携带肠道病毒71型中和线性表位重组流感病毒的构建

目的 获得能够携带肠道病毒71型(EV71)中和线性表位的重组流感病毒.方法 通过PCR方法,在流感病毒HA基因中插入EV71中和线性表位序列,获得重组质粒;进行反向遗传学操作,构建重组流感病毒.结果 获得了2个重组质粒pPolⅠ/Ⅱ/WSN-HA-SP55和pPolⅠ/Ⅱ/WSN- HA-SP70,并构建了能够分别携带EV71中和线性表位SP55和SP70的2株重组流感病毒,重组病毒3次传代血凝效价都保持在27和25HAU,具有较好的稳定性.结论 通过反向遗传学操作,构建出携带EV71中和线性表位的重组流感病毒,为研制预防手足口病重组流感病毒载体疫苗奠定基础.     

甲型H1N1流感病毒基因组序列分析及其特性研究

目的 分析甲型H1N1流感病毒的基因组序列特征,阐明该毒株的遗传变异及分子特性.方法 GenBank中获取流感病毒全序列,对各段基因与已知序列进行分析比较,绘制进化树,并分析和预测甲型毒株的致病性、药物敏感性和现有疫苗的预防保护作用.结果 甲型H1N1病毒的HA、PB2、PB1、PA、NP、NS基因与美国本土的猪流感病毒序列具有高度同源性,NA和M基因具有典型的欧亚株系猪流感病毒特征.该病毒具有人传人的分子基础,HA上HA1和HA2裂解位点序列为PSIQSR↓+GLFGAI,尚不具备高致病性流感病毒的特征.病毒对金刚烷胺类药物耐药,而对达菲和扎那米韦敏感.HA片段5个抗原决定区氨基酸序列与人用流感疫苗具有较大差异,推测现有疫苗对预防本次疫情基本无效.结论 甲型H1N1是一种北美和欧亚两种猪流感病毒的混合体,开发针对本病毒的流感疫苗有助于进一步控制疫情蔓延.     

抗戊型肝炎病毒结构蛋白多克隆抗体的制备

戊型肝炎是由戊型肝炎病毒（Hepatitis E Virus,HEV）引起的病毒性肝炎,该疾病主要经肠道传播,广泛流行于亚、非及美洲一些国家,发病例呈全球性分布,是发展中国家较常见的传染病,我国为高发区,人群感染率达17．2％,且呈上升趋势。近年的研究发现,     

含pcHEV乃壳聚糖纳米粒的制备及对小鼠免疫作用的影响

目的将壳聚糖包载含戊型肝炎主要抗原表位基因片段的重组质粒pcHEV23,制备成CS-pcHEV23纳米粒,并对其在小鼠体内的免疫增强效果进行初步研究。方法采用复凝聚法制备CS-pcHEV23纳米粒;检测纳米粒的粒径、包封率及抵抗核酸酶能力;分析壳聚糖与pcHEV23的聚合情况;免疫小鼠,ELISA法检测血清中HEVIgC抗体水平,流式细胞仪检测外周血CD4^＋．CD8^＋T淋巴细胞亚群百分比含量和CD4^＋/CD8＋。结果制备CS-pcHEV霉纳米粒粒径在170-470nm范围内;包封率〉95％;pcHEV。通过静电作用几乎完全被包裹在壳聚糖内;纳米粒能抵抗DNaseI酶降解有效保护pcHEV23。免疫实验表明CS--pcHEV23纳米粒可上词小鼠血清HEVIgG抗体水平,并显著提高外周血CD4^＋T淋巴细胞百分含量和CD4^＋／CD8^＋值。结论壳聚糖能高效装载外源基因pcHEV23,保护其免受核酸酶的降解,有效提高小鼠细胞免疫水平,具有良好的免疫增强作用,作为基因载体具有较大的应用潜力。     

鸡贫血病毒vp3基因的克隆和分子特征

目的 获得来源于浙江地区鸡组织中的鸡贫血病毒(CA)vp3基因并分析其变异情况.方法 根据GenBank登录的vp3序列设计特异引物,利用PCR方法从鸡组织中获得7个CAV的vp3基因克隆,将其克隆到载体进行测序.结果 40份鸡血清中共检出CAV阳性16份,阳性率40.0％.序列测定结果表明,vp3基因长366 bp,...     

