慢性髓系白血病骨髓间充质干细胞整联蛋白表达变化研究

为研究慢性期慢性髓系白血病（CML）患者骨髓间充质干细胞（BMMSC）的生长活性及其整联蛋白（integrins）的表达水平，并探讨BMMSC在CML发病中的作用，以慢性期CML患者为实验组，健康人为对照组，抽取骨髓液分离单个核细胞行BMMSC体外培养，动态观察细胞形态并进行计数、绘制生长曲线；取第3、4代BMMSC提取总RNA，逆转录，real—timePCR法检测integrin mRNA表达水平。结果表明：慢性期CML患者BMMSC生长活性较健康人无明显差异；实验组BMMSC表达integrin mRNA水平较对照组显著升高（P〈0．05）。结论：BMMSCs中integrin高表达影响CML发病。     

骨髓单个核细胞染色体核型及血清LDH、α-HBDH变化与慢性粒细胞白血病患者预后的关系

目的 探讨慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓单个核细胞染色体核型及血清乳酸脱氢酶(LDH)、α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)变化与其预后的关系.方法 采用生化法检测不同病期CML患者的血清LDH、α-HB-DH,取其骨髓有核细胞用R带分析法作细胞染色体分析.结果 CML加速期或急变期组复杂核型Ph1以外染色体出现频率及血清LDH、α-HBDH明显高于慢性期组,慢性期组LDH、α-HBDH变化与骨髓幼稚细胞数无相关性;加速期或急变期组二者变化与骨髓幼稚细胞数呈正相关(r=0.699、0.599,P均<0.01).结论 LDH、α-HBDH对CML疾病分期有判断价值,对病情及预后的判断以细胞遗传学检测更准确.     

3例复发难治性B细胞急性淋巴细胞白血病的治疗及移植物抗宿主病预防

目的 通过对3例复发难治性B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)患者的治疗方法及移植治疗后移植物抗宿主病(GVHD)的预防方法分析,总结这类疾病有效治疗方案及预防方案.方法 3例复发难治性B-ALL患者中2例为费城染色体Ph(+),在确定半相合供者后,给予CD19靶向嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞桥接治疗,缓解后接受亲缘半相合异基因造血干细胞移植(haplo-HSCT),采用造血干细胞移植方案GIAC进行移植治疗,同时在移植后给予小剂量环磷酰胺(PTCY,14.5 mg/kg体质量)预防GVHD.结果 3例B-ALL患者CAR-T细胞治疗后均获得了完全缓解(CR),其中2例达分子生物学缓解,1例达流式MRD阴性缓解;其中2例患者顺利接受haplo-HSCT,回输后均成功供者细胞造血重建,无严重GVHD,白血病疾病状态稳定.另1例伴有p.T315I突变的Ph(+)-ALL患者,CAR-T细胞治疗后获得短暂分子生物学缓解,但在移植准备过程中再次复发后失去移植机会.结论 CAR-T治疗后序贯亲缘半相合移植治疗复发难治性B-ALL患者效果良好;小剂量PTCY联合GIAC移植方案可以安全有效地预防GVHD的发生;CAR-T细胞治疗后短期再次复发的B-ALL患者目前仍然治疗困难.     

染色体核型及血清碱性磷酸酶水平在慢性粒细胞白血病病情预测中作用

目的 研究慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓单个核细胞染色体核型与血清碱性磷酸酶(ALP)水平间变化关系,探讨细胞遗传学变化及ALP水平在患者病情及预后判断中的价值.方法 选择不同时期CML患者,检测其血清ALP,并取骨髓有核细胞采用直接法或24小时培养法、R带显色技术作染色体分析.结果 CML患者ALP水平高于正常对照组,加速期急变期患者复杂核型出现率及血清ALP水平显著高于慢性期患者,且ALP水平与髓内幼稚细胞数水平呈正相关,PH1阳性核型CML患者与复杂核型CML患者血清ALP水平差别不明显.结论 CML患者血清ALP水平及染色体复杂核型反应该期患者疾病特征,对CML疾病分期、预后判断有价值,两者间的一致性有待进一步研究.     

