医学研究生自主性减弱的表现及对策

医学研究生的培养是高素质综合型医学人才培养的重点,近年来研究生出现自主性减弱问题,主要表现为获取学科前沿进展的主动性不强,科研课题依赖导师项目,科学研究过程独立性欠缺以及拖延行为。本文针对这些问题提出相应的解决策略,如强调研究生带教,开展研讨会,鼓励研究生创新课题设计,夯实理论基础与实验技术,设定计划解决拖延等。     

RNAi沉默Sp3基因对肝癌HepG2细胞增殖的影响

目的:采用基因沉默和慢病毒转染技术,沉默人肝癌细胞HepG2中特异蛋白3(specificity protein 3,Sp3)的表达,观察沉默Sp3基因后的肝细胞的增殖能力变化.方法:采用Sp3-siRNA慢病毒转染人肝癌细胞HepG2,通过免疫印迹法和PCR技术检测Sp3的表达以验证转染效果,通过MTT检测细胞生长曲线和流式细胞技术测定细胞周期.结果:Western blot实验表明,实验组的Sp3表达量明显少于空白组和阴性对照组(0.37±0.08 vs 0.83±0.17,0.66±0.13,F=8.442,均P<0.05).RT-PCR也得到相同的结果(0.47±0.05 vs 0.74±0.08,0.70±0.16,F=7.322,均P<0.05).MTT实验结果显示,与空白对照和阴性对照组相比,实验组细胞在48、72和96h时的增殖明显受到抑制(0.28±0.18 vs 0.34±0.19,0.35±0.07,F=3.888;0.57±0.11 vs 0.84±0.05,0.74±0.08,F=12.721;0.72±18.1 vs 0.98±0.05,0.93±0.9,F=6.342,均P<0.05).流式细胞术结果显示实验组细胞主要分布在G1期.结论:RNAi沉默Sp3基因导致人肝癌HepG2细胞体外增殖能力下降.     

转录因子S p3在肝细胞癌中的表达意义

目的：研究转录因子Sp3（Sp3）在肝细胞癌（HCC）发生、发展及预后中的作用。方法采用Western blot法和RT‐PCR法检测该院49例HCC组织及其癌旁肝组织中Sp3和β‐Catenin的表达情况,分析二者在 HCC和癌旁肝组织中的表达差异、二者的表达与 HCC临床病理特征的关系,以及Sp3与预后的关系。结果 Western blot和RT‐PCR法的结果均显示：（1）Sp3在HCC中的表达高于癌旁肝组织,差异有统计学意义（P＜0．05）;（2）β‐Catenin在HCC中的表达高于癌旁肝组织,差异有统计学意义（P＜0．05）;（3）Sp3和β‐Catenin在HCC中的表达与肿瘤直径和分级相关;（4）Sp3和β‐Catenin在 HCC中的表达呈正相关（Western blot ：r＝0．681、P＝0．000;RT‐PCR：r＝0．641,P＝0．000）,均与肿瘤大小和分化程度有关;（5）Sp3高表达的病例预后较低表达的病例差（P＜0．05）。结论 Sp3在 HCC发生中起促进作用且与肿瘤恶性程度相关;Wnt通路可能是其参与 HCC发生、发展的途径。     

不同冻存液冻存慢病毒转染后稳转肝癌细胞株 HepG2的效果比较

目的筛选冻存慢病毒转染后稳转肝癌细胞株HepG2的最佳冻存液。方法采用甘油和二甲基亚砜(DMSO)2种不同冻存保护剂,以4种不同比例的冻存液分别冻存慢病毒转染后肝癌细胞HepG2及未转染的HepG2细胞,并对上述细胞复苏后的存活率及增殖能力进行比较分析。结果采用甘油为冻存保护剂时,冻存液[DMEM∶胎牛血清(FBS)∶甘油]比例为0∶9∶1的转染后细胞存活率最高(P=0.001);未转染细胞存活率与冻存液比例无关(P=0.293)。采用DMSO为冻存保护剂时,转染后细胞存活率为0%;未转染细胞存活率在60%及以上,且与冻存液比例无关(P=0.487)。冻存液中血清含量越高,复苏后细胞的增殖能力越强(P<0.05)。结论冻存慢病毒转染后的稳转肝癌细胞株HepG2的最佳冻存液为90%FBS+10%甘油。     

