脂肪干细胞来源外泌体促进糖尿病小鼠创面愈合的实验研究

目的探讨脂肪干细胞来源外泌体(adipose-derived stem cell released exosomes,ADSC-Exos)对糖尿病小鼠创面愈合的影响。方法取患者自愿捐赠脂肪组织,采用酶消化法分离培养ADSCs,并于第3代细胞上清液提取Exos(ADSC-Exos);透射电镜观察ADSC-Exos形态,Western blot检测膜表面标志性蛋白Alix、CD63,纳米颗粒跟踪分析仪检测粒径分布。取患者自愿捐赠皮肤组织,采用酶消化法分离培养成纤维细胞。将PKH26标记的ADSC-Exos与第5代成纤维细胞培养,共聚焦荧光显微镜观察其能否进入细胞,采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)及划痕法观察ADSC-Exos对成纤维细胞增殖及迁移的影响。取24只8周龄Balb/c雄性小鼠制备糖尿病模型后,背部制备直径8 mm全层皮肤缺损创面,实验组(n=12)及对照组(n=12)创面真皮层分别注射0.2 mL ADSC-Exos及PBS。第1、4、7、11、16、21天大体观察创面愈合情况,计算创面愈合率;第7、14、21天取材,行组织学(HE及Masson)及CD31免疫组织化学染色,观察创面结构、胶原纤维及新生血管情况。结果ADSC-Exos为边缘清晰、大小分布均匀的膜性囊泡;粒径为40~200 nm,平均102.1 nm;膜表面标志性蛋白Alix、CD63均呈阳性。ADSC-Exos与成纤维细胞复合培养观察示,ADSC-Exos可进入成纤维细胞胞内,并能促进成纤维细胞增殖及迁移。动物实验显示,实验组小鼠背部创面愈合明显快于对照组,各时间点创面愈合率差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,实验组创面结构愈合更好,愈合前期新生微血管更多,愈合后期胶原纤维沉积更多;其中,第7、14、21天创面缺损长度,第7、14天微血管数量,第14、21天胶原纤维沉积百分比,组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论ADSC-Exos通过促进创面血管新生以及成纤维细胞增殖、迁移和胶原合成来促进糖尿病小鼠创面愈合。     

脂肪干细胞来源外泌体对人脐静脉血管内皮细胞增殖、迁移及管样分化的影响

目的探讨脂肪干细胞来源外泌体(adipose-derived stem cell released exosomes,ADSC-Exos)对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖、迁移及管样分化的影响。方法取吸脂患者自愿捐赠的脂肪组织,采用酶消化法分离培养获得ADSCs,并行流式细胞检测及成脂诱导鉴定。收集第3代ADSCs上清液提取外泌体,透射电镜观察其形态,Western blot检测其膜表面标志性蛋白Alix和CD63,用纳米颗粒跟踪分析仪NanoSight分析外泌体粒径分布范围。用PKH26荧光标记的ADSC-Exos与HUVECs共培养后,共聚焦显微镜观察ADSC-Exos能否进入HUVECs。将ADSC-Exos与HUVECs共培养1、2、3、4、5 d,CCK-8法检测ADSC-Exos对HUVECs增殖影响;共培养12 h时ELISA法检测细胞上清液VEGF蛋白表达量。采用Transwell迁移实验检测ADSC-Exos对HUVECs迁移能力的影响。通过体外Matrigel基质胶实验,观察ADSCExos对HUVECs管状结构形成的影响;将HUVECs与Matrigel基质胶混合后联合ADSC-Exos注射在BALB/c雄性裸鼠皮下,2周后检测基质胶中新生血管情况,计算平均血管密度(mean blood vessel density,MVD)。上述实验均以等量PBS作为对照。结果经鉴定所培养细胞符合ADSCs的特征。ADSC-Exos为形态一致的圆形或椭圆形膜性囊泡,表达标志性蛋白Alix和CD63,粒径范围30~200 nm。共聚焦显微镜观察示ADSC-Exos可被HUVECs摄取。CCK-8法检测示,各时间点实验组细胞增殖均优于对照组(P0.05)。Transwell实验结果显示,实验组跨膜迁移细胞数较对照组显著增多(t=9.534,P=0.000)。在体外Matrigel胶成管实验中,实验组管样结构数明显多于对照组(t=15.910,P=0.000);在体内实验中,实验组MVD亦显著高于对照组(t=16.710,P=0.000)。ELISA检测示,实验组细胞上清液VEGF蛋白表达量明显高于对照组(t=21.470,P=0.000)。结论 ADSC-Exos可促进HUVECs增殖、迁移及管样结构形成,提示ADSC-Exos可促进血管新生。     

