对硫磷人工抗原合成及其鉴定

目的 制备对硫磷人工抗原和抗血清，为建立酶联免疫吸附法提供技术储备。方法 还原对硫磷硝基成为氨基，合成半抗原氨基对硫磷；重氮化偶联大分子载体牛血清白蛋白制备人工抗原；免疫新西兰白兔。进行多抗制备。结果 合成的半抗原核磁共振图谱鉴定结果为6：6．9～7(m，2H，CH2)6．4～6．5(m，2H，CH2)4．1～4．2(q，4H-CH2)3．4(s，2H，NH2)1．3～1．4(t，6H，CH3)；氨基对硫磷与牛血清白蛋白的结合比为35～36：1；抗血清经间接酶联免疫吸附法检测，效价达1：128000，双向免疫扩散实验测得抗血清与人工抗原形成沉淀；间接竞争酶联免疫吸附法测得抗血清对对硫磷最低抑制浓度为0．16ng／mL；经间接酶联免疫吸附法检测人工抗原与羊抗人血清、兔抗人血清、正常兔血清无交叉反应。结论 合成对硫磷半抗原及人工抗原纯度高、结合比高。具有较好的免疫原性。     

胃泌素释放肽前体双抗体夹心酶联免疫吸附法的建立及其应用

目的：胃泌素释放肽前体（ pro-gastrin releasing peptide , PGRP）作为小细胞肺癌肿瘤标志物的应用价值已成为近年来的研究热点,文中建立新型双抗体夹心酶联免疫吸附法（ enzyme-linked immune sorbent assay , ELISA ）方法检测患者血清PGRP抗原浓度。方法通过人工合成PGRP抗原决定簇对本实验室自行研制的单克隆抗体进行筛选;采用改良过碘酸钠法对筛选到的单克隆抗体进行辣根过氧化物酶标记,建立PGRP双抗体夹心酶联免疫吸附检测法;并与IBL公司PGRP试剂盒对比检测结果。结果新型ELISA检测标准抗原浓度范围为33～1．7×104 pg／mL,检测小细胞肺癌患者血清PGRP浓度灵敏度100％,特异度98．4％,IBL试剂盒检测灵敏度100％,特异度92．2％。结论新型ELISA方法可用于小细胞肺癌患者血清PGRP浓度检测。     

砷引起氧化应激作用机制的研究进展

日本学者Yamanaka在20世纪90年代提出砷甲基化代谢过程中生成的甲基化物通过诱发氧化应激导致砷致癌作用。他认为砷在体内甲基化形成有机砷这样一个氧化还原过程中，诱发氧化应激。同时指出有机砷能和氧分子反应形成自由基，其中二甲基砷自由基[（CH3）2As^-]和砷的过氧化自由基[（CH3）2AsO2^-]，作为砷致癌促进剂诱发人体肺、膀胱、皮肤等癌变发生。由于人体肺部存在高压氧，所以肺部可能是甲基砷．尤其是3价的二甲基砷酸（dimethylarsinous acid，DMA^Ⅱ）的靶器官，而且二甲基砷气体也可能由肺泡入血。在体内产生其他的活性氧自由基，直接或间接损伤细胞内的DNA或蛋白质，引起氧化损伤。目前已知人体摄入的砷化合物。在有氧环境中有小部分在体细胞内转化为活性氧（ROS）。过量的ROS可能损伤生物体内的各种生物大分子。[第一段]     

