青年男性血清25羟维生素D、PTH水平与区域骨密度的关系

目的 调查广州地区青年男性维生素D、PTH状态及其与区域骨密度之间的关系.方法 随机选取2011年5月-2012年8月在广州军区广州总医院门诊部体检的60名广州青年男性志愿受试者,年龄18～44岁.评估血清25(OH)D、PTH水平,并分析血清25(OH)D、PTH与骨转换指标和区域骨密度(BMD)的相关性.结果 46.7％的青年男性血清25(OH)D水平＞30 ng/mL,53.3％低于30 ng/mL,5％低于20 ng/mL.血清25(OH)D水平与年龄分布无统计学差异(P＞0.05).双变量分析显示血清25(OH)D水平与PTH负相关(r=-0.264,P=0.042),与β-Crosslaps负相关(r=-0.257,P=0.047).血清25(OH)D水平、PTH与L1-4以及单个腰椎L1、L2、L3、L4的BMD无相关性.股骨大转子BMD与血清25(OH)D正相关(r=0.271,P=0.040),校正年龄、BMI和骨生化指标后,正相关性更加明显(r =0.319,P=0.020).多元线性回归分析显示BMI、ALP与全腰、L1、L3、L4椎BMD相关,BMI、PINP与L2椎BMD相关,BMI、25(OH)D与全髋、大转子BMD相关.结论 青年男性广泛存在血清25(OH)D不足状态,血清25(OH)D水平与股骨大转子BMD明显正相关,适当补充维生素D和钙剂,对维持大转子区域的骨量至关重要.     

补肾健脾化瘀方对去势大鼠股骨骨髓ERRα和PGC-1α mRNA表达的影响

目的 探讨补肾健脾化瘀方对去势大鼠股骨骨髓组织中雌激素相关受体α（ERRα）和过氧化物酶体增殖物活化受体γ协同刺激因子-1α（PGC-1α） mRNA表达的影响。方法 40只7月龄SD雌性大鼠随机分成假手术组、模型组、中药组（补肾健脾化瘀方）、阿伦磷酸钠组。治疗12周后,小动物双能X线检测左侧股骨骨密度,HE染色观察胫骨近端骨形态,QPCR检测骨髓组织中ERRα、PGC-1α mRNA表达水平检测。结果 模型组骨密度低于假手术组（P＜0.05）;中药组与阿伦磷酸钠组骨密度高于模型组（P＜0.05）,而假手术组、中药组与阿伦磷酸钠组之间无统计学差异。与假手术组相比,模型组骨髓组织中ERRα mRNA表达水平上升（P＜0.05）,PGC-1α mRNA表达水平下降（P＜0.05）。予以药物干预后,与模型组相比,中药组骨髓组织中ERRα mRNA表达水平下降（P＜0.05）,PGC-1α mRNA表达水平上升（P＜0.05）;而阿伦磷酸钠组骨髓组织中ERRα mRNA表达水平下降（P＜0.01）,PGC-1α mRNA表达水平虽呈现增高的趋势,但无统计学差异（P＞0.05）。结论 补肾健脾化瘀方可能是通过提高骨髓组织中PGC-1α mRNA表达水平,降低ERRα mRNA表达水平,从而提高去势大鼠骨密度。     

