HCV核心基因插入突变体编码蛋白对人肝癌细胞系(Huh-7)细胞基因表达的影响

目的用基因表达分析法鉴定丙型肝炎病毒(HCV)核心(Core，C)区基因插入突变体编码蛋白在人肝癌细胞系(Huh-7)表达，探讨该蛋白生物学功能及其基因表达改变与致病的关系。方法构建HCV-1bc基因插入突变体编码蛋白重组表达质粒，建立表达c基因插入突变体编码蛋白Huh-7细胞系，按Affymetrix公司实验程序制备探针、再与该公司H0u133A和Hg-u133b芯片杂交。对基因表达上调或下调≥3倍的基因，用NetAflk作进一步分析。并用半定量RT-PCR对其中3个上调基因进行鉴定。结果Microarray分析显示，HCV-1b C基因插入突变体编码蛋白比c蛋白引起更多的基因表达改变，主要集中在信号传导、蛋白酶活性、分子转运、免疫反应等，特别是免疫反应基因表达更加显著。C基因插入突变体编码蛋白表达可同时导致凋亡基因／抗凋亡基因表达上调或下调及致癌基因上调。半定量RT-PCR对有趣的致癌基因FHL2、抗凋亡基因PRKCZ和凋亡基因LGALSI的鉴定结果表明，FHL2、PRKCZ和LGALSI基因的表达比空载体转染对照组相同基因明显上调。结论Hcvc基因插入突变体编码蛋白在Huh-7细胞表达对其基因表达有很大影响，其中对免疫反应基因的影响更明显，这一结果对理解HCV C基因插入突变体编码蛋白在HCV致病过程中的作用及其研制抗HCV药物均有重大的参考价值。     

不同处理方式对HCV结构区基因重组体诱发小鼠产生抗体的影响

不同处理方式对ＨＣＶ结构区基因重组体诱发小鼠产生抗体的影响窦骏刘克洲陈智沃建尔刘勇何南祥章明太王信子陈离伟为寻求丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因免疫的最佳动物实验方法，探讨不同处理方式对重组体ｐＣＤ－ＨＣＶ１诱发ＢＡＬＢ／ｃ小鼠产生抗体的影响，用含有ＨＣＶ...     

探讨BCG初次免疫结核杆菌DNA疫苗加强免疫方案的效应

目的:探讨BCG初次免疫(BCG-prime),结核杆菌共表达DNA疫苗加强免疫(DNA疫苗-boost)的策略对小鼠的免疫效果。方法:将BCG及结核杆菌重组DNA疫苗依次免疫小鼠,通过检测CTL和NK细胞的杀伤活性和特异性淋巴细胞增殖,以及小鼠血清抗体及细胞因子的水平,观测BCG-prime、共表达结核杆菌Ag85A/GM-CSFDNA疫苗boost策略对小鼠的免疫效果。结果:采用prime-boost免疫策略组的小鼠CTL的杀伤活性明显增强、特异性淋巴细胞明显增殖、IFN-γ的水平明显增高,NK细胞杀伤活性与对照组相比也有一定提高,但未超过BCG单独免疫效果。免疫小鼠血清特异性抗体的滴度超过单独DNA疫苗免疫组。结论:在采用BCG-prime-结核杆菌DNA疫苗boost免疫策略后,能增强对小鼠的免疫效应,尤其是Th1型细胞免疫反应增强明显,为进一步在动物体内进行保护性效应试验的研究提供了实验依据。     

丙型肝炎病毒核酸疫苗研究进展

人体感染ＨＣＶ后，大部分病人转为慢性肝炎，其中部分病人可发展为肝硬化甚至肝癌，目前尚无特效的防治方法，ＨＣＶ疫苗研究亦面临困境。由于核酸疫苗独特的免疫效应，倍受医学界关注。本文就当前ＨＣＶ检酸疫苗的构建，免疫效应及存在问题与展望作一综述。     

