脂联素通过AMPK/mTOR通路抑制H2O2诱导的大鼠髓核细胞凋亡及细胞外基质退变

目的：探讨脂联素（adiponectin,APN）对氧化应激下大鼠髓核细胞凋亡和细胞外基质（extracellular matrix,ECM）退变的保护作用及相关机制。方法：原代培养SD大鼠髓核细胞,CCK?8法检测细胞活力,以确定APN的最适保护浓度。将细胞分为对照组、H2O2组、APN+H2O2组及Compound C+APN+H2O2组,流式细胞术检测凋亡率,Western blot检测Bcl?2、Bax、Cleaved Caspase?3、基质金属蛋白酶?13（matrix metalloproteinase?13,MMP?13）及带有血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解整链蛋白金属蛋白酶?5（a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs?5,ADAMTS?5）等蛋白的表达,RT?PCR检测Ⅱ型胶原（collagen type Ⅱ alpha 1 chain,COL2A1）、蛋白聚糖（aggrecan,ACAN）的mRNA水平,Western blot评估5′?单磷酸腺苷活化蛋白激酶（adenosine 5′?monophosphate?activated protein kinase,AMPK）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）的磷酸化水平。结果：1 μg/mL APN对200 μmol/L H2O2所致的细胞毒性起最佳拮抗作用。APN预处理显著抑制H2O2诱导的髓核细胞凋亡。相应地,Bax/Bcl?2比值及Cleaved Caspase?3 表达的增加也被APN抑制。尽管对ADAMTS?5无明显抑制作用,APN降低了H2O2诱导的MMP?13的表达。此外,H2O2对COL2A1及ACAN转录的抑制作用也被APN显著缓解。APN还促进AMPK磷酸化并抑制mTOR磷酸化,而AMPK抑制剂Compound C显著减轻了APN对mTOR磷酸化的抑制作用。APN对凋亡、分解代谢的抑制作用及其对合成代谢的促进作用也均被Compound C逆转。结论：APN通过AMPK/mTOR通路抑制H2O2诱导的大鼠髓核细胞凋亡及ECM退变。