微血管内皮细胞的分离、纯化和功能特性

近年来的研究表明，微血管内皮细胞在形态、表型和功能等方面都不同于大血管内皮细胞，因此，采用微血管内皮细胞，而不是脐静脉内皮细胞来研究发生于组织器官水平的病变已经成为一种共识。然而，由于细胞分离培养技术的限制，微血管内皮的研究在我国还是一个薄弱的研究领域。近年来随着微血管内皮细胞分离、纯化、培养技术的提高，各种不同组织器官的微血管内皮细胞相继培养成功。利用体外培养的微血管内皮细胞作为细胞模型来研究各种疾病的发病机制已经成为医学研究的重要手段。本文回顾了近年来的相关文献，就微血管内皮细胞的分离培养、鉴定及不同组织器官微血管内皮细胞的功能特性作一简要综述。     

抗肿瘤血管生成研究的现状与有待解决的问题

 血管生成是指在原有组织血管结构基础上形成新血管结构的过程。1971年Folkman[1]提出了肿瘤血管依赖性生长的概念，并把肿瘤生长分为非血管期和血管期两个生长阶段。固体肿瘤在血管生成前，肿瘤体积一般不超过3 mm3。随着肿瘤细胞的不断增殖，肿瘤组织出现缺氧、代谢产物堆积、pH值改变等，这些因素刺激肿瘤细胞、周围间质细胞和淋巴细胞分泌各种促血管生长刺激因子，通过诱导血管基底膜降解和内皮细胞增殖，启动新生血管的生成。 肿瘤一旦血管化, 不仅生长速度加快，而且容易发生转移，说明血管生成对肿瘤的生长和转移都起到关键作用。因此,在过去30多年中，人们致力于对肿瘤血管生成机制的研究，并试图通过抑制和破坏肿瘤血管生成来建立一种治疗肿瘤的新方法。......     

P-糖蛋白抑制剂对两性霉素B血脑屏障转运的作用

目的 探讨P-糖蛋白抑制剂对两性霉素B(AmB)血脑屏障转运的影响.方法 应用小鼠脑血管内皮细胞建立体外血脑屏障模型,选取维拉帕米作为P-糖蛋白抑制剂,AmB作为受试底物,经细胞毒性实验选定合适的温育时间及药物浓度,分别进行不同时间点的AmB细胞摄取实验及不同维拉帕米浓度的AmB细胞摄取实验.组间均数比较采用单因素方差分析,均数两两比较采用Bonferroni检验.结果 AmB的血脑屏障转运随时间延长不断积累,与同一时间点对照组相比,抑制剂组在90 min(t=6.753,P=0.001)、120 min(t=3.574,P=0.016)、150 min(t=4.759,P=0.005)处AmB细胞摄取水平明显升高,其余时间点两组间差异无统计学意义.与阴性对照组相比,AmB细胞摄取水平在不同浓度维拉帕米组(2、5、10、50、75和100μmol/L)均有显著提高(P=0.000、0.014、0.000、0.014、0.000、0.000),且随维拉帕米浓度升高增加幅度更明显.结论 P-糖蛋白抑制剂维拉帕米可提高脑毛细血管内皮细胞对AmB的摄取作用,提示P-糖蛋白参与血脑屏障AmB的转运.     

黏附分子αvβ3和αvβ5介导肿瘤细胞与肿瘤内皮细胞的黏附

目的 体外分析黏附分子αvβ3和αvβ5及其配体Del-1、L1在肿瘤细胞-内皮细胞黏附中的作用.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞分析比较正常肝窦内皮细胞(LSEC)和肝癌的血管内皮细胞T3A上细胞间黏附分子1(ICAM-1)、αvβ3和αvβ5的表达以及缺氧对其表达的调控.分别用RT-PCR和Western blot方法分析6种肿瘤细胞Del-1和L1的表达及缺氧对其表达的调控.使用连续光谱荧光测定仪定量肿瘤细胞在LSEC和T3A上的黏附,并分析抗不同黏附分子的抗体和siRNA对肿瘤细胞一内皮细胞黏附的阻断作用.结果 T3A细胞αvβ3和αvβ5的基础表达高于LSEC,而ICAM-1的基础表达低于LSEC.缺氧上调两种内皮细胞αvβ3和αvβ5的表达,而ICAM-1表达仅在LSEC中升高.在不同肿瘤细胞中,Del-1和L1的基础表达存在明显差异,并且在缺氧条件下受到明显不同的调节.Del-1和L1高表达的肿瘤细胞在T3A细胞的黏附明显高于LSEC,并且在缺氧条件下黏附明显增加,这种黏附可以被抗αvβ3、αvβ5的抗体或沉默β3和β5的小干扰RNA(siRNA)阻断.结论 细胞黏附分子αvβ3、αvβ5及其配体在肿瘤细胞-肿瘤内皮细胞的黏附过程中起重要介导作用.     

