日本血吸虫分泌蛋白基因Sjsp16的克隆与表达

目的　克隆和表达日本血吸虫新的分泌蛋白Sjsp16的编码基因。　 方法　根据EST测序的结果设计引物 ,从含有Sjsp16基因的cDNA克隆中扩增得到该编码基因 ,亚克隆入原核表达载体 pET2 8中表达 ,然后用生物信息学的方法对蛋白结构功能进行预测。　结果　成功克隆和表达了日本血吸虫分泌蛋白基因Sjsp16,生物信息学分析提示该基因编码蛋白的N端带有一个信号肽序列 ,是一个分泌蛋白 ,含有一个ML功能结构域 ,具有 4种潜在的功能作用位点 ,即 1个N 糖基化位点、3个蛋白激酶C磷酸化位点、4个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和 3个肉豆蔻酰化位点。　结论　Sjsp16基因编码蛋白为具有脂质识别和结合功能的分泌蛋白 ,可能为潜在的血吸虫病药物靶点或疫苗候选分子。     

鼻咽癌中KLF6基因突变的检测

背景与目的：鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC)高发于中国南方和东南亚地区,其发病是一个多因素,多步骤的过程,与遗传因素,EB病毒感染和环境因子有关,但分子机理仍不清楚,KLF6基因编码一种广泛表达的核转录因子,在某些前列腺癌肿瘤中发现有高频的等位基因的丢失和基因突变,本研究通过对KLF6基因在NPC肿瘤中的突变检测,探讨KLF6基因与NPC发病的关系。方法：采用PCR-直接测序分析方法。在19例散发性NPC组织细胞和3个NPC细胞系（CNE1,CNE2,SUNE1）中对KLF6编码区和拼接位点进行检测。结果：在3你散发性NPC肿瘤组织DNA中检测到KLF6基因的3个不同位置的错义改变,分别为GAG→TG（Glu75Val),AGG→AGG（Ser136Arg)和AGA→AAA（Arg243Lys),在50个随机正常个体（100条染色体）和3个NPC细胞系中没有发现这3个位点的碱基变异,结论：这3个变异可能是KLF6基因的新的突变位点,在某些NPC发病中可能有作用。     

Crigler-Najjar综合征Ⅱ型患者及其家系UGT1A1基因突变的分析

目的:分析1例遗传性高非结合胆红素血症Crigler—Najjar综合征Ⅱ型(CN—Ⅱ)患者及其家系尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因(UGT1A1)的突变特征,研究其遗传特点和诊断。方法:采用肝功能试验、低热卡试验、肝脏病理组织学和苯巴比妥诱导试验治疗等方法确诊1例CN—Ⅱ,追踪并抽取该先证者及其家系11例成员的外周静脉血,提取基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)方法扩增UGT1A1基因第1～5外显子基因片段,用直接DNA测序法筛查UGT1A1基因突变。结果:该先证者UGT1A1基因的第5外显子第486密码子发生了T→G碱基的错义突变,导致了酪氨酸变成了天门冬氨酸(Tyr486Asp)。先证者为该突变的纯合子,其父母、妹妹及三位祖父为该突变的杂合子。其余4例未患病成员均未发现UGT1A1基因突变。结论:Tyr486Asp突变是本例CN—Ⅱ家系的致病性基因,该突变不影响UGT1A1基因启动子区苯巴比妥酸的应答元件,其遗传规律符合常染色体隐性遗传。经查询人类基因文库证实,本例CN—Ⅱ基因突变类型在我国是首例,国外尚未见到相同的家系分析报告。     

辐射对小鼠精子发生过程中印记基因表达的影响

目的筛选在小鼠精子发生过程中受电离辐射影响表达发生改变的印记基因。方法选择雄性BALB／c小鼠8只，分为实验组和对照组X射线全身照射0．1Gy／d，连续13d，建立辐射干扰小鼠精子发生模型。提取实验组和对照组睾丸RNA，采用上海生物芯片中心小鼠寡核苷酸基因表达谱芯片筛选表达发生改变的印记基因，对感兴趣的基因经半定量RT—PCR验证。结果12个表达发生改变的印记基因，6个上调，6个下调，其中Igf2、Peg3基因Ratio值分别为3．859和0．397，经半定量RT—PCR验证与芯片结果相符。结论X射线全身照射可导致小鼠睾丸部分印记基因表达发生改变。     