H5N6人禽流感病毒分离株序列分析及其生物学特性研究

目的 分析研究H5N6人禽流感病毒基因组序列特征,明确该病毒的分子进化及生物学特性.方法 从GenBank和GISAI中获取人H5N6分离株全序列,通过软件BioEdit7.0.9对各节段基因与其他相关毒株序列进行比对.用软件Mega 5.0,Neighbor-Joining法绘制血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因进化树,并全面分析病毒株的基因组序列特征、病毒进化及来源、传染性、致病性和药物敏感等.结果 H5N6病毒的基因组完全属于禽源特征,根据病毒进化及来源可分为两大类.HA基因都属于H5亚型的2.3.4.4进化支,NA基因都来源于H6N6亚型毒株,属于欧亚谱系.其余6段内部基因分别来自于H9N2亚型或H5亚型2.3.2.1进化支毒株.该病毒尚不能在人与人之间有效传播,呈现高致病性病毒特征,对奥斯他韦敏感,但部分毒株对金刚烷胺类药物耐药.结论 H5N6人禽流感分离株并不属于同一毒株,是由H5N1、H5N2、H6N6、H9N2等亚型毒株通过不同组合而重配产生,需加强对这类病毒及其宿主的监控.     

甲型流感病毒核蛋白单克隆抗体制备及其初步应用

目的 制备甲型流感病毒核蛋白(NP)单克隆抗体,为甲型流感病毒诊断试剂盒以及相关研究提供材料.方法 大肠埃希菌BL21 (DE3)表达NP作为免疫原,免疫Balb/c小鼠后取脾脏细胞与SP2/0细胞融合,筛选获得阳性细胞株,注射小鼠腹腔得到单克隆抗体,纯化后进行Western印迹法、ELISA法、细胞免疫染色和荧光法、双抗夹心ELISA法确定NP抗体的生物学特性,探索应用范围.结果 从Western印迹法、ELISA和细胞免疫染色法的结果可得知,抗NP单克隆抗体可以与免疫原特异性结合,也可以与H1N1、H3N2亚型流感病毒的NP特异性结合,具备检测流感病毒的能力.双抗夹心ELISA法进一步提升了抗体对抗原的检测灵敏度至128 pg.同时,通过细胞免疫荧光法观察到抗体可在细胞内显示NP从细胞核扩散到细胞质的过程.结论 制备的抗体成功检测H1N1、H3N2两种亚型的流感病毒,可作为用于流感防治的流感病毒诊断试剂盒的材料.     

流感病毒介导的抗肿瘤研究进展

随着反向遗传技术的不断完善,流感病毒的改造和利用成为可能.流感病毒具有强传染性,将其改造成携带外源基因的流感病毒载体,有利于转染到目的细胞,特别是肿瘤细胞,为肿瘤基因治疗提供新的手段.同时,由于流感病毒对肿瘤细胞具有凋亡作用,有望将其开发成为肿瘤疫苗及具有基因递送作用的病毒载体用于肿瘤基因治疗.本文就流感病毒的溶瘤作用,流感病毒载体的抗肿瘤及其肿瘤靶向性这几方面的研究做一综述.     

肠道病毒71型感染的药物治疗和疫苗预防

肠道病毒71型(EV71)是引起手足口病的重要病原,能引发严重的神经系统并发症甚至死亡,构成严重的危害,但目前对ET71尚无有效的抗病毒治疗策略.此文就抗EV71的药物、疫苗及RNA干扰技术的研究进展作了综述,为EV71的防治工作提供借鉴.     

动物感染戊型肝炎病毒的研究进展

近期研究发现,戊型肝炎病毒在多种动物中广泛存在,被认为是一种新的人畜共患病。此文针对动物感染戊型肝炎病毒及其人畜共患性方面作了综述。