骨髓增生异常综合征患者病态造血及细胞遗传学变化及其与预后的关系

目的探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者造血细胞中病态造血状况与骨髓单个核细胞遗传学异常变化特征,判断其在该类疾病诊断及预后中的作用和价值。方法经骨髓涂片检查及骨髓组织切片活检确诊的57例MDS患者同时进行骨髓单个核细胞直接培养法R带显带技术进行染色体核型分析,并观察该类患者骨髓造血细胞病态造血、染色体核型异常与患者生存期关系。结果 MDS的病态造血以三系病态造血为多见,其骨髓活检阳性检出率高,尤其对巨核细胞病态造血检出更突出。MDS患者多易出现染色体异常,常见为5 q-、11 q-、20 q-、+8、-7和染色体异位、复杂异常核型,复杂异常染色体核型患者生存期明显缩短。结论骨髓活检是准确反映MDS患者病态造血的特异性检查方法。三系病态造血及复杂异常染色体患者转为急性白血病概率大、生存期短,预后差。     

骨髓间充质干细胞与骨髓瘤细胞共培养时EphB4/ephrinB2表达异常

目的:研究正常骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)在与骨髓瘤细胞株U266?RPMI8226共培养过程中,骨髓瘤细胞对MSC EphB4/ephrinB2表达的影响?方法:应用Transwell培养体系,将正常骨髓MSC分别与骨髓瘤细胞株U266?RPMI8226细胞共培养7?12 d后分别应用实时定量RT-PCR和细胞免疫化学方法检测骨髓MSC的EphB4/ephrinB2 mRNA和蛋白表达水平?结果:骨髓MSC与U266?RPMI8226共培养后,与对照组MSC相比,生长和形态未见明显改变,应用实时定量RT-PCR方法检测骨髓MSC EphB4/ephrinB2的mRNA水平较对照组均降低,在共培养7 d的时间点上除EphB4在RPMI8226共培养组与对照组差异无统计学意义,其余组间差异均有统计学意义(P < 0.05),在12 d上差异无统计学意义(P > 0.05)?细胞免疫化学结果显示共培养组MSC 胞膜胞浆 EphB4/ephrinB2 表达下降?结论:骨髓瘤细胞株U266?RPMI8226在与正常骨髓MSC共培养后,诱导骨髓MSC EphB4/ephrinB2表达的下调,可能通过MSC成骨-破骨活动的脱耦合,参与骨髓瘤骨病的发生?     

慢性粒细胞白血病患者血清乳酸脱氢酶、α-羟丁酸脱氢酶、碱性磷酸酶水平变化的临床意义

目的:观察慢性粒细胞白血病(CML)患者血清乳酸脱氢酶(LDH),α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)、碱性磷酸酶(ALP)水平变化,探讨该变化与临床的关系.方法:选择不同病期CML患者,采用生化法检测其血清LDH,HBDH,ALP,并与正常人进行比较.结果:加速期急变期患者LDH,HBDH,ALP水平显著高于慢性期患者及正常人,慢性期患者LDH,HBDH高于正常人,两组CML患者LDH和HBDH水平与外周血幼稚细胞数、LDH与HBDH呈正相关.结论:ALP,LDH,HBDH水平可反映患者体内白血病细胞负荷,对CML病情严重程度有判断价值.     

三氧化二砷对慢性粒细胞白血病骨髓间质干细胞活性的影响

目的探讨三氧化二砷（ATO）体外对骨髓间质干细胞（BMMSCs）的作用及其对慢性粒细胞自血病（CML）的治疗作用。方法体外培养法分离CML患者BMMSCs,培养体系中加入ATO,ATO终浓度分别为0、1．0、2．5、5．0μmol/L,MTT法测定BMMSCs生长抑制率;裂解BMMSCs并提取总RNA,RealtimePCR法测定其干细胞因子（SCF）基因表达水平并进行方差分析比较。结果2．5、5．0μmol/L ATO浓度组抑制率大于1．0μmol/L ATO浓度组（P均〈0．05）,1．0、2．5μmol/L ATO浓度组SCF基因表达水平较空白对照组显著升高（P均〈0．01）,1．0、2．5μmol/L ATO浓度组SCF基因表达水平比较差异亦有统计学意义（P〈0．01）。结论ATO显著抑制BMMSCs生长活性,低浓度ATO促使BMMSCs高表达SCF,从而拮抗ATO的诱导凋亡作用;高浓度ATO使BMMSCs表达SCF降低,有利于细胞凋亡。