病毒性肝炎联合诊断cDNA芯片的研制与临床应用性研究

目的 制备病毒性肝炎联合诊断cDNA芯片,并进行系列优化及临床应用性研究.方法 对于基因组较小的HBV、HDV病毒,采用Primer Premier 5.0软件针对其保守区域设计特异引物,普通PCR技术制备探针;利用限制性显示PCR(RD-PCR)技术制备基因组较大且复杂的HCV芯片探针.为了便于摸索实验条件和更好地进行探针优化,先后制备3种芯片,包括HBV与HDV诊断芯片、HCV诊断芯片及HBV、HDV、HCV联合诊断芯片.结果 杂交结果显示HBV与HDV诊断芯片、HCV诊断芯片的诊断效果较为满意.从以上2种芯片中选取探针制备HBV、HDV、HCV联合诊断芯片,并对该芯片的检测质量进行初步评估:①检测线性:病毒质粒拷贝数在104～1011copies/ml之间时,芯片检测法显示了较好的线性(r分别为0.990 2、0.992 1、0.981 9,P＜0.01);②特异性:检测黄热病病毒(YFV)、乙型脑炎病毒(JEV)、登革热病毒(DV)等其他病毒样品结果均为阴性,说明该芯片特异性较好;③重复性:检测HBV、HDV、HCV的批内精密度变异系数(Cv)值为7.1%、7.2%、6.6%,批间精密度Cv值为7.9%、8.2%、7.6%;④准确性:将HBV、HDV PCR片段(共14条)、HCV限制性片段(24条)和部分临床阳性血清(PCR产物)全部进行序列测定,在GenBank中进行Blast比较,结果表明克隆基因均属于相应基因,与理论一致.为了适应临床诊断的要求,对实验条件进行优化,包括减少杂交时间、取消预杂交、将杂交温度提高到52℃等措施.在实验室对芯片进行初步评估后,对临床血清标本进行小规模批量检测实验: 用芯片法和实时定量PCR法检测HBV阳性血清(98例)、HCV阳性血清(42例)和阴性血清(130例),对两种方法进行对比,结果显示芯片法检测与实时定量PCR法有良好的相关性(HBV、HCV的r值分别为0.985 4和0.958 2),检测HBV、HCV、HDV的敏感性和特异性分别为85.7%、76.2%、80.0%和96.7%、95.0%、100%.结论 本研究研制的联合诊断芯片敏感性、特异性均较佳,临床应用前景较好.     

活血化瘀法治疗膝关节骨关节炎临床研究

目的：观察丹红注射液治疗膝关节骨关节炎的临床疗效。方法：共收治72例膝关节骨关节炎患者,随机分为治疗组和对照组各36例。治疗组采用丹红注射液治疗,对照组采用盐酸氨基葡萄糖治疗,2组疗程均为5周。通过膝关节协会（KSS）评分评估膝关节功能,SF-36量表评价生存质量。结果：72例患者均获随访。治疗后2组膝评分、膝功能评分均有升高,治疗2周后2组2项评分比较,差异均有显著性意义（P〈0．05）,治疗5周后2组2项评分比较,差异均无显著性意义（P〉0．05）。治疗5周后,2组SF-36各条目评分与治疗前分别比较,差异有显著性或非常显著性意义（P〈0．05,P〈0．01）。结论：丹红注射液治疗膝关节骨关节炎患者临床效果满意,而且起效更快。治疗后末次随访,患膝的疼痛显著缓解,膝关节活动度及功能有所改善,患者生活质量提高。     

肝炎病毒诊断分型寡核苷酸芯片的制备与应用

目的研制联合诊断HBV、HDV、HCV及HCV分型的寡核苷酸（Oligo）芯片，并进行系列优化及临床应用性研究。方法从GenBank数据库获取HBV全长DNA序列，HDV及HCV4个基因型全长cDNA序列，根据BLAST分析结果获得HBV、HDV种属保守序列及HCV各型特异性序列，以作为设计Oligo探针的备选序列。用Array designer 3．0分别对BLAST检索所得的HBV、HDV种属保守序列和HCV型特异性序列逐一进行分析，设计长度均一的60mer Oligo探针。从HBV、HDV、HCV种属保守序列和HCV型特异性序列中分别挑选出16、8、68条60 mer Oligo探针。Oligo探针合成和纯化后，用芯片打印仪固定在玻片上。为便于研究，先后制备了2种芯片，包括HBV、HDV诊断芯片、HCV分型芯片。采用限制性显示PCR技术进行样品荧光标记后与芯片杂交，并根据杂交结果筛除了有非特异杂交和信噪比低于4．0的探针，选取高特异的探针制备了HBV、HDV、HCV联合诊断分型芯片。结果从杂交效果来看，研制的Oligo芯片特异性较高，可有效用于HBV、HDV、HCV的联合诊断及HCV的分型。为了适应临床诊断的要求，对芯片进行了实验条件摸索和一些优化，均取得较好的效果。结论制备的肝炎病毒诊断分型芯片检测敏感性、特异性均佳，具有较为广阔的应用前景，为下一阶段进行中试规模的临床血清样品检测做好了准备。     