Investigation on the Maternal-Infantile Infection with Human Parvovirus B19

With the investigations on pregnant women and newbornsinfected withToxoplasma, rubella virus, cytomegalovirus,herpes simplex virus (TORCH), it was found that humanparvovirus B19 (B19 virus), which belongs to the familyParvoviridae and the genus Erythrovir…     

mGM-CSF重组质粒的构建、表达及活性鉴定

目的 构建pc—mGM—CSF重组质粒载体，为mGM—CSF基因治疗肿瘤的研究奠定基础。方法 采用RT—PCR方法从小鼠脾脏中获得目的基因mGM—CSF，克隆于pcDNA3.1／Myc-His(-)(A)质粒上，成为pc-mGM-CSF，用PCR、酶切进行鉴定，然后用脂质体转染小鼠骨髓瘤细胞SP2／0，用G418筛选后通过RT—PCR和SDS—PAGE鉴定，将转染SP2／0上清加入NFS-60细胞，检测蛋白活性。结果 重组质粒中含有mGM—CSF基因，在SP2／0中有表达，且表达产物能分泌到肿瘤细胞外，分泌到细胞外的产物用mGM—CSF依赖株NFS-60细胞检测证明具有生物学活性。结论 成功构建含mGM—CSF真核表达重组质粒，有助于进一步研究其抗肿瘤作用。     

GM-CSF基因免疫治疗小鼠骨髓瘤的实验研究

目的:探讨mGM-CSF基因免疫小鼠是否可以诱发小鼠对肿瘤的免疫应答。方法:用SP2/0肿瘤细胞皮下接种Balb/c小鼠建立肿瘤动物模型,再以皮下或肌肉注射空质粒或重组质粒4次,共400μg。8周后观察小鼠的抑瘤率、肿瘤质量、肿瘤组织淋巴细胞的浸润情况,检测血清中IFN-γ和IL-2浓度,MTT法体外检测CTL、NK细胞活性。结果:基因免疫Balb/c小鼠8周后,重组质粒皮下注射组肿瘤质量[(0.880±0.405)g]轻于对照组[(1.548±0.221)g,P<0.01];重组质粒肌肉注射组肿瘤质量[(0.378±0.411)g]明显轻于对照组[(1.554±0.249)g,P<0.001];重组质粒肌肉注射组肿瘤组织可见淋巴细胞浸润;IFN-γ和IL-2的浓度及CTL、NK细胞活性显著高于对照组。结论:GM-CSF基因免疫能诱发小鼠抗肿瘤作用,肌肉注射比皮下注射效果好。     

Effect of immunization in mice with recombinant DNA encoding the hepatitis C virus structural protein.

Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｙａｎｄｔｈｅｅｆｆｉｃａｃｙｏｆｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓｉｎｍｉｃｅｉｎｏｃｕｌａｔｅｄｗｉｔｈｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄｐＣＤＨＣＶ１ａｎｄｔｏｌａｙａｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒＨＣＶｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｖａｃｃｉｎｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｉｎｔｈｅｆｕｔｕｒｅ－Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＴｈｅｇｅｎｅｆｒａｇｍｅｎｔｃｏｄｉｎｇＣａｎｄＥｒｅｇｉｏｎｓｏｆＨＣＶⅡ（ｔｙｐｅⅠｂ）ｗａｓｉｎｓｅｒｔｅｄｉｎｔｏｐＣＤ…     

NK细胞活性与弓形体感染

<正> 弓形体是一种专性寄生在细胞内的原虫,其感染遍及全球。该病可通过母婴垂直传播,引起先天发育异常,造成脑畸形、缺损,严重时可导致流产或死胎。近年来由于受滋病(AIDS)的发现,大约有5～10％的AIDS病患者合并弓形体病,两者的密切关系已引起国外学者的极大关注。可见对弓形体病的研究就更具有现实意义。而NK(自然杀伤)细胞在抗御肿瘤与病毒感染中起着重要作用,国外学者近几年来用小鼠等动物进行了较多研究。本文仅对弓形体(TP)感染时NK细胞活性变化、有关影响因素和研究现状作一概述。     

巨细胞病毒感染与临床诊治

<正> 1956年由 Smith 等首先以组织培养方法,从死婴的唾液腺中分离出一种病毒,因只能在人纤维母细胞中缓慢增殖,引起细胞增大,出现典型的核内包涵体,故称为巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)或人类巨细胞病毒(HCMV)。根据病毒的形态、化