输尿管无细胞基质移植物的制备和评价

背景：与小肠黏膜下层等材料相比，脱细胞血管具有天然管状结构，与输尿管形态结构相近，替代输尿管时仅需端端吻合即可，手术操作简单，血管外壁光滑，获取及制备方法简便等优点。 目的：拟应用同种颈动脉血管无细胞基质体外构建输尿管。 设计、时间及地点：观察性实验，于2006-09/2008-06在上海交通大学医学院附属新华医院动物实验中心完成。 材料：长风杂交白猪由上海松联实验动物公司提供。上海交通大学医学院实验动物中心提供的健康成年大鼠8只，用于血管无细胞基质的动物毒性实验。 方法：剥去猪颈动脉血管外膜，PBS冲洗若干遍，然后将血管置于pH 7.1 的PBS中4 ℃下振荡清洗，0.5%十二烷基硫酸钠振荡24 h，后使用双蒸水4 ℃下反复振荡洗涤1周，每日换双蒸水2次。对于解剖过程中肌肉残留相对稍多的血管，在双蒸水洗涤前以混合消化液37 ℃下振荡消化约2 h，再行双蒸水洗涤。制备的无细胞基质置于青、链霉素溶液中，4 ℃保存，完成脱细胞支架制备。 主要观察指标：光镜及电镜观察脱细胞后管壁无细胞基质片的主要成分。将同种异体来源内皮祖细胞培养增殖后植入血管无细胞基质，观察细胞生长情况，并进行血管无细胞基质动物毒性实验。拉力实验了解血管无细胞基质材料的收缩性能。 结果：颈动脉血管无细胞基质中已无细胞成分，无细胞基质主要由胶原成分组成。扫描电镜未见该材料表面存在细胞及细胞碎片，同时发现该无细胞基质存在孔隙样结构。体外同种异体来源的内皮祖细胞培养增殖后植入血管无细胞基质，细胞黏附于无细胞基质。血管无细胞基质按毒性分级属于无毒级。拉力实验说明该无细胞基质具有一定的韧性和牵张性。 结论：采用胰酶和十二烷基硫酸钠制备的颈动脉血管无细胞基质材料无细胞残留，具有一定的韧性和牵张性，种植于其中的种子细胞具备一定的生长能力。     

不同试剂脱除猪主动脉瓣细胞的对比研究

目的 用不同方法去除猪主动脉瓣的细胞并比较效果，为组织工程瓣膜提供良好的实验材料。方法 采用十二烷基硫酸钠（SDS）、脱氧胆酯酸钠（SD）、曲拉通（Triton）X-100制备猪主动脉瓣脱细胞基质。标本进行大体、光镜、电镜观察，DNA提取、力学性能的检测并比较。结果 SD无法完全脱除主动脉瓣瓣根内的细胞。TritonX-100和SDS可以完全脱除瓣膜细胞。TritonX-100较好的保持了主动脉瓣胶原纤维和弹性纤维的原有排列和分布，并有较好的力学性能。而SDS对瓣叶和瓣根血管壁中的纤维支架都造成了一定的损伤。SDS和TritonX-100脱细胞时间无明显差别。结论 TritonX-100可以成功脱除猪主动脉瓣细胞，并较好的保持了主动脉瓣的结构和力学性能。     

组织工程血管基质的制备与改性

目的：完全脱除猪胸主动脉细胞，对脱细胞血管基质进行改性，增强基质的力学强度，制备组织工程血管支架材料。方法：取家猪的新鲜去除外膜胸主动脉20根，随机分成4组，分别采用胰蛋白酶、TritonX-100及十二烷基硫酸钠（SDS）作为脱细胞试剂对猪胸主动脉进行脱细胞处理，并对脱细胞后的血管基质进行改性，采用HE染色、弹力纤维染色、力学性能测试，以评价脱细胞效果以及材料的力学性能。结果：采用1％TritonX-100单独作用84h既能完全脱除细胞，同时又可完整保留血管基质的三维结构，对胶原纤维、弹力纤维的损伤小，是一种较理想的脱细胞方法。对脱细胞后的基质进行冷冻干燥及真空热交联处理，能有效提高材料的机械强度，冷冻干燥24h后真空120℃下热交联处理12h所获得的材料的机械强度最好，断裂强度可达到1．70MPa。结论：以脱细胞血管基质经冷冻干燥和真空热交联处理后，可以作为血管组织工程的支架材料。     