糖皮质激素性骨质疏松的研究新进展

近年来,随着糖皮质激素在临床广泛应用,糖皮质激素性骨质疏松发病率不断上升,在骨质疏松症中其发病率居于第三位,仅次于绝经后骨质疏松及老年性骨质疏松。糖皮质激素除了促进成骨细胞和骨细胞凋亡、降低成骨功能,抑制骨胶原及促进破骨细胞生成并延长其生存时间等直接抑制成骨,还通过调节内分泌及相关细胞因子、抑制骨局部血流量等间接影响骨形成。2008年FRAX工具的推出重新定义了糖皮质激素性骨质疏松风险度,为临床的诊治带来便利。针对其发生脆性骨折的风险,2010年ACR共识对其防治做出了新的调整和推荐,重点强调了双磷酸盐在防治糖皮质激素导致的脆性骨折方面的作用,同时甲状旁腺激素、充足的维生素、钙剂等在有效防治糖皮质性骨质疏松方面也起了重要作用。     

两种糖皮质激素导致骨质疏松过程中骨量、骨转换标志物及雌激素水平的差异

目的 对比泼尼松龙（PRE）和地塞米松（DXM）致骨质疏松过程中对大鼠骨量和骨转换标志物、雌激素水平的差异。方法 选取3月龄SPF级雌性大鼠46只,随机分成4组：基线组（BL组）6只、年龄对照组（AM组）12只、泼尼松龙组（PRE组）14只、地塞米松组（DXM组）14只。BL组于实验开始时麻醉处死,其余各组分别予常规饲养,PRE组以5mg/kg PRE每天一次皮下注射,DXM组以1mg/kg DXM每周两次皮下注射,于干预后1、2、3个月（M1、M2、M3）分3批麻醉处死取材。每次取材时立即取子宫、肾上腺称重,并收集血清以检测血清内雌激素、PINP及β-CTX水平、收集腰1-3椎体以检测腰椎骨密度（BMD）。结果 PRE组各时间点BMD值[（0.183±0.027、0.230±0.005、0.259±0.014）g/cm2]及DXM组各时间点BMD值[（0.191±0.010、0.208±0.012、0.200±0.004）g/cm2]均较AM组[（0.251±0.014、0.275±0.009、0.281±0.008）g/cm2]明显下降（P＜0.05）,其中DXM组下降更为显著（P＜0.01）,且在M2及M3,DXM组BMD值明显低于PRE组（M2：P＜0.05;M3：P＜0.01）。PRE组干预初期,其血清雌激素水平（36.54±20.40μg/L）较AM组（148.74±40.33 μg/L）明显降低（P＜0.01）,但随着干预时间延长, M3时（130.85±18.95 μg/L）增长至与AM组（126.64±69.12 μg/L）相接近水平（P＞0.05）,但在DXM干预下,雌激素水平在各时间点[（93.13±31.27、91.77±33.14、98.83±10.58）μg/L]均低于AM组[（148.74±40.33、140.01±28.46、126.64±69.12）μg/L]（P＜0.05）。两种GC干预下,PINP及β-CTX均显著高于AM组（P＜0.01）,且PRE干预后各时间点PINP水平[（1410.33±882.40、2089.23±1623.61、1546.88±644.68）μg/L]显著高于DEX组[（258.70±139.42、220.89±92.82、483.36±225.82）μg/L]（P＜0.05）。结论 地塞米松诱导骨量减少的能力明显强于泼尼松龙,这可能与其更大程度地降低血清雌激素水平以及更有效地限制成骨有关。     

激素性股骨头坏死患者骨组织中骨代谢相关因子的表达

目的观察激素性股骨头坏死患者骨组织中相关因子的表达情况,探讨激素性股骨头坏死的可能作用机制。方法 2013年10月至2014年2月,收集在广州中医药大学第一附属医院三骨科14例需行全髋关节置换术(THA)的病例(其中7例为激素性股骨头坏死ARCOⅣ期的患者入实验组,7例为股骨颈骨折的患者入对照组)。采用免疫组织化学检测股骨头标本骨组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、骨钙素(BGP)表达水平,采用q PCR检测股骨头标本骨组织中Runt相关转录因子2(Run X2)信号的表达水平。结果实验组患者骨组织病理检查均显示有股骨头坏死,对照组均未发现股骨头坏死征象。免疫组织化学检测实验组股骨头骨组织中TGF-β1、MMP-2、BGP的表达结果较对照组低,差异均具有统计学意义(P<0.05);q PCR检测实验组股骨头骨组织中Run X2信号的表达结果较对照组低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论激素性股骨头坏死的机制可能与股骨头骨组织中的TGF-β1、MMP-2、Run X2、BGP表达水平过低相关。     

