PFKFB3参与脂多糖诱导肺成纤维细胞及肺组织有氧糖酵解的观察性研究

目的:观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导肺成纤维细胞及肺组织有氧糖酵解关键酶6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶3(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-biphosphatase 3,PFKFB3)表达及其与有氧糖酵解的关系,探讨在LPS诱导肺纤维化过程中肺成纤维细胞和肺组织有氧糖酵解的潜在机制。方法:将人胚肺成纤维细胞MRC-5细胞系采用随机数字表法分为PBS对照组(PBS组)和LPS组(每组3孔),Western blot检测LPS刺激细胞6h后PFKFB3表达情况,同时免疫荧光显示PFKFB3在细胞内的定位情况;于LPS刺激后48 h采用海马细胞能量代谢仪检测细胞耗氧率(oxygen consumption rate,OCR)和产酸率(extracellular acidification rate,ECAR),并采用比色法检测有氧糖酵解产物乳酸产生情况,同时Western blot检测LPS刺激48 h后Ⅰ型胶原蛋白合成情况。将24只C57BL/6小鼠按随机数字表法分为生理盐水对照组(C组)、LPS组(L组),每组12只,L组、C组连续5d分别腹腔注射5 mg/kg LPS、等容量生理盐水;每组各6只于造模后第7天无痛处死小鼠,取血浆和肺组织,Western blot和免疫荧光检测各组肺组织中PFKFB3表达情况,比色法检测各组小鼠血浆中乳酸的含量;剩余小鼠于造模后第28天取肺组织,一侧肺通过Western blot检测肺组织Ⅰ型胶原蛋白合成情况,另一侧肺做石蜡切片进行病理学检测。结果:与PBS组比较,LPS刺激细胞6h后PFKFB3表达明显升高(P<0.05);LPS刺激细胞48 h后,与PBS组比较,LPS组细胞耗氧率降低、产酸率增加,代谢产物乳酸含量明显升高(P<0.05),同时细胞Ⅰ型胶原蛋白合成显著增加(P<0.05)。与C组比较,L组小鼠腹腔注射LPS 7 d后肺组织中PFKFB3表达明显升高(P<0.05),血浆乳酸含量明显升高(P<0.05);LPS注射28 d后,L组小鼠Ⅰ型胶原蛋白表达明显升高(P<0.05),肺组织出现明显纤维化。结论:在LPS诱导的肺纤维化过程中,LPS可诱导肺成纤维细胞和肺组织中PFKFB3蛋白表达,该过程与其有氧糖酵解过程相关,PFKFB3的表达上调可能是LPS诱导肺成纤维细胞和肺组织有氧糖酵解和肺纤维化的关键环节。     

乳酸-转化生长因子-β1途径促进肺成纤维细胞活化介导机械通气相关性肺纤维化的机制研究

目的探讨机械通气促进肺成纤维细胞活化及肺纤维化的机制,明确乳酸-转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)途径在该过程中的作用。方法①将C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为假手术组(Sham组)和机械通气组(MV组),每组12只,其中Sham组仅行麻醉插管处理并保持自主呼吸,MV组采用20 ml/kg潮气量和70次/min通气频率行单次2 h机械通气,观察7 d后取材。采用H-E染色、Masson染色观察肺组织的损伤程度和纤维化程度,采用Western blot法检测肺组织Ⅰ型胶原蛋白α1链(collagen typeⅠalpha 1 chain,COL1A1)、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和TGF-β1的蛋白表达情况,采用比色法检测小鼠肺泡灌洗液(bronchial alveolar lavage fluid,BALF)和血清的乳酸浓度。②将人胚肺成纤维细胞MRC-5采用随机数字表法分为4组(每组3个孔):PBS对照组(Con组)、1 mmol/L乳酸组(Lac1组)、10 mmol/L乳酸组(Lac_(10)组)和20 mmol/L乳酸组(Lac_(20)组),于乳酸刺激MRC-5细胞24 h后采用ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1含量,同时采用细胞免疫荧光观察α-SMA的表达情况;于乳酸刺激MRC-5细胞72 h后采用Western blot法检测不同分组细胞COL1A1和α-SMA的表达情况,并通过ELISA法检测细胞培养上清液Ⅰ型前胶原羧基肽(procollagen type I carboxyl peptide,PICP)的含量变化。③另取MRC-5细胞采用随机数字表法分为3组(每组3个孔):PBS对照组(Con组)、20 mmol/L乳酸组(Lac_(20)组)和20 mmol/L乳酸+TGF-β1受体抑制剂(SB431542)组(Lac_(20)+SB组),处理24 h后采用Western blot法检测不同分组细胞COL1A1和α-SMA的表达情况。结果①与Sham组比较,MV组小鼠肺泡间隔增厚、胶原蛋白沉积、肺纤维化程度加重,伴有COL1A1、α-SMA和TGF-β1表达水平升高(P<0.05),血清和BALF乳酸浓度升高(P<0.05)。②与Con组比较,Lac_(10)组和Lac_(20)组细胞培养上清液中TGF-β1、PICP含量升高(P<0.05),细胞中COL1A1和α-SMA表达水平升高(P<0.05),免疫荧光观察到α-SMA在细胞内表达增多(P>0.05)。③与Lac_(20)组比较,Lac_(20)+SB组细胞COL1A1和α-SMA表达水平降低(P<0.05)。结论机械通气可以通过乳酸-TGF-β1途径活化肺成纤维细胞,引起胶原蛋白分泌,促进机械通气相关性肺纤维化进程。     

