照组相比,尿烷给药第2、3、11及21周尿烷组1和尿烷组2动物的体重显著下降;尿烷组1动物肺脏和脾脏绝对重量显著升高;尿烷组1和尿烷组2动物肺脏相对重量显著升高;尿烷组1动物NEU、RDW%、CHDW%以及尿烷组2动物LYM%、BASO%显著升高;尿烷组1及尿烷组2动物的血生化指标无明显改变。     

模式小鼠总DNA三种提取方法比较

目的建立简便、快捷、经济的模式小鼠总DNA提取方法,以快速鉴定大批量模式小鼠基因型。方法采用苯酚抽提法、异丙醇沉淀法、鼠耳煮沸法提取同种模式小鼠总DNA,对比DNA纯度、得率、耗费时间,并比较基因型鉴定结果。结果苯酚抽提法得率最高,异丙醇沉淀法最低;而纯度则按照苯酚抽提法、异丙醇沉淀法、鼠耳煮沸法顺序递减;在耗时上鼠耳煮沸法最短。三种方法提取的DNA均可做模版用于基因型鉴定。结论鼠耳煮沸法操作简单、成本最低,快速、基因型鉴定结果可靠,可用于规模化的基因型鉴定实验中。     

不同周龄C57-ras转基因小鼠模型杂交1代CB6F1小鼠的脏器及血液学参数测定

目的 测定4周龄和8周龄不同性别CB6F1小鼠的脏器及血液生理生化指标正常值, 并比较周龄、性别对各项指标的影响。方法 分别取20只雌雄各半的4周龄和8周龄的CB6F1小鼠, 活体称重, 解剖称取主要脏器重量,采血测定血液生理指标和血清生化指标。结果 4周龄和8周龄CB6F1在体重、心、肝、脾、右卵巢、左睾丸、右睾丸、白细胞计数(WBC)、红细胞计数(RBC)、血红蛋白浓度(HGB)、红细胞压积(HCT)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白(MCH)、血小板压积(PCT)、平均血小板体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)、淋巴细胞(LYM)、总蛋白(TP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、白蛋白(ALB)、磷(P)、甘油三酯(TG)这22项指标上差异存在显著性(P<0.01), 在左肾、右肾、右肾上腺、胸腺、左卵巢、红细胞分布宽度(RDW)、单核细胞百分比(MON%)、尿素(BUN)这8项指标上差异有统计学意义(P<0.05)。从性别上比较, 4周龄CB6F1在体重、心、肝、脾、肺、左肾、右肾、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、LYM、ALT、ALP、葡萄糖(GLU)、P、总胆固醇(CHO)这14项指标上都有雌雄间的显著差异(P<0.01), 在右肾上腺、WBC、PCT、平均血小板体积(MPV)、总蛋白(TP)、BUN这6项指标上存在雌雄间的统计学差异(P<0.05);8周龄CB6F1在体重、心、肝、肺、左肾、右肾、MCV、PCT、LYM、淋巴细胞百分比(LYM%)、中性粒细胞百分比(NEUT%)、ALT、GLU、P、CHO这15项指标上都有雌雄间的显著差异(P<0.01), 在WBC、RBC、MPV、中性粒细胞(NEUT)、TP这5项指标上存在雌雄间的统计学差异(P<0.05)。结论 本文测定了不同周龄不同性别CB6F1小鼠的脏器及血液生理生化指标, 为其建立正常检测指标和应用提供参考。     

C57-ras癌症转基因小鼠模型胚胎冷冻保种技术研究

目的 建立C57-ras癌症转基因小鼠模型胚胎的冷冻保种技术.方法 通过直接收集体内发育的2-细胞胚或者通过体外受精方法获得2-细胞胚,采用玻璃化冷冻法冷冻、复苏、移植,后代经PCR检测.结果 体内发育至2细胞期胚胎90枚,解冻后的平均复苏率是67.78％,移植产仔率是21.31％,后代的阳性率是23.08％;体外受精的2细胞期胚胎203枚,解冻复苏60枚,平均复苏率是63.33％,移植产仔率是15.78％,后代的阳性率是33.33％.结论 两种胚胎冷冻途径均获得了C57-ras癌症转基因动物模型阳性小鼠,建立了该模型动物的低温保存方法.     

单管双向等位基因专一性扩增方法在近交系小鼠遗传检测中的应用

目的将新近建立的单管双向等位基因专一性扩增(single-tube bi-directional allele specific amplification,SB-ASA)方法用于分析近交系小鼠基因组中的单核苷酸多态性(SNP)。方法以5个近交系小鼠为研究对象,采用SB-ASA方法对其16个SNP位点进行检测,并通过双盲实验和测序验证该方法的可靠性;且考察了该方法中PCR反应各成分及扩增条件对结果的影响。结果16个SNP位点,SB-ASA都成功地对5个品系小鼠进行了分型,与测序结果完全一致;双盲实验结果显示通过3个SNP位点即可鉴别5个品系。结论SB-ASA方法可用于近交系小鼠SNP的遗传检测,可望作为一种新的分子生物学遗传检测方法推广应用。     

一种便捷而经济的显微注射针填充方法

介绍了一种便捷而经济的将DNA溶液填充至显微注射针的方法。将通常用于转移胚胎的口吸管稍加改进，吸取DNA溶液，从尾部直接注入显微注射针，可在2~5min完成DNA填充，大大提高了效率。     

4个近交系小鼠SNP位点的测定

目的将新近建立的单管双向等位基因专一性扩增（single-tube bi—directional allele specific amplification，SB—ASA）方法用于分析国内近交系小鼠基因组中的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）。方法以国内4个近交系小鼠为研究对象，采用SB-ASA方法对其16个SNP位点进行检测，并通过测序进行验证。结果16个SNP位点，SB-ASA都成功地对4个品系小鼠进行了分型，与测序结果完全一致。结论SB—ASA方法可以准确地检测国内近交系小鼠SNP位点等位基因型。