干细胞向胰岛素分泌细胞诱导分化的研究进展

近年来,糖尿病的发病率不断上升,而且发病更趋年轻化。文献报道:全世界的糖尿病患者已超过2亿,并且以每年200万人的速度增加。我国的糖尿病患者已经超过4000万,预计到2010年将达到6000万人,其中Ⅰ型糖尿病占5%左右。糖尿病患者虽然采用胰岛素治疗在一定程度上能够改善患者的糖代谢紊乱,然而长期的胰岛素注射不仅给患者带来不便,并且不能有效地防止或逆转糖尿病引起的微血管病变及其并发症。胰岛移植不仅能够纠正糖代谢紊乱,而且还能有效地防止或逆转糖尿病引起的微血管病变及其并发症。     

癌细胞和人血管内皮粘附与器官特异转移相关

目的：检测5种不同类型的人肿瘤细胞系与4种不同采源的人微血管内皮的粘附，并探讨粘附作用与肿瘤器官特异性转移的相关性。方法：人微血管内皮培养形成完全汇合的静止内皮单层后，与Calcein AM标记人肿瘤细胞系进行粘附测定。结果：8种食管癌细胞系中，有6种与人肺内皮的粘附显著强于与肝窭内皮的粘附；7种食管癌细胞系与人正常食管厦食管癌内皮的粘附均强于与人正常肺内皮和肝窭内皮的粘附．这与食管癌临床上肺转移多于肝转移，但相对于远处转移，更倾向于食管内侵袭播散性转移的特征一致。4种结肠癌细胞系与人肝窦内皮粘附均显著强于与人肺内皮和食管正常内皮．与临床上结肠癌主要发生肝转移的特征一致。肝癌、胃癌、肺癌细胞系与内皮的粘附也与临床上转移特征一致。结论：不同组织类型肿瘤细胞与器官采源不同的人内皮细胞的粘附能力具有明显的组织特异性和选择性，且这种粘附特性与临床上肿瘤的组织特异性转移密切相关。阻断这种粘附作用有可能治疗肿瘤转移。     

Tet-on系统对胰岛细胞瘤中TRB3基因的表达调控作用

目的构建Tet-on系统可控表达TRB3基因的胰岛细胞瘤细胞株。方法通过Tet-on系统将TRB3质粒转染INS-rβ（r9）细胞中，经潮霉素筛选，克隆扩增得到可诱导表达TRB3基因的细胞系。采用实时定量RT-PCR、细胞免疫化学和Western Blot检测该基因表达的可诱导性。结果三种检测方法都显示，500ng／ml DOX诱导48h可使转染的r9细胞中TRB3基因表达达到峰值，mRNA表达可上调60倍。结论通过本研究结果得到可控的TRB3高表达细胞株，为进一步研究该基因在胰腺肿瘤细胞中的功能提供了良好的细胞模型。     

清开灵注射液对血脑屏障模型通透性的影响

目的通过观察清开灵注射液对血脑屏障（BBB）模型通透性的影响,探究其抗脑缺血再灌注损伤作用的可能机制及靶点。方法采用细胞插入器培养单层脑微血管内皮细胞,建立体外BBB模型,三气培养箱中1%O2模拟缺氧培养24 h,分为正常组、缺氧组、清开灵小剂量组和大剂量组,通过对跨内皮细胞电阻（TEER）和辣根过氧化物酶（HRP）透过率的测定,观察清开灵注射液对缺氧损伤BBB通透性的影响。结果清开灵注射液可改善缺氧对BBB造成的损伤,提高TEER,降低跨内皮细胞通透性,并且有剂量依赖的趋势,清开灵注射液大剂量组与缺氧组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）,清开灵注射液小剂量组改善作用虽不如大剂量组显著,但亦能减少HRP透过BBB（P〈0.05）。结论清开灵注射液能有效改善缺氧损伤造成的BBB功能受损。     

人胰岛的分离纯化和功能评价

目的 应用Ricordi人胰岛分离技术分离和纯化人的胰岛,并进行功能和安全性的评价.方法 获得6例成人尸体胰腺组织供体,采用胶原酶消化法及密度梯度离心法分离和纯化胰岛,并分析胰岛的数量、纯度和活力.采用免疫荧光法分析胰岛内分泌细胞的组成和分布;检测葡萄糖刺激的胰岛素分泌和胰岛移植后的动物血糖水平.并对分离胰岛的安全性指标进行评价.结果 分离纯化后的胰岛数量为(22.9±3.1)万IEQ,纯度为(59.0 ±8.9)%,活力为(89.0±3.0)%.免疫荧光显示,胰岛由4种内分泌细胞组成并呈正常分布.葡萄糖刺激胰岛素释放的刺激指数为8.1 ±4.0.胰岛移植于糖尿病裸鼠后,血糖在3 d后降至正常水平并维持超过30 d.分离胰岛样本的各项安全性指标在规定范围之内.结论 采用Ricordi人胰岛分离技术分离和纯化的胰岛在形态、结构、数量、纯度、活力、体内外功能以及安全性方面都达到临床胰岛移植的标准,为开展临床胰岛移植奠定了基础.