更年安片质量分析

目的:通过对更年安片119批次样品进行标准检验及探索性研究,对该品种的质量及标准状况作出总体分析及评价。方法:标准检验依据中国药典2005年版增补本,包括TLC鉴别及HPLC含量测定。探索性研究采用显微鉴别法以检查处方中原粉投料药材;对何首乌及五味子的薄层色谱鉴别进行再研究;建立了在同一色谱条件下测定更年安片中6个化学成分(2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、毛蕊花糖苷、仙茅苷、丹皮酚、哈巴俄苷、五味子醇甲)已明确)的HPLC方法。结果:按现行质量标准检验,合格率100%;按探索性研究检验,提高了方法的可控性。结论:探索性研究增加了标准的专属性、可控性及安全性,为进一步修订药品标准、控制药品质量提供参考。     

仙茅苷对血管性痴呆模型大鼠海马区Caspase-3、PARP-1和雌激素受体表达的作用

目的:研究仙茅苷对血管性痴呆(VD)模型大鼠海马区Caspase-3、PARP-1和雌激素受体(ER)表达的作用.方法:确立SD大鼠对照组后,用构建的血管性痴呆模型大鼠随机分成模型组、药物仙茅苷低(24 mg/kg)和高剂量(72 mg/kg)组(予以仙茅苷灌胃4周),每组8只.用药结束后,按设计用Morris水迷宫测试大鼠空间学习记忆功能;流式细胞术分析海马区神经细胞元凋亡;Caspase-3、PARP-1和ER蛋白水平用Western Blot测定;Caspase-3、PARP-1和ER mRNA表达用Realtime PCR检测.结果:Morris水迷宫试验结果显示,药物组和模型组大鼠逃避潜伏期均明显延长(P ＜0.05～0.01),模型组大鼠更明显(P＜0.01);药物组和模型组大鼠空间探索距离百分比均降低(P ＜0.05 ～0.01),模型组大鼠降更明显(P＜0.01).与对照组比较,药物组和模型组大鼠海马神经细胞凋亡率显著提高(P＜0.01),模型组大鼠更明显(P＜0.01).与对照组比较,模型组的Caspase-3、PARP-1蛋白和mRNA表达均增加(P＜0.05);与模型组相比,仙茅苷各剂量组可见ER表达增加(P＜0.05),Caspase-3和PARP-1表达降低(P＜0.05).与对照组比较,模型组的Caspase-3和PARP-1表达增加(P＜0.01),而ER未见明显变化(P＞0.05);与模型组相比,仙茅苷各剂量组ER表达均增加(P＜0.01),Caspase-3和PARP-1表达不明显(P＞0.05),但不同剂量仙茅苷组间未见明显差异(P＞0.05).结论:结果表明仙茅苷具有改善血管性模型大鼠空认知功能的作用是通过抑制海马区神经细胞凋亡,下调Caspase-3和PARP-1表达,上调海马ER表达实现的.     

不同产地仙茅药材薄层层析鉴别及仙茅苷的含量测定

目的:分析不同产地仙茅药材的化学成分并测定其中仙茅苷的含量。方法:以醋酸乙酯-甲醇-甲酸(10:1:0.1)为展开剂,2％三氯化铁-2％铁氰化钾(1:1)为显色剂,对各地产仙茅药材化学成分比较分析;以薄层层析-紫外分光光度法测定仙茅苷含量。结果:各地产仙茅药材均含有仙茅苷,但其它化学成分不尽相同;含量为:1.52g‰(四川宜宾)、0.65‰(云南大关)、0.42‰(湖献溆浦)、1.39‰(广东)、0.57‰(广西)、0.24‰(贵州凯里)。结论:各地产仙茅药材化学成分不尽相同;仙茅苷含量以四川宜宾产为最高。     

仙茅苷对自由基的清除作用

目的研究仙茅(Curculigo orchioidesGaertn.)主要成分仙茅苷(curcu ligoside)对羟自由基和超氧阴离子自由基的清除作用。方法分别采用比色法及电子顺磁共振技术(ESR)测定仙茅苷对羟自由基和超氧阴离子自由基的清除效果。结果仙茅苷对羟自由基和超氧阴离子自由基均有良好的清除作用,其清除率略低于茶多酚。结论仙茅苷对自由基具有明显的清除作用,是一种有效的天然抗氧化剂。     

ASE-HPLC测定仙茅中仙茅苷的含量及其指纹图谱研究

目的 获得仙茅药材的HPLC指纹图谱,同时研究快速萃取仙茅中仙茅苷及其含量测定的方法,为其质量控制提供依据。方法 采用正交试验优选ASE 350快速溶剂萃取系统的最佳提取方法,采用HPLC测定仙茅苷的量,色谱柱为Thermo Syncronis C₁₈（100 mm×3 mm,3 μm）,流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,体积流量为0.5 mL·min^-1,检测波长为285 nm,柱温为40℃。指纹图谱共有模式采用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2.0版）进行处理分析。结果 采用萃取温度100℃、静态萃取时间5 min、循环提取2次的快速提取方法最优。在指纹图谱研究中,标定了15个共有峰,建立了对照指纹图谱,20批药材与共有模式之间相似性良好,相似度均>0.9。结论 本方法快速、准确,可用于仙茅药材的综合质量评价。     

Up-regulation of VEGF by MC3T3-E1 cells treated with curculigoside

Empirical evidence has shown that curculigoside, the main active compound of the traditionally used Chinese herb, Curculigo orchioides (Amaryllidaceae, rhizome), affects bone formation and fracture healing. However, the mechanistic details of these processes remain unclear. Therefore, the effects of curculigoside on immortalized, pre-osteoblastic mouse MC3T3-E1 cells was investigated. Following treatment with curculigoside, MC3T3-E1 cells exhibited an increased rate of proliferation. Higher levels of vascular endothelial growth factor (VEGF), Fms-like tyrosine kinase-1 (Flt-1) and bone morphogenetic protein-2 (BMP-2) were also detected in cell supernatants and cell lysates by ELISA and western blot analysis, respectively. Furthermore, the stimulatory effect of curculigoside was observed at relatively low doses (i.e. 10-100 μg/mL). In combination, these responses to treatment with curculigoside elucidate mechanistic details underlying the therapeutic effects of Curculigo orchioides on bone, and identifies these molecules as potential targets for the treatment of common metabolic bone diseases.     

