T管引流胆汁回输1例失败教训

患某,女性,７０岁,因右上腹疼痛１年余,经Ｂ超证实为胆总管及左肝内胆管结石。术中切开胆总管上段取出一２ｃｍ×１８ｃｍ结石并于左肝内胆管中取出两粒黄豆大结石,胆总管内经约０８ｃｍ,术中将一１４号导尿管经胆总管十二指肠乳头插入十二指肠内,连同“Ｔ”型管引出体外,作胆汁回输备用。术后前三天“Ｔ”管引流,胆汁约７０ｍｌ／日,术后第四天,将“Ｔ”管与导尿管相连通,次日见胆汁从引流口周围渗出,且出现右上腹胀痛,并有轻微腹膜刺激症。即解除“Ｔ”管与导尿管的连接,接引流袋引流,见引流胆汁约５００～７００ｍｌ…     

高锰酸钾溶液保留灌肠在痔上黏膜环切术后的应用效果

目的探讨痔上黏膜环切术（PPH）术后高锰酸钾溶液保留灌肠的临床价值。方法对2012年3月～2014年3月符合条件需要行PPH者200例随机分为高锰酸钾溶液组（100例）和九华痔疮栓组（100例）,比较两组并发症发生情况、术后住院时间及药物费用。结果两组术后5 d、1个月的并发症发生率比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）;两组术后6个月的并发症发生率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;两组术后住院时间及术后药物费用比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 PPH术后高锰酸钾溶液保留灌肠具有疗效确切、使用方便、治疗费用低的优点。     

VEGF-C基因RNA干扰真核表达载体的构建及其效果鉴定

目的:构建VEGF-C基因RNA干扰(RNAi)的真核细胞表达载体。方法:以VEGF-C为靶基因,以pGenSil-l质粒为载体,设计构建重组体,根据GenBank数据库提供的VEGF-C基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计两条带发夹结构的核苷酸序列,克隆到空载体pGenSil-l中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析,将重组的pGenSil-VEGF-C质粒转染LOVO细胞48小时,检测其对LOVO细胞VEGF-C蛋白与mRNA表达的影响。结果:经酶切鉴定筛选出的重组体测序结果与目的序列完全一致,重组载体显著降低Lovo细胞VEGF-C的蛋白和mRNA表达,重组载体构建成功。结论:利用RNAi技术可成功构建抑制VEGF-C表达的小干扰RNA重组体。     

mTOR信号通路调控HK-Ⅱ表达对结肠癌细胞增殖的影响

目的：探讨mTOR信号通路是否可通过调控HK—Ⅱ蛋白表达的途径来影响结肠癌细胞增殖。方法：Western印迹检测结肠癌细胞mTOR、HK—Ⅱ蛋白表达水平，并观察抑制mTOR信号通路对HK—Ⅱ蛋白表达的影响。采用MTT法检测mTOR和HK—Ⅱ特异性抑制剂作用后结肠癌细胞增殖的变化。结果：mTOR、HK—Ⅱ蛋白在4种结肠癌细胞中均明显表达；抑制mTOR可阻断结肠癌细胞HK—Ⅱ蛋白表达；抑制mTOR和抑制HK—Ⅱ均可明显控制结肠癌细胞增殖，且两者有协同效应。结论：mTOR信号通路可能通过调控HK—Ⅱ的表达影响结肠癌细胞增殖。     

Tiam1和Rac1在大肠癌组织中的表达及其临床意义

目的：观察人大肠癌和正常大肠黏膜组织中T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1（T lymphoma invasion and metastasis inducing factor 1，Tiam1）和RacGTP酶激活蛋白1（Rac GT Pase activating protein1，Rac1）的表达情况并探讨其临床意义。方法：应用SP免疫组化法检测50例经4％中性甲醛固定和石蜡包埋的大肠癌及50例正常大肠黏膜组织标本中Tiam1和Rac1蛋白的表达情况并分析其与大肠癌临床病理参数间的关系。结果：Tiam1和Rac1蛋白在正常大肠黏膜组织中均呈阴性染色（0／50，0），但在大肠癌组织中则呈阳性染色（42／50，84．00％），两者间差异有统计学意义，P=0．003。Tiam1和Rac1蛋白染色阳性率在高分化（9／13，69．23％）和低分化（14／14，100．00％）之间、T1＋T2或Ⅰ＋Ⅱ期（8／13，61．54％）和T3＋T4或Ⅲ＋Ⅳ期（34／37，91．89％）之间、无淋巴结转移（15／22，68．18％）和有淋巴结转移（27／28，96．43％）之间的差异均有统计学意义（P值分别为0．025，0．01，0．007），但Tiam1和Rac1蛋白表达水平与大肠癌患者的性别、年龄、癌变原发部位及癌肿大小无关（P值分别为0．686，0．975，0．791，0．709），差异无统计学意义。结论：Tiam1和Rac1蛋白的表达与人大肠癌浸润和转移密切相关。     