脉波轮廓温度稀释连续心排量测量技术在重症急性胰腺炎合并急性呼吸道窘迫综合征患者液体管理中的应用

目的探讨脉波轮廓温度稀释连续心排量测量技术（PICCO）应用于重症胰腺炎（SAP）合并急性呼吸道窘迫综合征（ARDS）患者液体管理的指导意义。 方法选择SAP并发ARDS的患者57例,分成实验组和对照组。治疗组为29例,采用PICCO监测下的液体输注;对照组为28例,采用传统液体输注。对两组患者ARDS的发生率、应用血管药物的比例、气管插管率、有创机械通气时间、治疗0~<6 h、6~<24 h、24~<48 h和48~72 h复苏液体量及病死率进行比较分析。 结果与对照组相比,实验组患者ARDS发生率[17.24%（5/29）vs. 42.85%（12/28）,χ²=4.47,P=0.045]、气管插管率均较低[6.90%（2/29）vs. 28.57%（8/28）,χ²=4.63,P=0.041],有创机械通气时间较短[（5.8 ± 2.7）d vs.（9.1 ± 3.7）d,t=4.01,P<0.001];实验组与对照组须应用血管活性药物的例数（4/29 vs. 7/28,χ²=1.15,P=0.330）及病死率[10.34%（3/29）vs. 17.86%（5/28）,χ²=0.47,P=0.670]比较,差异均无统计学意义;实验组治疗0~<6 h复苏液体量较对照组明显增多（P<0.05）,治疗6~<24 h、24~<48 h和48~72 h复苏液体量较对照组明显减少（P均< 0.05）。 结论PICCO可对SAP合并ARDS患者的早期液体复苏进行快速准确的指导,能充分扩容以避免其肺损伤。     

B型脑钠肽在围术期心力衰竭的应用

背景 严重心力衰竭时,可能存在内源性脑钠肽相对不足和/或脑钠肽的抵抗.B型脑钠肽(B-type natriuretic peptide,BNP)因在心力衰竭的诊断、治疗及预后判断的特殊价值而备受关注.奈西立肽是重组人脑钠肽,已成为治疗心力衰竭的一种新药.目的 了解BNP与围术期心力衰竭的关系及其重组体--奈西立肽临床应用.内容 BNP与围术期心力衰竭的关系及其重组体--奈西立肽临床应用的研究现状.趋向 围术期BNP水平与心衰的严重程度呈正相关,可用于心力衰竭的诊断、治疗及预后的判断.奈西立肽对围术期心力衰竭的患者具有很好的疗效,必将逐步应用于临床.     

N-末端B型利钠肽原预测外科重症监护室危重患者预后的价值及其相关影响因素

目的 探讨N-末端B型利钠肽原(N-terminal pro-B-type natriuretie peptide,NT-proBNP)预测外科重症监护室(surgical intensive care unit,SICU)预后的价值及其相关影响因素.方法 分析入住SICU危重患者136例,收集相关的临床资料,分别检验血中NT-proBNP水平 ;根据住院30 d死亡情况分为死亡组与出SICU组,并比较和用多变量回归分析患者入SICU时NT-proBNP水平与各因素的相关性.结果 死亡组(3.24±0.60)和出SICU组(2.93±0.65)的NT-proBNP差异有统计学意义(P=0.021).与NT-proBNP显著相关的因素依次为:美国纽约心脏病学会(the United States of New York Heart Association,NYHA)心功能分级、年龄、肾功能 ;其他如性别、血红蛋白、急性生理及慢性健康状况评分Ⅱ(acute physiology and chronic healthy evaluationⅡ,APACHEⅡ)、手术方式以及是否脓毒症或高血压在多变量回归分析中不能体现.结论 NT-proBNP对外科危重患者能否转出SICU有很好的预测价值,且其与心功能分级、年龄、肾功能密切相关,故在用NT-proBNP判断危重患者病情及预后时需综合考虑上述因素的影响.     

转化生长因子-β1介导有氧酵解促进机械通气相关性肺纤维化的研究

目的:明确转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1, TGF-β1）在机械通气促进肺组织有氧酵解并加速肺纤维化过程中的作用。方法:将24只C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为假手术组（Sham组）、溶剂对照组（Vehicle组）、机械通气组（MV组）和TGF-β1受体抑制剂+机械...     

案例教学法联合情景模拟教学法在住院医师规范化培训中的应用

正住院医师规范化培训是临床医学专业学生毕业后继续教育的重要组成部分,目前已成为提升医师队伍职业素养、提升医疗质量的重要举措[1]。重症医学是研究危重病发生、发展规律及诊治方法的临床二级学科,涉及各临床专科危重患者的救治工作,是住院医师规范化培训阶段的重要轮转科室之一。重症患者病情变化复杂,并且可先后累及不同器官和系统,诊治过程中需使用到多种先进的监测和操作技术。在新时代探索科学有效的临床教学方法,使培训对象在有限的轮转学习周期内迅速掌握重