水通道蛋白3在人胎盘和胎膜中的表达及分布

目的 研究正常妊娠晚期人胎盘和胎膜水通道蛋白3(AQP3)的表达及分布.方法 收集5例正常足月妊娠剖宫分娩的胎盘和胎膜样本,用RT-PCR测定AQP3 mRNA在胎盘和胎膜组织中的表达;用Western印迹和免疫组织化学方法检测AQP3蛋白质水平在胎盘和胎膜的表达.结果 RT-PCR显示AQP3 mRNA在胎盘和胎膜组织均有表达.Western印迹结果显示胎盘组织在29 000左右有一特异性条带.免疫组织化学结果显示AQP3表达于合体滋养细胞,而在羊膜上皮细胞未见表达.结论 AQP3在胎盘母儿液体平衡中可能发挥重要作用.     

Toll样受体2在人胎盘和胎膜组织中的表达

目的 检测正常胎盘和胎膜组织中Toll样受体2(TLR2)的表达.方法 收集5例足月剖宫分娩胎盘和胎膜样本,运用RT-PCR法检测胎盘和胎膜组织中TLR2 mRNA的表达,运用免疫组织化学和Westen blot印迹方法检测TLR2蛋白质在胎盘和胎膜组织中的表达.结果 RT-PCR显示在mRNA水平,胎盘和胎膜组织中均有TLR2表达;Westen blot印迹显示TLR2抗体在胎盘和胎膜组织中相对分子质量为50000左右的位置有一条明显的条带;免疫组化研究显示TLR2在胎盘的合体滋养细胞、胎膜的羊膜上皮细胞及平滑绒毛膜滋养细胞中有表达.结论 TLR2在人胎盘和胎膜组织中的表达,提示其在妊娠期先天性免疫中可能发挥重要作用.     

2,3,7,8-四氯苯二噁哄对小鼠胚胎毒作用的研究

目的　探讨动物妊娠早期接触2 ,3 ,7,8 四氯苯二(TCDD)后造成胚胎丢失的原因以及对小鼠成活率的影响。方法　90只妊娠NHI小鼠分9组,在妊娠的第1天,第2天和第3天分别观察胚胎转移率、检测血清雌二醇和孕酮含量;2 40只妊娠NIH小鼠分2 4组,于妊娠第9天和第18天测定子宫重量,观察胚胎成活情况。结果　与正常对照组胚胎数比较,TCDD未影响胚胎转移率,但造成着床前胚胎丢失(14±4 2 0 ,4 63±6 0 9,P <0 0 1) ;不同时期染毒均可降低胚胎和胎儿成活率(P <0 0 0 1) ;血清雌二醇含量升高(P <0 0 0 1)、孕酮水平下降(P <0 0 1)。结论　TCDD对胚胎和母体均具有毒性,血清类固醇激素的改变可影响子宫功能,造成第9天胚胎成活率下降;同时TCDD具有持续毒性的特点,使出生前第18天胚胎成活数低于第9天胚胎成活数。     

结核分枝杆菌HSP 65亚单位疫苗和基因疫苗的构建及免疫学特性

目的:构建HSP 65蛋白的亚单位疫苗和基因疫苗,并与BCG相比较,评价这两种疫苗在小鼠体内的免疫学特性.方法:从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出hsp 65基因,连接进入pMD18-T载体中,测序后,利用不同酶切位点将完整的hsp 65基因分别克隆到pProEX HTb原核表达载体和pcDNA3.1(-)真核表达载体,前者在大肠杆菌中诱导表达,经SDS-PAGE和Western Blot分析后,用Ni-NTA亲和层析柱进行纯化;后者通过阳离子聚合物瞬转P815细胞,用间接免疫荧光检测细胞内HSP 65蛋白的表达.用上述原核表达蛋白和真核质粒(分别为亚单位疫苗和基因疫苗)免疫BALB/c小鼠,ELISA测定特异性抗体的滴度,MTT测定脾淋巴细胞特异性增殖指数.结果:获得的结核分枝杆菌hsp 65基因序列与GenBank公布的完全一致;Western Blot结果显示,在M<,r>约65000处有与鼠抗HSP 65 mAb和临床结核患者血清的特异性结合带;免疫荧光结果显示转染重组质粒的P815细胞的表达蛋白与HSP 65 mAb有特异性结合.两种疫苗免疫小鼠体内产生特异性抗体,经蛋白刺激后可引起脾淋巴细胞特异性增殖.结论:所构建的两种疫苗能引起免疫动物的特异性体液和细胞免疫反应,应进一步研究其抵抗结核分支杆菌感染的保护力机制,以用于结核病的防治研究.     