抑制HK-Ⅱ对人结肠癌细胞增殖和化疗敏感性的影响及机制

目的：探讨抑制HK-Ⅱ对人结肠癌细胞增殖和化疗敏感性的影响及可能机制.方法：应用免疫组织化学法检测HK-Ⅱ在人结肠癌细胞中的表达;采用MTT法观察HK-Ⅱ抑制剂（3-BrPA）对人结肠癌细胞增殖的影响和化疗增敏效应;通过Hoechst 33258染色,用共聚焦激光扫描显微镜观察3-BrPA诱导的细胞凋亡;用流式细胞术、紫外分光光度计分别检测细胞死亡率、线粒体膜电位和线粒体膜通透转换孔（PTP）开放的变化.结果：HK-Ⅱ在人结肠癌细胞中阳性表达.3-BrPA能明显抑制人结肠癌细胞增殖,小剂量3-BrPA增加化疗敏感性.3-BrPA可诱导结肠癌细胞凋亡,引起线粒体膜电位下降和PTP开放.结论：抑制HK-Ⅱ可能是通过影响线粒体膜电位和PTP来发挥抗肿瘤作用.     

结肠癌组织中Tiam1的表达与淋巴管生成之间的关系

目的:我们的实验旨在探讨T淋巴瘤侵袭转移基因1(T-cell lymphoma invasion and metastasis1,Tiam1)与结肠癌淋巴管生成的关系。方法:应用SP免疫组化法检测50例经4%甲醛固定、石蜡包埋结肠癌组织中Ti-am1、VEGF-C/D以及淋巴管密度(LMVD)的表达情况。结果:Tiam1阳性表达组VEGF-C阳性率为64.3%,Ti-am1阴性表达组VEGF-C阳性率为25.0%,二者差异有统计学意义,P=0.039;Tiam1阳性表达组LMVD为11.35±3.34,Tiam1阴性表达组LMVD为7.38±2.27,二者差异有统计学意义,P=0.002。结论:Tiam1过量表达可能与结肠癌淋巴管生成有关。     

糖皮质激素受体在结肠癌中的表达及临床意义

目的:研究糖皮质激素受体(GR)在结肠癌组织中的表达及其与核转录因子(NF-κB)和临床病理参数的关系。方法:运用免疫组化染色法检测61例结肠癌(包括42例不伴、19例伴淋巴结转移的原发灶)GR和NF-κB的表达情况。结果:在61例结肠癌组织中GR表达阳性率为57.4%(35/61),在高、中分化的结肠癌GR阳性率64.6%(31/48),明显高于低分化的30.8%(4/13);NF-κB在结肠癌中的阳性率为65.6%(40/61),与GR表达呈正相关(r=0.352,P=0.005)。结论:GR在结肠癌中表达可能与肿瘤的分化相关,与患者性别、年龄、肿瘤部位、Dukes分期及淋巴转移无关。GR将可能作为结肠癌病情发展和指导临床药物治疗的标记物之一。     

RNA干扰Neuropilins-2基因真核表达载体的构建及其鉴定

目的 构建Neuropilins-2(NRP2)基因RNA干扰(RNAi)的真核细胞表达载体.方法 以NRP2为靶基因,以pGenSil-l质粒为载体,设计构件重组体,根据GenBank数据库提供的NRP2基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计两条带发夹结构的核苷酸序列,克隆到空载体pGenSil-l中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析.重组pGenSil-NRP2载体转染LOVO细胞48 h,收获细胞,采用Western blotting检测其NRP2蛋白表达.结果 经酶切鉴定筛选出的重组体测序结果与目的序列完全一致,重组载体构建成功.重组体pGenSil-NRP2转染LOVO细胞48 h后NRP2蛋白表达显著降低.结论 利用RNAi技术可成功构建抑制NRP2表达的小干扰RNA重组体.     

蛋白激酶C在结肠癌多细胞耐药中的实验研究

目的：探讨蛋白激酶C（protein kinase C,PKC）在结肠癌细胞多细胞耐药中的作用。方法：采用体外三维细胞培养的方法,通过应用不同剂量PKC抑制剂Staurosporine（SP）对三维（3D）培养结肠癌HT-29细胞药物敏感性、核因子-κB（NF-κB）活性及PKC活性的影响的研究,探讨PKC在结肠癌细胞群集耐药中的作用。结果：3D培养结肠癌细胞中PKC、NF-κB活性较二维（2D）培养细胞明显增高,氟尿嘧啶（5-FU）的药物敏感性降低;SP不同浓度处理HT-29球形细胞可抑制其PKC及NF-κB活性,对5-FU的药物敏感性增加,在一定浓度范围内,随着SP浓度的增加,抑制作用逐渐增强,存在量效关系。结论：PKC在结肠癌细胞群集耐药中有一定作用,抑制PKC活性,可增加结肠癌球形细胞对5-FU的敏感性。