正交实验法优选骨碎补提取工艺的研究

目的：研究骨碎补的提取工艺。方法：以骨碎补总黄酮及柚皮苷含量为指标，采用正交实验法进行优选，并用紫外分光光度法测定总黄酮的含量．HPLC法测定柚皮苷含量。结果：提取次数是骨碎补有效成分提取的关键因素，其次是溶媒用量．乙醇浓度和提取时间为最次要因素。结论：最佳提取工艺为骨碎补用10倍量60％乙醇回流提取3次．1h/次。     

不同炮制方法对化橘红中柚皮苷含量的影响

目的以柚皮苷含量为指标,考察不同炮制方法对化橘红质量的影响.方法采用HPLC法测定柚皮苷含量,色谱柱:Kromasil ODS柱(250 mm×4.6 mm),流动相:甲醇二水-乙酸(35:61:4),流速:1.0 mL/min,检测波长:283 nm,柱温:25℃.结果采用不同的炮制方法,化橘红柚皮苷含量有显著差异,以静电干燥明显高于烘干干燥、自然干燥和真空干燥.结论以静电干燥所得化橘红柚皮苷含量高,是炮制化橘红的较好方法.     

柚皮苷对高糖诱导的血管内皮细胞损伤及PI3K/AKT/eNOS信号通路的影响

目的:研究柚皮苷(naringin,Nar)对高糖(high glucose,HG)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的作用及对PI3K/AKT/e NOS信号通路的影响。方法:利用HG(33 mmol/L glucose)培养基孵育HUVECs不同时间(6、12、24、48、72 h)后,用胰岛素(5 m IU/L)刺激细胞15 min,建立内皮细胞损伤模型,分别测定各组上清液中NO水平、细胞中e NOS和磷酸化e NOS(p-e NOS)的水平。对损伤的HUVECs用不同浓度的Nar(5、10、25、50、100 mg/L)孵育不同时间(6、12、24、48和72 h),用胰岛素(5 m IU/L)刺激细胞15min,检测细胞上清中的NO水平,观察Nar对HG诱导HUVECs损伤的作用。对损伤细胞先分别用PI3K抑制剂LY294002(10μmol/L)和AKT抑制剂AKT inhibitorⅣ(0.5μmol/L)预处理24 h,再用50 mg/L的Nar处理24 h,用胰岛素(5 m IU/L)刺激细胞15 min,检测细胞上清中NO的水平,以及e NOS、p-e NOS、PI3K、AKT及p-AKT的蛋白水平,探讨Nar减轻HG对HUVECs损伤作用的机制。结果:Nar的量效和时效结果显示,50 mg/L Nar预处理HUVECs 24 h后,其减轻HG对HUVECs损伤的作用最为显著,表现为NO和p-e NOS的水平升高(P0.05)。加入PI3K和AKT抑制剂后,Nar减轻HG致内皮细胞的损伤及上调p-e NOS和NO水平的作用完全取消(P0.05)。结论:Nar能减轻HG诱导的血管内皮细胞损伤,其作用机制可能是通过PI3K/AKT/e NOS信号通路介导的。     

柚皮苷的大鼠血浆蛋白结合率研究

目的研究柚皮苷的大鼠血浆蛋白结合率。方法使用平衡透析法模拟柚皮苷在体内与血浆蛋白结合的过程,并建立测定柚皮苷的高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)方法,测定低、中、高3个浓度(100、600、3 600 ng/m L)的柚皮苷在透析袋内血浆中和透析袋外缓冲液中的浓度,计算血浆蛋白结合率。结果低、中、高3个浓度的柚皮苷在体外与大鼠的平均血浆蛋白结合率分别为91.5%、90.5%和96.3%,3个浓度之间的血浆蛋白结合率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论柚皮苷与大鼠血浆蛋白高度结合。     

UPLC同时测定清热止咳颗粒中7种黄酮类成分含量

目的 建立同时测定清热止咳颗粒中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、木蝴蝶素A-7-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷含量的方法。方法 采用超高效液相色谱法。采用ACQUITY UPLC BEH C₁₈色谱柱（2.1 mm×100 mm,1.7 μm）,流动相乙腈-0.1%甲酸水溶液(梯度洗脱) ,流速0.3 mL·min^-1,检测波长280 nm,柱温30 ℃。结果 芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、木蝴蝶素A-7-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷分别在0.324～6.480（r=0.999 9）,1.337～26.75（r=0.999 7）,0.687～13.80（r=0.999 6）,1.347～26.95（r=0.999 8）,2.770～55.40（r=0.999 2）,0.330～6.600（r=0.999 8）,0.242～4.840（r=0.999 6）μg·mL^-1范围内与峰面积呈良好的线性关系;并且芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、木蝴蝶素A-7-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷平均加样回收率分别为99.41%、101.80%、99.42%、98.47%、101.71%,102.27%和97.64%,RSD范围分别是2.32%、1.69%、2.38%、2.45%、1.24%、1.77%和1.91%。结论 建立的超高效液相色谱(UPLC)方法操作简便、稳定、准确且可行,可用于清热止咳颗粒的质量控制。     