大学生童年期虐待与特质抑郁和正念的关系

目的:探讨大学生童年期虐待、特质抑郁和正念之间的关系。方法:选取大学生415名,采用童年期创伤问卷(CTQ)、状态-特质抑郁量表中特质抑郁分量表(T-DEP)和正念注意知觉量表(MAAS),分别测量大学生童年期虐待、特质抑郁和正念。结果:童年期虐待得分与特质抑郁得分呈正相关(r=0.4,P<0.01),与正念得分呈负相关(r=-0.37,P<0.01);正念在童年期虐待与特质抑郁得分关系中的调节作用有统计学意义(β_高=0.60、β_低=0.33,均P<0.001),与特质抑郁中快感缺失维度得分关系中的调节作用有统计学意义(β_高=0.75、β_低=0.31,均P<0.001)。结论:有童年期虐待经历的大学生表现出更高水平的特质抑郁,其特质抑郁受到正念的调节。     

血栓通改善骨科手术后高凝状态31例

目的观察血栓通改善骨科术后高凝状态的作用,探讨其作用机制。 方法骨科手术患者 62 例,随机分为对照组和治疗组各 31 例,均术后常规行抗感染和补充体液治疗,治疗组于术后第 1 天起加用血栓通 400 mg＋5%葡萄糖注射液 250 mL静脉滴注,连续 6 d。分别于术前、术后即刻、术后 3 和 7 d 采用凝固法检测凝血因子Ⅱ时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT） 和凝血因子Ⅰ（FIB）,酶联免疫吸附双抗体夹心法定量测定血浆D 二聚体（D D）含量,术后7 d彩色B超检查下肢深静脉血栓发生情况。结果两组术后APTT 均无明显变化,术后3 d PT均较术前缩短（P＜0.05）,组间差异无统计学意义;对照组术后7 d PT进一步缩短,治疗组变化不明显,组间差异有统计学意义（P＜0.05）;两组术后即刻FIB和D D均升高（P ＜0.05）,随着时间延长,对照组FIB和 D D逐渐升高（P＜ 0.05）,治疗组术后 3 d D D升高不明显,术后7 dD D下降,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。术后7 d治疗组下肢深静脉血栓发生率显著低于对照组。结论血栓通可有效改善骨科手术所致血液高凝状态,降低术后血浆 D D 水平。     

X线、多层CT、MRI影像检查对脊柱结核的诊断价值比较

目的比较X线、多层CT、MRI对脊柱结核患者病灶显示及诊断价值。方法以我院2013年1月-2015年6月经病理证实的30例脊柱结核患者为研究对象,对其影像学资料(X线、多层CT、MRI)进行回顾性分析,与病理结果比较,观察其影像学表现的同时比较三者对脊柱结核各征象阳性检出率。结果 MRI、CT对椎间盘受累、椎旁脓肿及椎管受累阳性检出率均明显高于对照组,且MRI检出率明显更高,差异有统计学意义(P0.05);CT对死骨形成检出率为96.9%,显著高于X线、MRI的34.4%、31.3%,差异有统计学意义(P0.001)。结论 X线、多层CT、MRI在脊柱结核诊断中各有优劣,CT对死骨形成检出率较高,MRI对椎体破坏、椎旁脓肿、椎间盘及椎管受累诊断有明显优势。     