PCR－SSCP法检测胃癌P53基因突变

应用多聚酶链反应和单链构象多态性分析法（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）检测１９例冰冻胃癌组织Ｐ５３基因第７外显子ＤＮＡ片段扩增及突变情况，同时应用免疫组化法（ＩＨＣ）检测相应胃癌石蜡包埋组织中Ｐ５３蛋白的表达。结果发现４例（２１．１％）胃癌组织Ｐ５３基因第７外显子发生突变。而Ｐ５３蛋白表达率达４７．４％（９／１９）。Ｐ５３基因突变及Ｐ５３蛋白表达与肿瘤发生部位、组织学类型、淋巴结转移及肿瘤分期无关（Ｐ＞０．０５）。提示在胃癌发生和演变过程中，Ｐ５３基因突变是重要事件，其中第７外显子是突变热区之一。     

中国人黏膜相关淋巴组织结外边缘区淋巴瘤染色体易位的临床研究

目的 探讨中国人不同部位黏膜相关淋巴组织结外边缘区淋巴瘤(MALTL)中分子遗传学异常的发生情况.方法 应用间期荧光原位杂交(FISH)方法,检测217例不同部位MALTL的t(11;18)(q21;q21)/API2-MALT1、t(1;14)(p22;q32)/IGH-BCL10、t(14;18)(q32;q21)/IGH-MALT1和涉及BCL6基因的染色体易位.结果 染色体易位的总发生率为21%(46/217).全部病例共检测出4种主要染色体异常,其中第1种13%(29/217)为t(11;18)(q21;q21)/API2-MALT1,最常见的发生部位是肺47%(8/17)和小肠29%(4/14),其次为唾液腺1/6例、胃14%(12/84)和眼附属器6%(4/68).第2种1%(3/217)为t(1;14)(p22;q32)/IGH-BCL10,仪见于肺12%(2/17)和胃1%(1/84).第3种1%(2/217)为t(14;18)(q32;q21)/IGH-MALTI,仅见于肺6%(1/17)和眼附属器2%(1/68).第4种2%(4/217)为BCL6基因涉及的染色体易位,见于唾液腺1/6例和胃4%(3/84).4%(8/217)为涉及IGH基因但未知与其易位的伙伴基因的染色体易位.结论 以上4种染色体易位在中国人不同解剖部位的MALTL中的发生率有明显不同,与欧美国家所报道的染色体易位的发生率相比较,分布稍有差异.     

miR-204对乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨miR-204在人乳腺癌组织及MCF-7细胞中的表达水平及其对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法 提取癌症和肿瘤基因组图谱（the cancer genome atlas,TCGA）数据库中浸润性乳腺癌的miR-204相关数据进行汇总,转染miR-204过表达病毒,筛选稳定转染细胞株并通过RT-qPCR检测转染率,MTT法检测过表达miR-204后乳腺癌MCF-7细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。 结果 miR-204在浸润性乳腺癌组织中的表达水平较癌旁组织明显下调（P＜0.001）,且与淋巴结转移和远处转移相关（P＜0.05）。过表达miR-204能够抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力（P＜0.05）;miR-204上调后,细胞凋亡率达到（34.7±1.9）%,细胞凋亡能力明显增强（P＜0.001）。结论 miR-204可抑制乳腺癌细胞增殖并介导细胞凋亡。     

乳腺癌中ALDH1的表达及其与细胞凋亡、caspase-3的关系

目的探讨乳腺癌中乙醛脱氢酶1(aldehyde dehydrogenase class 1,ALDH1)的表达及其与细胞凋亡、caspase-3的关系。方法应用免疫组化SP法检测ALDH1和caspase-3在67例浸润性乳腺导管癌组织中的表达,应用TUNEL法检测组织中的细胞凋亡。结果 (1)乳腺癌组织中ALDH1阳性率为68.7%,与年龄负相关,与肿瘤直径、TNM分期正相关。caspase-3阳性率为62.7%,与组织学分级、TNM分期和ER正相关。(2)ALDH1阴性组凋亡指数(AI)=(3.45±2.77)%,高于ALDH1阳性组(1.78±1.74)%;乳腺癌中caspase-3阴性组AI=(1.58±1.51)%低于阳性组(2.74±2.49)%;ALDH1与caspase-3表达无关。结论 ALDH1参与细胞凋亡的作用机制可能与caspase-3无关,ALDH1蛋白在癌组织异常表达可能为临床治疗提供潜在的靶点。