交锁髓内钉与钢板内同定微创治疗胫腓骨多段骨折的病例对照研究

目的 :采用小鼠气囊模型评价柚皮苷对聚甲基丙烯酸甲酯(Polymethylmethacrylate,PMMA)诱发的破骨细胞性骨溶解的作用。方法:选取48只雌性8~10周龄Balb/c小鼠纳入研究,采用背部注入空气法在其中的32只小鼠中建立气囊模型,植入同种系小鼠颅骨(颅骨源自其余的16只小鼠)。实验共分为4组(150 mg/kg柚皮苷治疗组、30 mg/kg柚皮苷治疗组、PBS空白对照组、DMSO载体对照组),每组8只动物。对两个柚皮苷治疗组和DMSO载体对照组的小鼠使用PMMA颗粒刺激,每组8只相应浓度进行处理,颗粒刺激第7天收集囊膜和囊内植入骨进行抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色、Ca2+释放以及改良Masson染色病理分析进行评价,观察柚皮苷的治疗作用。结果:与DMSO载体组相比,柚皮苷治疗组降低了TRAP阳性细胞浸润的数量,差异有统计学意义(P<0.01);其中150 mg/kg浓度优于30 mg/kg浓度(8.90±1.75 vs 15.23±1.86)。在气囊模型骨吸收冲洗液中,柚皮苷能降低钙的释放,特别是150 mg/kg浓度组更为明显(P<0.05)。改良的Masson染色显示柚皮苷可减少PMMA刺激所致的骨胶原的丢失,但150 mg/kg浓度组作用大于30 mg/kg浓度组。大体及病理切片显示两种浓度的柚皮苷显著降低PMMA刺激所致的炎性反应,表现为气囊厚度的减低和炎性细胞浸润数量的减少。结论 :柚皮苷抑制PMMA诱导的破骨细胞形成,有效缓解PMMA诱发的炎性反应以及随后发生的急性骨吸收。     

六味千骨巴布剂的稳定性考察

考察六味千骨巴布剂的稳定性。方法：用HPLC法测定六味千骨巴布剂中柚皮苷的含量,并考察性状、鉴别、舍膏量、赋形性、黏附性、微生物限度等其他指标。结果：六味千骨巴布剂样品在加速试验及长期试验中,考察前后各项检查指标均无明显变化。结论：六味千骨巴布剂在室温条件下稳定性较好。本品的工艺及包装等设计合理,符合制剂稳定的要求。     

Naringin ameliorates gentamicin-induced nephrotoxicity and associated mitochondrial dysfunction,apoptosis and inflammation in rats: Possible mechanism of nephroprotection

Gentamicin-induced nephrotoxicity has been well documented, although its underlying mechanisms and preventive strategies remain to be investigated. The present study was designed to investigate the protective effect of naringin, a bioflavonoid, on gentamicin-induced nephrotoxicity and to elucidate the potential mechanism. Serum specific renal function parameters (blood urea nitrogen and creatinine) and histopathology of kidney tissues were evaluated to assess the gentamicin-induced nephrotoxicity. Renal oxidative stress (lipid peroxidation, protein carbonylation, enzymatic and non-enzymatic antioxidants), inflammatory (NF-kB [p65], TNF-α, IL-6 and MPO) and apoptotic (caspase 3, caspase 9, Bax, Bcl-2, p53 and DNA fragmentation) markers were also evaluated. Significant decrease in mitochondrial NADH dehydrogenase, succinate dehydrogenase, cytochrome c oxidase and mitochondrial redox activity indicated the gentamicin-induced mitochondrial dysfunction. Naringin (100 mg/kg) treatment along with gentamicin restored the mitochondrial function and increased the renal endogenous antioxidant status. Gentamicin induced increased renal inflammatory cytokines (TNF-α and IL-6), nuclear protein expression of NF-κB (p65) and NF-κB-DNA binding activity and myeloperoxidase (MPO) activity were significantly decreased upon naringin treatment. In addition, naringin treatment significantly decreased the amount of cleaved caspase 3, Bax, and p53 protein expression and increased the Bcl-2 protein expression. Naringin treatment also ameliorated the extent of histologic injury and reduced inflammatory infiltration in renal tubules. U-HPLS-MS data revealed that naringin co-administration along with gentamicin did not alter the renal uptake and/or accumulation of gentamicin in kidney tissues. These findings suggest that naringin treatment attenuates renal dysfunction and structural damage through the reduction of oxidative stress, mitochondrial dysfunction, inflammation and apoptosis in the kidney.     

梅州沙田柚的花、果、叶中柚皮苷含量比较研究

目的对梅州沙田柚花、果、叶的柚皮苷进行比较研究,为该植物综合利用提供依据。方法采用薄层色谱法鉴别柚皮苷;采用高效液相色谱法测定柚皮苷含量。结果摘花期柚花的柚皮苷含量高,选果期的柚果于第1次摘果即5月初时含量最高．裁枝期的叶含量较低。结论次花、次果、柚叶均可综合利用,变废为宝。     

柚皮苷硬膜外腔注射对髓核致坐骨神经痛大鼠的疼痛行为影响

目的研究柚皮苷硬膜外腔注射对致坐骨神经痛大鼠的疼痛行为学的影响。方法选择雄性SD大鼠28只,制作髓核致坐骨神经痛大鼠模型。随机分为4组,每组7只大鼠。术后第3天开始注药治疗,柚皮苷组每日硬膜外腔注入柚皮苷注射液50μl,地塞米松组每日硬膜外腔注入地塞米松注射液50μl,生理盐水组每日硬膜外腔注入生理盐水50μl,未注药组硬膜外腔无药物注入处理。检测大鼠术前,术后及给药后1、3、7、14d的疼痛行为指标（50％机械性刺激缩足阈值和热刺激缩足反应潜伏期）。结果4组大鼠在术后均对机械刺激产生明显的痛觉过敏,与术前比较差异有显著性（P〈0.05）;柚皮苷组与地塞米松组在提高疼痛行为学指标的作用方面差异无显著性（P〉0.05）。结论硬膜外腔注射柚皮苷可有效改善髓核致坐骨神经痛大鼠的疼痛反应。