一种较好的RNA分离制备方法及其在人胚RNA提取中的应用

以钒基核苷酸复合物为核酸酶抑制剂,从人胚组织中制备总RNA,所得产品几乎不含DNA和蛋白质,经过分离Poly(A)~ mRNA,证明制品有合成cDNA的完整功能,方法比较简捷,适于大量制备以满足分离mRNA 之需,并讨论了此法的优缺点。     

人类β—珠蛋白基因5’—1559bp上游转录调控区的重组及表达

目的 探寻人类β－珠蛋白基因5′－帽位上游新转录调控元件。方法：利用重组DNA技术,构建及克隆3人含有人类β－基因不同5‘－帽位上游片段的荧光素酶报告基因重组载体（pGL2-promoter/SB-β^RHB734、pGL2-promoter/SB-β^R AB573、pGL2-promoter/SB-β^RHfB263）,分别将其导入Hela细胞中,采用β-半乳糖苷酶报告β-半乳糖苷酶报告基因为转移效率内对照,空白的荧光素酶基因载体为基础对照,进行荧光素酶活性比较。结果 3个基因片段载体构建符合设计,其相对抑制活性分别为59．74％、80．97％、79．42％。结论 初步提示人类β－基因5‘帽位上游－2132～－1822bp片段及－1822～15559bp片段内可能存在起负调控作用的顺式作用元件（抑制子）,而－2277bp～-2132bp片段间未检出报制子或增强子活性存在。 此初步结果尚需进一步研究证实和阐明其结构与功能的关系。     

用α~(35)SdCTP作为标记物体外反转录合成cDNA

以免珠蛋白 poly(A)~+mRNA 为模板,用α~(35)S dCTP 标记,经逆转录合成第一链cDNA,通过1.4%碱性琼脂糖凝胶电泳后进行放射自显影,并与用~(32)P dCTP 标记合成的 cDNA 比较,获得同样满意的结果,并讨论了本法的优缺点。     

人类β—珠蛋白基因5‘—1559bp上游转录调控区的重组及表达

目的：探讨人类β－珠蛋白基因5‘－帽位上游新转录调控元件;方法：利用重组DNA技术,构建及克隆3个含有人类β－基因不同5‘帽位上游片段的荧光素酶报告基因重组载体（pGL2-promoter/SB-β^RHB734,pGL2-promoter/SB-β^RAB573,pGI2-promoter/SB-β^RHfB263),分别将其导入Hela细胞中,采用β－半乳糖苷酶报告基因为转移效率内对照,空白的荧光素酶基因载体为基础对照,进行荧光素酶活性比较。结果：3个基因片段载体构建符合设计,其相对抑制活性分别为59．74％、80．97％、79．42％;结论：初步提示人类β－基因5‘帽位上游－2132－－1822bp片段及－1822－15559bp片段内可能存在有起负调控作用的顺式作用元件（抑制子）,而－2277bp--2132bp片段间未检出抑制子或增强子活性存在,在初步结果尚需进一步研究证实和阐明其结构与功能的关系。     

一种简易的预杂交体系

一种简易的预杂交体系分子生物学研究室陈汉春，卿科云，杨友云关键词印迹法，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ；预杂交；核酸杂交；方法核酸分子杂交是一项基本的分子生物学研究技术。在进行核酸分子杂交反应之前，必须用含有某些大分子物质的预杂交液，对经核酸印迹转移（Ｓｏｕｔｈｅ...     

高效单链DNA探针在β－珠蛋白基因表达调控研究中的应用

直接以克隆的逆病毒载体为模板，在反应管中加入适当比例的α－３２Ｐ－ｄＡＴＰ及其他三种ｄＮＴＰ，以单引物进行线性聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增，标记与扩增同时进行，经过一轮ＰＣＲ（５０次循环），可得到高度特异及高效的单链ＤＮＡ探针。作者已将其成功地应用于人类β－珠蛋白基因表达调控的研究。