人血管抑素基因工程菌发酵条件的初步研究

目的：探讨发酵条件对大肠杆菌工程菌表达重组人血管抑素（ｒｈＡＧＮ）的影响。方法：应用摇瓶和发酵罐发酵试验观察不同诱导时机和诱导时间以及ｐＨ、通气量等对ｒｈＡＧＮ表达量的影响。结果：（１）工程菌Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＨ５α（ｐＢＶＡ２）在３０℃培养至Ａ６００ｎｍ为０．３～０．５时于４２℃诱导４ｈｒｈＡＧＮ表达量最高,约为２１２ｍｇ／Ｌ;（２）１５Ｌ发酵罐发酵参数为ｐＨ７．２,搅拌转速５００ｒ／ｍｉｎ,通气     

人纤溶酶原kringle5功能区基因在大肠杆菌中克隆和表达

目的:构建含有人纤溶酶原kringle5功能区基因的表达质粒,了解在E.coli中表达情况。方法:采用基因工程技术将人纤溶酶原kringle5功能区基因插入载体PBV220E.coRI位点,再转化到E.coliTGI中,SDS-PAGE观察基因表达。结果:构建出表达质粒PBVK5,42℃诱导获得表达。结论:人纤溶酶原kringle5功能区基因表达产物以可溶性蛋白形式存在,表达量占菌体总蛋白9.8%。     

人纤溶酶原K1-3基因的表达及抗肿瘤作用研究

目的：研究人纤溶酶原K1-3基因的原核表达及其产物K1-3蛋白的抗肿瘤活性.方法：构建含K1-3基因的表达载体pBV-K13;转化E.coli DH5α;热诱导表达菌株E.coli DH5α（pBV-K13）的K1-3基因表达;表达产物经溶解、复性和纯化后进行鸡胚绒毛尿囊膜（Chorioallantoic membrane,CAM）活性分析和小鼠B16黑色素瘤抑制实验.结果：SDS-PAGE和Western blot分析结果证实K1-3基因在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物对人纤溶酶原抗血清具有特异免疫活性,并抑制CAM毛细血管生成及小鼠B16黑色素瘤生长.结论：原核表达的K1-3蛋白具有抑制血管生成和抗肿瘤作用.     

CCR5亲和短肽抗肿瘤活性研究

目的 探讨趋化因子受体CCR5亲和短肽（AFDWTFVPSLIL）对肿瘤生成作用的影响。方法 通过MTT实验、细胞凋亡实验检测短肽对血管内皮细胞生长的影响，通过鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）实验检测短肽对血管生成的影响，通过体内抑瘤实验检测短肽对实体瘤生长的作用。结果 短肽能通过诱导人脐静脉血管内皮细胞的凋亡来抑制内皮细胞的生长；并能抑制CAM膜的血管生成。短肽也能在体内抑制小鼠B16黑色素瘤的生长活性，其抑瘤率达68．6％。结论 初步证明短肽具有抗肿瘤生成作用，且这种作用可能是通过抑制肿瘤的血管生成来实现。     

脂质体介导人纤溶酶原k1-3基因诱导人肝癌细胞凋亡

目的观察脂质体介导人纤溶酶原k1-3基因诱导体外培养人肝癌细胞凋亡的效应。方法构建人纤溶酶原k1-3基因真核表达载体peDNA—k13并以阳离子脂质体介导peDNA—k13转染体外培养人肝癌细胞,经Heochst 33258染色后,在荧光显微镜下观察细胞核的形态。结果转染pcDNA—k13组可见致密浓染的凋亡细胞核。结论脂质体介导人纤溶酶原k1-3基因能诱导体外培养人肝癌细胞凋亡。