二仙汤抗骨质疏松有效组分的指纹图谱、多成分含量测定及其镇痛和调节骨代谢作用研究

目的 建立二仙汤抗骨质疏松有效组分的指纹图谱及多成分含量测定方法,为基于二仙汤的抗骨质疏松组分中药的研制奠定基础。方法 HPLC指纹图谱检测采用Agilent ZorBax Extend C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为乙腈- 0.1%磷酸水溶液（含0.025%十二烷基硫酸钠）,梯度洗脱：0～30 min,4%～30%乙腈;30～50 min,30%～50%乙腈;50～60 min,50%～90%乙腈;体积流量1 mL/min;柱温25 ℃;检测波长270 nm。运用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”进行相似度评价;通过对照品比对,对共有峰进行指认。样品含量测定的梯度洗脱调整为0～25 min,10%～18%乙腈;25～35 min,18%～19%乙腈;35～40 min,19%～25%乙腈;40～50 min,25%～32%乙腈;50～60 min,32%～55%乙腈;并测定8种有效成分的含量。以小鼠醋酸扭体和成骨细胞和破骨细胞为模型评价二仙汤有效组分的镇痛和对骨代谢的调控作用。结果 建立了二仙汤有效组分的HPLC指纹图谱,确定了16个共有峰,16批样品与对照指纹谱比较的相似度均在0.9以上。指认出其中8个共有峰（1、4、10～12、13、15、16号峰）,分别为新芒果苷、芒果苷、阿魏酸、仙茅苷、朝藿定B、淫羊藿苷、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱。含量测定的线性关系、重复性、稳定性、精密度及加样回收率考察符合要求。二仙汤抗骨质疏松有效组分在小鼠醋酸扭体模型上具有显著的镇痛作用,并可促进成骨细胞的形成和骨基质矿化,抑制破骨细胞的骨吸收。结论 建立的二仙汤抗骨质疏松有效组分HPLC指纹图谱及多成分含量测定方法可准确、高效、全面的对其质量进行评价,为其质量控制提供依据。     

HPLC-DAD法同时测定更年安片中6个活性成分的含量

目的:建立同时分析测定更年安片中6个活性成分(2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、毛蕊花糖苷、仙茅苷、丹皮酚、哈巴俄苷、五味子醇甲)的方法。方法:采用HPLC-DAD法,色谱柱为奥泰Alltima ODS(250 mm×4.6mm,5μm),以乙腈为流动相A,0.05%磷酸溶液为流动相B,梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,检测波长为254 nm(测定五味子醇甲)、284 nm(测定仙茅苷、丹皮酚、哈巴俄苷)、330 nm(测定2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、毛蕊花糖苷)。结果:2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、毛蕊花糖苷、仙茅苷、丹皮酚、哈巴俄苷、五味子醇甲线性范围分别为0.0404～1.616μg(r=0.9999),0.0194～0.774μg(r=0.9998),0.0202～0.810μg(r=0.9997),0.0201～0.804μg(r=0.9999),0.0206～0.826μg(r=0.9998),0.0398～1.592μg(r=0.9999)。平均加样回收率(n=6)分别为97.8%,98.2%,97.9%,98.3%,101.2%,97.5%;RSD分别为1.2%,1.1%,0.95%,1.1%,0.97%,1.1%。结论:该方法操作简单,重复性好,为评价和监控更年安片的质量提供可靠的方法。     

仙茅苷对成骨细胞增殖分化和炎症因子表达的影响及机制分析

目的仙茅苷(curculigoside,CCG)能有效防治去卵巢大鼠的骨量丢失,但是其分子机制尚不清楚,因此,研究CCG在地塞米松(dexamethasone,DEX)诱导下对成骨细胞增殖分化和炎症因子释放的影响,并探讨其相关机制。方法将大鼠颅骨成骨细胞与DEX共同孵育24～72 h,同时采用不同浓度的CCG对其干预,采用细胞计数试剂盒检测成骨细胞增殖情况,流式细胞术检测成骨细胞线粒体膜电位(mitochondria membrane potential,MMP)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、重组人胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)等细胞因子的表达。采用蛋白质印迹法检测骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、β-连环蛋白(β-catenin)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activators of NF-κB ligand,RANKL)和核因子κB受体活化因子(receptor activator of NF-κB,RANK)的蛋白表达。结果地塞米松1μmol/L处理成骨细胞后,成骨细胞增殖明显低于未处理组,25～100μg/mL CCG预处理可明显逆转DEX对成骨细胞的杀伤作用。25～100μg/mL的CCG预处理可提高DEX诱导下成骨细胞的MMP水平,降低ROS的生成。此外,CCG明显逆转DEX对碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、OPG、BMP-2、β-catenin、IGF-1和M-CSF水平的抑制作用以及对RANKL和RANK等分化指标的促进作用。CCG还能抑制DEX诱导的TNF-α、IL-1β、IL-6、COX-2等炎症细胞因子的释放。结论这些结果为进一步研究CCG的成骨细胞保护机制提供了新的思路,通过诱导细胞增殖和分化,减少炎症反应,提示CCG可用于防治骨质疏松症。