中医药治疗股骨头坏死的疗效评价及适应证的初步探索

目的评估中医药治疗股骨头坏死（ONFH）的临床疗效,分析预后影响因素对股骨头生存率的影响。方法2009年6月-2011年5月,回顾研究91例133髋中医药治疗的ONFH患者,年龄（38．81±11．99）岁,随访（14．04±6．77）个月。气滞血瘀型31例,肾虚血瘀型37例,痰瘀蕴结型23例;FPS—R评分评估关节疼痛程度,Harris评分评估髋关节功能,SF-36量表评价生存质量,影像学评价塌陷进展;以股骨头塌陷≥4mm为终点,Cox风险模型分析预后因素对中医药治疗后股骨头生存率的影响,探讨中医药治疗ONFH的适应证。结果至末次随访,有6例7髋转为手术。（1）中医药治疗前（133髋）和治疗后末次随访时（126髋）的各证型患者总体FPS—R评分比较有统计学差异（t=7．780,P〈0．01）;（2）治疗前后患者总体Hams评分比较有统计学差异（t=5．238,P〈0．01）;（3）影像学进展：49例59髋出现x线进展,中药治疗前后影像总体进展率〉50％的因素包括塌陷、疼痛时问≥12个月、坏死范围≥40％、C2型;（4）股骨头生存率：26例31髋塌陷≥4mm,随访至29个月的生存率为76．7％。Cox回归分析示疼痛时间、坏死范围和分期是影响疗效危险因素（OR〉1）。Kaplan—Meier生存曲线结果示：无痛、Ⅰ期、A型和中心型坏死生存率均为100％,且无影像进展;B型和稳定Ⅱ期生存率分别为95．8％和96．8％,且影像进展率均〈10％;疼痛时间≤6个月、坏死范围〈40％、不稳定Ⅱ期、C1型、周围型坏死生存率均〉75％,且影像进展〈50％。结论合理选择适用范围,中医药治疗ONFH对缓解症状、改善功能具有一定的疗效。中医药保髋适应证：（1）前提条件：疼痛程度属于B级或以下,同时患髋Hams评分等级为优、良或可;（2）绝对适应证：中心型、A／B型坏死或无痛的Ⅰ期坏死,可不考虑疼痛时间、坏死范围、分期与形态;（3）稳定Ⅱ期,若无痛,可不考虑疼痛时间、坏死范围、部位与形态,若疼痛,则与不稳定Ⅱ期条件一致;（4）相对适应证：Ⅱ（不稳定）、Ⅲ或Ⅳ期,同时满足坏死范围〈40％、疼痛时间〈12个月、C1型。     

股骨头坏死中医证型分布规律的文献研究和系统评价

目的对股骨头坏死中医证型分布规律进行文献研究和系统评价。方法计算机检索1979～2012年问有关股骨头坏死中医证型的研究文献,采用频数分布、X^2检验统计方法对中医复合证型、中医单证证型进行整理,将目前临床应用频率最高的复合证型拆分后进行聚类分析,得出目前最适宜临床应用的证型体系。结果共有46篇文献符合纳入标准,文献中出现42种证型,病例总数1705例,共15种复合证型,其中肝肾亏虚、气滞血瘀、气血双虚三种证型出现频数较高,将复合证型拆分后得到14种单证证型,经聚类分析聚成三类,第一类为血瘀、肾虚、气滞,在股骨头坏死发病中的起到重要作用。结论文献中股骨头坏死中医证型尚无一致标准,根据文献研究结果,结合统计学方法和临床工作,可认为与滞、向瘀、肾虚是股骨头坏死的基本证候。