黄芪注射液体外对大鼠血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2活性的抑制作用

目的：探讨黄芪对大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）分泌的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)活性的抑制作用及其调节机制。方法：以黄芪注射液刺激体外培养的SD大鼠VSMC，Zymography法检测培养细胞上清液中MMP-2的活性，Western印迹法观察MMP-2蛋白水平变化。结果：黄芪在体外抑制大鼠VSMC分泌MMP-2的活性，且此作用呈浓度依赖性。结论：黄芪在体外抑制大鼠VSMC分泌MMP-2的活性，此作用为转录后调节。     

胆红素对烟雾暴露大鼠支气管上皮细胞结构和基质金属蛋白酶9表达的影响

支气管上皮细胞长期受烟雾中的氧化剂等有害物质损伤时，可产生气道及其周围组织的慢性炎症，导致气道结构改变，表现之一为细胞外基质（ECM）结构重塑。基质金属蛋白酶的表达失衡，与ECM代谢紊乱密切相关。近年来发现胆红素既是体内有潜在毒性的代谢产物，也是一种有效的抗氧化剂，对某些组织具有保护作用。我们在吸烟大鼠肺气肿模型建立过程中进行胆红素干预，观察胆红素对吸烟大鼠支气管黏膜的保护作用，以及对支气管上皮细胞基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达的影响。     

以猪角膜脱细胞基质为载体培养人脐静脉内皮细胞构建实验性角膜后板层

 目的： 探讨以异种后弹力膜/基质为载体诱导人脐静脉内皮细胞向角膜内皮细胞分化的可行性及移植术后在活体的生理功能。方法：体外分离培养脐静脉内皮细胞作为诱导移植的种子细胞;取当地质检合格的猪眼球以直径6.2 mm、厚100 μm、冷冻脱水进行角膜深板层载体的制备;接种经CM-DiI荧光标记的第2~3代人脐静脉内皮细胞于载体的后弹力层面,体外培养7~10 d行细胞形态、密度、组织学和扫描电镜观察,待细胞与后弹力层面融合形成单层后,用于兔角膜移植。受眼：正常健康新西兰大白兔24只（24眼）,实验组（人脐静脉内皮细胞移植组）12眼,对照组（单纯猪角膜深板层移植组）12眼,全角膜范围去除术眼内皮细胞,实施移植手术。结果：人脐静脉内皮细胞在猪后弹力膜/基质载体上贴附生长,形成紧密连接的单层,形态近似六角形,呈铺路石状分布,具有正常兔角膜内皮细胞的超微结构。术后8周实验组角膜基本透明,周边角膜略有水肿。对照组单纯猪角膜深板层移植后,移植角膜明显水肿、混浊。结论：以异种角膜后弹力膜/基质为载体培养的人脐静脉内皮细胞,行异种异体移植后,能够在活体上成活,并能维持角膜透明,具有正常角膜内皮细胞的生物学功能。深板层角膜内皮移植术是体外培养血管内皮细胞移植的一种有效术式。     

脱细胞基质水凝胶在再生医学中的研究进展

脱细胞基质(dECM)由于其高仿生性和优异的生物相容性,已被广泛用作再生医学的支架材料。水凝胶(hydrogel)作为一种高含水量、可控流动性的功能高分子材料,非常适合用于临床中的部分微创手术。近年来,随着水凝胶理论和技术的快速发展,dECM水凝胶逐渐成为再生医学领域的研究热点。本文从dECM水凝胶的制备及其临床前应用两个方面对近年来的相关研究进行综述,并展望其未来的临床前景。     