循环雌激素水平对裸鼠颗粒脂肪移植转归的影响

目的探讨循环雌激素水平对裸鼠颗粒脂肪移植转归的影响。方法取6~8周龄雌性裸鼠18只(体质量20~25 g),随机分为3组(n=6)。去势组采用卵巢切除术制备去势裸鼠模型,高雌激素组及正常雌激素组仅作相同切口进入腹膜后,不切除卵巢组织。术后高雌激素组每3天灌胃雌二醇(0.2 mg/g)1次,共持续30 d;其他两组同时间点等量PBS灌胃。术后30 d取3组裸鼠尾静脉血经ELISA检测雌二醇浓度后,将接受抽脂术的健康女性捐赠的颗粒脂肪注入裸鼠头皮下(0.3 mL/只)。脂肪移植后8周取材大体观察、称重后,制备切片行HE染色、CD31-围脂滴蛋白荧光染色、解耦联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)免疫组织化学染色和雌激素受体α免疫荧光染色,测量脂肪细胞直径及脂肪组织血管密度;实时荧光定量PCR检测UCP1和雌激素受体αmRNA表达。结果实验期间裸鼠无死亡。ELISA检测显示与正常雌激素组相比,去势组雌二醇浓度明显降低,高雌激素组明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。脂肪移植8周后,移植物体积从大到小依次为去势组、正常雌激素组、高雌激素组,其中去势组移植物湿重显著高于高雌激素组(P<0.05)。组织学染色显示,与正常雌激素组相比,去势组脂肪细胞增大且围脂滴蛋白表达较弱、血管密度减小,几乎不表达脂肪标记物UCP1,雌激素受体α阳性细胞减少;而高雌激素组上述观察结果与去势组相反;脂肪细胞直径、血管密度及雌激素受体α阳性细胞组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。实时荧光定量PCR检测显示,与正常雌激素组相比,高雌激素组移植物UCP1和雌激素受体αmRNA相对表达量升高,而去势组均降低;组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论体内循环雌激素水平对脂肪移植的转归有显著影响。低雌激素水平导致移植物脂肪细胞肥大,高雌激素水平导致脂肪移植物中生成大量米色脂肪并伴随血管密度增大,其机制可能与升高的循环雌激素水平活化脂肪细胞上雌激素受体α相关。     

两种钢板内固定治疗胫骨平台粉碎性骨折的疗效比较

目的：比较解剖钢板和Liss钢板对胫骨平台粉碎性骨折的疗效。方法：75例胫骨平台骨折患者分为2组,治疗组（38例）行解剖钢板固定,对照组（37例）行Liss钢板固定,比较两组疗效。结果：两组患者手术时间、术后负重时间、平均住院时间、骨折愈合时间等比较差异无统计学意义（P〉0.05）,平均住院费用比较差异有统计学意义（P〈0.01）。治疗组治疗有效率与对照组比较差异无统计学意义。结论：解剖钢板与Liss钢板对胫骨平台骨折患者疗效相当,但解剖钢板治疗费用较少、技术要求不高,更容易在基层医院临床推广使用。     