富氢水对γ射线照射Beagle犬淋巴细胞基因表达谱的影响

目的 利用基因芯片技术研究富氢水对γ射线照射后Beagle犬外周血淋巴细胞基因表达的影响.方法 将雄性Beagle犬随机分为对照组、单纯照射组和富氢水组(n=5),采用基因芯片技术对2.0 Gy60Coγ射线照射后6h各组Beagle犬外周血淋巴细胞的差异表达基因进行筛选,利用CGO (gene ontology)和KEGG(Kyoto encyclopedia of genes andgenomes)数据库对差异表达基因进行生物信息学分析,并应用实时荧光定量PCR技术对基因芯片结果进行验证.结果 单纯照射组筛选出差异表达2倍以上的基因4 730条,富氢水组筛选出差异表达2倍以上的基因4 493条,单纯照射组与富氢水组共同差异表达2倍以上的基因有1 606条;单纯照射组的差异表达基因对应的生物学过程、细胞组分及分子功能分别有10、9、3个功能簇,富氢水组差异表达基因对应的生物学过程、细胞组分及分子功能分别有15、3、4个功能簇.单纯照射组差异表达基因涉及19条生物学通路,富氢水组差异表达基因涉及24条生物学通路,单纯照射组与富氢水组的差异表达基因有5条共同生物学通路.选择2条差异表达基因进行mRNA水平的验证,PCR扩增结果与芯片结果具有良好的一致性.结论 富氢水对γ射线照射后Beagle犬外周血淋巴细胞基因表达的影响,可能涉及多种生物学过程、细胞组分、分子功能的改变及多条信号通路的激活.     

抗前胃泌素释放肽单克隆抗体的纯化及体外对小细胞肺癌的活性

目的探讨亲和层析法纯化抗前胃泌素释放肽（PGRP）单克隆抗体（MAb）的效果,为该法纯化其他抗体提供数据依据。方法采用蛋白A-琼脂糖亲和层析法纯化含有MAb的腹腔积液,并用SDS—PAGE和酶联免疫吸附（ELISA）法分别检测其纯度和效价,用流式细胞术和免疫组织化学法检测其对小细胞肺癌细胞株NCI—H446的组织切片的生物功能。结果亲和层析法纯化前小鼠腹腔积液蛋白质质量浓度平均为23．62mg／ml;纯化前、后蛋白总量分别为148．79和146．67mg,回收率为98．58％。腹腔积液中MAb质量浓度平均为5．21mg／ml;纯化的MAb纯度达95％以上。纯化后抗体免疫学活性均高于纯化前,提高了6．90～15．40倍。结论蛋白A-琼脂糖亲和层析法可快速、高效地从小鼠腹腔积液中纯化抗PGRPMAb,且抗体具有较高的纯度,免疫学活性明显提高,能够选择性的和小细胞肺癌细胞的PGRP结合。     

二巯基丙磺酸钠对氯化汞中毒大鼠肾脏基因表达的影响

[目的]运用基因芯片技术分析二巯基丙磺酸钠（DMPS）驱汞治疗对肾脏基因表达的影响,为进一步研究无机汞肾损伤及治疗的分子机制提供理论依据。[方法]健康雄性SD大鼠30只,随机分成3组,每组10只,阳性对照组和治疗组大鼠皮下注射氯化汞溶液建立亚慢性汞中毒肾脏损伤大鼠模型,阴性对照组大鼠皮下注射0．9％NaCl注射液,模型建好后治疗组大鼠肌肉注射DMPS驱汞治疗,阴性对照组和阳性对照组大鼠肌肉注射0．9％NaCl注射液,治疗结束后用基因芯片方法筛选大鼠肾脏差异表达基因,并用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法验证部分差异表达基因。[结果]阳性对照组与阴性对照组比较筛选出差异基因385个;治疗组与阴性对照组比较筛查出差异基因183个;治疗组与阳性对照组比较筛查出差异基因223个。DMPS治疗有效基因中明显差异表达基因23个,其功能涉及毒物、异物代谢,氧化应激应答,炎症应答,转录调节,离子转运和信号转导,细胞增殖与凋亡,胶原纤维、软骨的形成,神经递质代谢,糖类、脂类、氨基酸代谢等方面,并得到RT-PCR方法的验证。[结论]DMPS驱汞治疗可使汞中毒肾脏损伤差异基因得到明显恢复,这些明显恢复的基因可能在汞中毒肾脏损伤的发生和DMPS治疗中发挥重要作用。     