脱细胞基质制备方法及其在涎腺组织工程中的应用

背景:由脱细胞基质组成的生物支架被广泛应用于动物及临床研究,以修复和重建组织与器官,但所有的脱细胞方法都会在一定程度上破坏基质结构与功能。目的:综述脱细胞基质制备方法、优缺点及其在涎腺组织工程研究中的应用。方法:应用计算机检索CNKI数据库、中国生物医学文献数据库、PubMed数据库及Elsevier数据库2008至2019年发表的相关文献,检索词为“脱细胞基质,制备方法,涎腺,组织工程,再生;decellularization,preparation method,parotid gland tissue engineering”,共纳入74篇文献。结果与结论:大部分组织与器官脱细胞基质制备方法需要化学、生物(酶)、物理及以上几种方法联合使用,具体方法取决于组织与器官的厚度、组成和性质。虽然不是所有脱细胞方法均可去除组织与器官中的细胞成分,但完全去除细胞的组织与器官具有重塑组织特异性的优势,为接种细胞的增殖和分化提供有利的微环境。由于涎腺结构复杂和组织工程化在临床应用中的挑战,应用于患者的临床移植进展有限,该领域的体内研究仅限于动物,而基于颌下腺脱细胞基质生物支架材料方面的应用有望为涎腺组织工程提供有利的来源。     

葛根素抗rds小鼠视网膜光感受器细胞凋亡及其机制探讨

目的 观察葛根素对遗传性视网膜色素变性rds小鼠的治疗作用,并探讨其抗视网膜光感受器细胞凋亡的作用机制.方法 rds新生小鼠随机分为两组,实验组和对照组.实验组小鼠从出生时开始,ip盐酸葛根素80mg/kg,每天2次,至生后35 d,对照组同时ip等量生理盐水.分别在用药后0、3、7、14、21、28、35d取眼球,立即经10%中性甲醛固定,常规病理切片.另取眼球经2.5%戊二醛溶液固定,电镜观察.用TUNEL,方法检测视网膜光感受器细胞的凋亡,用免疫组化方法测定Bcl-2在视网膜的表达.结果 病理结果显示,经葛根素治疗后14、21、28、35 d,rds小鼠光感受器细胞层数与对照组比较,明显增加(P<0.01).电镜结果显示,葛根素治疗组与对照组比较,在7、14、21、28、35 d可减轻rds小鼠光感受器细胞及其外段盘膜部位的线粒体、盘膜和外界膜的破坏.rds小鼠经葛根素药物治疗后3、7、14、21、28、35 d,光感受器细胞的凋亡率与对照组比较明显减少(P<0.01);在7、14、21、28、35 d,Bcl-2在视网膜光感受器细胞基质及其内外段的表达明显增强(P<0.01).结论 葛根素可减轻rds小鼠视网膜光感受器细胞的病变,其作用机制可能是通过上调视网膜光感受器细胞及其内外段Bcl-2的表达延缓rds小鼠视网膜光感受器细胞的凋亡.     

异种角膜脱细胞基质和几丁糖载体构建角膜基质层的比较

目的探索异种角膜脱细胞基质和几丁糖为载体构建生物角膜组织的可行性，评价二者的结构、功能和生物相容性。方法l％TritonX-100及冷冻干燥处理获得猪角膜脱细胞基质，网状几丁糖材料制备成似角膜片状形态，将体外培养的兔角膜基质细胞种植于两种载体，体外培养2周，形成细胞载体复合物。对构建的角膜组织进行苏木精-伊红染色、扫描电镜观察；同时将两种生物材料移植到兔角膜基质囊袋内，观察其生物相容性。结果角膜基质细胞在两种载体上皆可黏附生长，并分泌细胞外基质。脱细胞基质载体内细胞形态不规则，位于胶原板层间，形成类似正常组织的角膜基质结构；细胞可在几丁糖网状纤维上黏附并包绕生长。两种载体移植到兔角膜囊袋后，脱细胞基质降解较慢，与宿主角膜组织相融性良好，未发生明显排斥及毒性反应；几丁糖载体降解较迅速，但降解产物诱导较严重的排斥反应。结论异种角膜脱细胞基质保留正常组织的胶原板层结构，并具角膜的韧性和良好的生物相容性，更适于作为体外构建生物角膜的载体，而几丁糖材料则需要在构成结构和性能等方面进一步改进．