脂肪干细胞来源外泌体对人脐静脉血管内皮细胞增殖、迁移及管样分化的影响北大核心CSCD

目的探讨脂肪干细胞来源外泌体(adipose-derived stem cell released exosomes,ADSC-Exos)对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖、迁移及管样分化的影响。方法取吸脂患者自愿捐赠的脂肪组织,采用酶消化法分离培养获得ADSCs,并行流式细胞检测及成脂诱导鉴定。收集第3代ADSCs上清液提取外泌体,透射电镜观察其形态,Western blot检测其膜表面标志性蛋白Alix和CD63,用纳米颗粒跟踪分析仪NanoSight分析外泌体粒径分布范围。用PKH26荧光标记的ADSC-Exos与HUVECs共培养后,共聚焦显微镜观察ADSC-Exos能否进入HUVECs。将ADSC-Exos与HUVECs共培养1、2、3、4、5 d,CCK-8法检测ADSC-Exos对HUVECs增殖影响;共培养12 h时ELISA法检测细胞上清液VEGF蛋白表达量。采用Transwell迁移实验检测ADSC-Exos对HUVECs迁移能力的影响。通过体外Matrigel基质胶实验,观察ADSCExos对HUVECs管状结构形成的影响;将HUVECs与Matrigel基质胶混合后联合ADSC-Exos注射在BALB/c雄性裸鼠皮下,2周后检测基质胶中新生血管情况,计算平均血管密度(mean blood vessel density,MVD)。上述实验均以等量PBS作为对照。结果经鉴定所培养细胞符合ADSCs的特征。ADSC-Exos为形态一致的圆形或椭圆形膜性囊泡,表达标志性蛋白Alix和CD63,粒径范围30~200 nm。共聚焦显微镜观察示ADSC-Exos可被HUVECs摄取。CCK-8法检测示,各时间点实验组细胞增殖均优于对照组(P<0.05)。Transwell实验结果显示,实验组跨膜迁移细胞数较对照组显著增多(t=9.534,P=0.000)。在体外Matrigel胶成管实验中,实验组管样结构数明显多于对照组(t=15.910,P=0.000);在体内实验中,实验组MVD亦显著高于对照组(t=16.710,P=0.000)。ELISA检测示,实验组细胞上清液VEGF蛋白表达量明显高于对照组(t=21.470,P=0.000)。结论 ADSC-Exos可促进HUVECs增殖、迁移及管样结构形成,提示ADSC-Exos可促进血管新生。     

骨质疏松性髋部骨折一年内死亡的危险因素分析

目的 探讨骨质疏松性髋部骨折1年内死亡的独立危险因素。方法 回顾性分析2012年1月至2016年5月我院收治的226例骨质疏松性髋部骨折病人的临床资料,收集病人的性别、年龄、身体质量指数（body mass index, BMI）、基础疾病情况、是否单独居住、日常生活能力评分、骨密度T值、骨折类型、受伤至手术时间、治疗方式、手术方式、麻醉方式、美国麻醉医师协会（American Society of Anesthesiology, ASA）分级以及术前实验室检查指标等临床资料,先后进行单因素分析和多因素Logistic回归分析。结果 1年随访期内,有33例（14.60%）病人死亡,根据病人是否死亡分为死亡组（33例）和生存组（193例）。单因素分析结果显示年龄、性别、基础疾病种类数、慢性肺病、贫血、痴呆、单独居住、日常生活能力评分、骨折至手术时间、治疗方式、全身麻醉、ASA分级以及入院时淋巴细胞、血清白蛋白、血红蛋白、肌酐和骨密度与骨质疏松性髋部骨折1年内死亡相关（P＜0.05）。多因素Logistic回归分析结果表明高龄（OR=2.48,P=0.006）、男性（OR=1.53,P=0.016）、合并基础病种类数≥3类（OR=2.52,P=0.024）、共患慢性肺病（OR=1.74,P=0.017）、共患痴呆（OR=1.21,P=0.025）、日常生活能力评分低（OR=1.61,P=0.014）、ASA分级为Ⅲ~Ⅳ级（OR=1.36,P=0.033）、血清白蛋白水平低（OR=1.30,P=0.041）以及保守治疗方式（OR=1.21,P=0.012）是骨质疏松性髋部骨折1年内死亡的独立危险因素。结论 对于高龄、男性、合并基础疾病类数≥3类、患慢性肺病、痴呆、日常生活能力评分低、ASA分级为Ⅲ~Ⅳ级、血清白蛋白水平低以及保守治疗方式的骨质疏松性髋部骨折病人应予以重视,全面评估病人的身体机能和健康状况,制定合适的治疗方案。