质谱在免疫学中的应用及研究进展

质谱 (massspectrometer,MS)分析是分析化学中进行物质成分和结构分析的主要技术之一 ,其基本原理是将分析样品在特定的条件下转变为高速运动的离子 ,这些离子根据质量、电荷比的不同在静电场和磁场的作用下得到分离 ,然后用特定的检测器记录各种离子的相对强度并形成质谱图。质谱仪的核心是离子源和分析器。目前分析器的类型主要有四极杆 (quadrupole)、离子阱 (iontrap)、飞行时间 (timeofflight,TOF)、离子回旋共振 (ionconvolutionresonance ,ICR)等。离子源也多种多样 ,有工作在真空状态下的如电子轰击源 (electronbombardment,EB)…     

一个Fabry病家系的GLA基因突变分析

目的 对一个临床诊断的非典型Fabry病患者进行α半乳糖苷酶基因(GLA)进行突变分析。方法 抽取患者家系中4名成员的外周血基因组DNA，PCR分段扩增位于Xq22的GLA基因的7个外显子，产物纯化后直接进行DNA测序检测突变。结果 测序显示，男性患者GLA基因的第6外显子存在CGA301CAA(Arg301Gln)突变，该患者为带有突变基因的半合子，母亲为携带突变基因的杂合子，哥哥及父亲为CGA301野生型的半合子。结论 对临床诊断的Fabry病患者及其亲属，进行GLA基因突变检测可以进行基因诊断，并有助于早期筛选出家系中的其他患者。     

一个Fabry病家系的GLA基因突变分析

目的对一个临床诊断的非典型Fabry病患者进行α半乳糖苷酶基因(GLA)进行突变分析.方法抽取患者家系中4名成员的外周血基因组DNA,PCR分段扩增位于Xq22的GLA基因的7个外显子,产物纯化后直接进行DNA测序检测突变.结果测序显示,男性患者GLA基因的第6外显子存在CGA301CAA(Arg301Gln)突变,该患者为带有突变基因的半合子,母亲为携带突变基因的杂合子,哥哥及父亲为CGA301野生型的半合子.结论对临床诊断的Fabry病患者及其亲属,进行GLA基因突变检测可以进行基因诊断,并有助于早期筛选出家系中的其他患者.     

胰岛素、胰高血糖素和地塞米松调节PEPCK启动子活性的体外研究

目的 探讨胰岛素、胰高血糖素和地塞米松对PEPCK启动子活性的影响及其意义。方法 将PEPCK启动子构建入表达载体pGL3-Basic，采用Lipofect脂质体转染法将携带PEPCK启动子的质粒pGt3-Basic-PEPCK转染至大鼠肝细胞株Hepal-6细胞，12h后加入不同浓度的胰岛素、胰高血糖素和地塞米松，孵育48h后分别检测其报告基因萤虫素酶的活性。结果 生理水平的胰岛素可明显抑制PEPCK启动子的活性，与胰岛素的浓度正相关：地塞米松则上调PEPCK启动子的活性，而胰高血糖素对其活性无影响。结论 PEPCK启动子在肝细胞中受胰岛素的负调控、地塞米松的正调控，若用于调控胰岛素基因的表达，将使糖尿病的基因治疗更安全更可行。     

应用微卫星DNA基因分型技术进行双生子卵型鉴定

目的 用微卫星DNA基因扫描和分型技术建立双生子卵型鉴定法。方法 选取69对同性别双生子、6对异性别双生子和17对同胞对,抽提基因组DNA,单盲设计,随机编号后,采用9对荧光标记的,在中国人群中具有高度杂合度的短串联重复序列（short tandem repeat,STR)引物,进行基因扫描和分型分析。根据这9个STR基因型的一致性来鉴别卵型。结果 9个STR基因型完全一致的63对受检者全部为同性别双生子,6对异性别双生子和17对同胞对的STR基因型均不完全一致,另有6对同性别双生子的STR基因型也不完全一致,经计算采用6个或5个STR位点判定同性别同卵双生的可信性分别大于99.6%和99%,采用全部9个位点判定同性别同卵双生的可信性大于99.95%。结论 STR基因扫描和分型技术为在基因组水平上直接判别双生子卵型,提供了一种准确,可靠的鉴定方法,它还有快速,简便等优点。