2 Gy γ射线照射对大鼠外周血淋巴细胞差异基因表达的影响

目的 探讨γ射线照射对大鼠外周血淋巴细胞基因表达的影响,筛选与辐射损伤密切相关的差异表达基因及生物学通路。方法 采用基因芯片技术对2 Gy ⁶⁰Co γ射线离体和整体照射后6 h大鼠外周血淋巴细胞差异表达基因进行筛选,利用基因本体（gene ontology,GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）数据库对差异表达基因进行生物信息学分析,并应用实时荧光定量PCR技术对基因芯片结果进行验证。结果 离体照射组与整体照射组筛选出差异表达3倍以上的共同差异基因55条;共同差异表达基因涉及的生物学通路有6个;2条差异表达基因的PCR扩增结果与芯片结果具有良好的一致性。结论 γ射线离体和整体照射可引起大鼠外周血淋巴细胞基因差异表达,涉及到多种生物学过程,表明淋巴细胞对辐射损伤的应答反应是复杂的、多基因协同作用的结果。     

核工业某厂放射工作人员与非放射工作人员的MDM2基因表达调查与分析

目的 探讨核工业某厂放射工作人员与非放射工作人员辐射敏感基因表达的差异。 方法 采集了3名健康人外周血进行60Co γ射线照射,建立辐照后鼠双微体基因2（MDM2）表达的剂量-效应关系,抽取核工业某厂96名工作人员（49名放射工作人员、47名非放射工作人员）外周血,利用实时荧光定量PCR技术检测放射工作人员外周血中MDM2基因的表达情况。 结果 在0~2 Gy剂量范围内,MDM2的表达水平随照射剂量增加而上升。某厂96名工作人员外周血MDM2基因表达水平的检测分析结果表明,非放射工作人员年龄因素对外周血MDM2基因表达无影响（F=2.11,P＞0.05）;放射工作人员外周血MDM2基因表达与非放射工作人员相比,差异具有统计学意义（t=7.78,P＜0.05）。 结论 电离辐射可以诱导人离体外周血MDM2基因表达改变,且基因表达与照射剂量存在一定的剂量相关性,MDM2有望成为核工业放射工作人员健康调查的敏感指标。     

双着丝粒染色体自动分析研究进展

双着丝粒染色体分析作为生物剂量估算的“金标准”,在大规模核辐射事件中对于快速做出临床决策至关重要。传统人工分析费时费力,通量低,且对人员的技术要求高,难以满足大规模核事故情况下大量人员剂量估算的要求。近年来,针对大规模辐射事件下受照人员高通量、快速、准确的剂量估算需求,研究者们开发了多种策略。本文介绍了双着丝粒染色体自动分析检测方法的研究进展,为国内同行开展基于双着丝粒染色体指标估算生物剂量研究提供参考。     

大鼠外周血淋巴细胞2 Gy γ射线照射后12 h差异基因表达谱的研究

目的 通过研究2 Gy γ射线离体和全身照后12 h大鼠外周血淋巴细胞差异基因表达谱的变化情况,在分子水平上为辐射损伤机制的研究提供依据。方法 利用基因芯片技术对大鼠离体和全身照射的外周血淋巴细胞进行辐射差异基因筛选和Pathway分析,并利用荧光定量PCR技术对基因芯片结果进行验证。结果 离体照射组筛选出差异3倍以上的基因2 001条,全身照射组筛选出差异3倍以上的基因2 590条。两组共同差异3倍以上的基因有312条。离体照射组涉及22个KEGG通路,全身照射组涉及35个KEGG通路,两组有10个共同的KEGG通路。选择其中3条基因进行实时荧光PCR定量分析,得到的相对定量结果与芯片检测结果趋势一致。结论 从照后12 h的研究结果中发现,差异表达基因涉及细胞凋亡、细胞周期及信号转导等多个方面,这将为深入研究这些辐射相关基因在淋巴细胞辐射损伤中的作用提供依据。