小鼠体外受精及其胚胎体外培养的比较研究

目的 通过比较不同品系小鼠体外受精情况以及不同培养液对C57BL/6J小鼠胚胎体外培养效果的实验,进一步完善小鼠体外受精和早期胚胎体外培养体系.方法 对C57BL/6J、DBA/2、FVB/NJ、BALB/c、KM、ICR及BARR Ⅱ小鼠进行超排和体外受精,并对C57BL/6J小鼠体外受精后的2-细胞胚胎用HTF、CZB、KSOM、M16、HECM五种培养液在相同条件下进行体外培养到囊胚,计算4-细胞～囊胚的发育率.结果 各品系小鼠平均排卵数为13.0～38.7个(P＜0.01),体外受精率为70.2%～92.8%(P＜0.05).不同培养液至4-细胞的发育率为60.3%～95.8%,其中KSOM的4-细胞发育率为95.8%,最适合2-细胞向4-细胞的发育.8-细胞发育率为52.8%～91.1%,桑椹胚发育率为40.6%～87.5%,囊胚发育率为5.1%～75.4%,各阶段胚胎发育率均差异显著.其中适合于金黄仓鼠桑椹胚、囊胚发育的HECM-2并不支持C57BL/6J囊胚的发育,其囊胚发育率只有5.1%,CZB最适合其囊胚的发育.结论 遗传背景是影响小鼠超排及体外受精效果的主要因素之一.葡萄糖的存在不利于克服2-细胞发育阻断,胚胎在8-细胞期以前,主要能源物质不是葡萄糖,直到桑椹胚后期,葡萄糖才是主要的能量物质.磷酸盐可引起胚胎发育阻断.氨基酸和EDTA有利于克服胚胎发育阻滞.     

紫苏子油纳米乳的研制

目的研制紫苏子油纳米乳剂,并对其进行质量评价。方法绘制伪三元相图优选处方,考察制剂的形态、黏度、电导率、折光率、乳滴粒径分布及稳定性。结果以小麦胚芽油为油相,聚氧乙烯氢化蓖麻油(RH40)为表面活性剂的处方最佳,紫苏子油纳米乳在透射电镜下呈圆球形,黏度为(5.49±0.02)/mm2.s-1,电导率为316/ms-1,折光率为(1.124±0.00250),平均粒径为(50.3±1.1)nm,气相色谱法测定质量分数的平均回收率为98.9%,RSD为0.88%。结论纳米乳能提高紫苏子油的溶解度和稳定性,重现性好,是一种很好的药用基质。     

表皮干细胞的鉴定方法

获得纯化的人类和动物表皮干细胞不仅可为构建有生理功能的人工皮肤提供种子细胞，对了解皮肤组织器官发育、肿瘤疾病发生也具有重要意义，是转基因和组织工程技术中的重要靶细胞。利用慢周期性和自我更新能力是鉴别表皮干细胞最基本且较可靠的实验手段，但这两种方法的应用很不方便。目前位于表皮干细胞表面的糖蛋白已作为其特异性标志而受到关注。因表皮干细胞的特异性分子标志、识别标准、分布定位及体外培养条件下生物学特性的变化等诸多方面都还存在争议，限制了其基础研究与临床应用。     

人工染色体载体的研究和应用

基因工程技术的迅速发展，使人类对生物体基因的结构、功能、表达及其调控的研究深入到分子水平。面对特定基因片段的分离和获得，则是上述研究的基础。完整的基因组文库的构建，使任何DAN片段的筛选和获得均成为可能。因此，基因组文库是进行分子克隆和基因组结构与功能研究的基础。