电离辐射诱导microRNA研究进展

微小RNA（microRNA,miRNA）是一类长度为21~23 nt的单链非编码小RNA。在真核生物中miRNA主要通过与编码蛋白质基因的信使RNA（mRNA）配对结合,在转录后水平抑制基因表达。越来越多的证据表明,miRNA与氧化应激特别是辐射生物效应相关,miRNA有可能成为放射病治疗的潜在新靶点。本文概述电离辐射诱导miRNA的研究进展。     

HBV启动子对肝细胞具有特异性转录活性的研究

目的：探讨HBV转录调控核心序列在肝细胞中转录的活性。方法：构建HBV增强子和启动子调控的荧光素酶报告栽体，用脂质体转染法将其转染肝细胞和非肝细胞，双荧光素酶报告基因试验检测其在不同细胞中的转录活性。结果：HBV启动子在2、2.15细胞中转录活性最高，在其他肝细胞中的转录活性显著高于非肝细胞。结论：由HBV启动子构建的载体可能是一种新颖的有前景的靶向性肝癌细胞基因治疗栽体。     

miR-195重组腺病毒表达载体构建及在细胞中的表达

目的:利用AdEasy系统构建miR-195的腺病毒表达载体,为研究miR-195的功能提供条件.方法:将miRNA-195前体序列从已构建的pcDNA-miR-195载体中克隆进穿梭载体pAdTrack-CMV,通过与骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中高效同源重组,获得完整的重组腺病毒质粒.利用HEK293细胞包装并扩增重组腺病毒Ad-195.Ad-195感染肺癌细胞A549后,利用miRNA的定量RT-PCR技术检测Ad-195在细胞中表达miR-195情况.随后荧光素酶报告基因实验证明,Ad-195表达的miR-195能够作用于BCL2基因上预测的miR-195靶位点.结果:实时定量PCR检测显示,Ad-195感染肺癌细胞A549后,miR-195表达水平有显著的上调.结论:miR-195的腺病毒表达载体构建成功,能够用于在细胞内过表达具有生物学功能的miR-195.     

DNA双链断裂感应分子ATM能与PTC1相互作用

目的：研究DNA双链断裂感应分子ATM与原癌基因ret重排活化蛋白PTC1的相互作用。方法：用Flag抗体Western印迹检测，ATM免疫共沉淀真核细胞内过表达的PTC1；RET抗体检测ATM免疫共沉淀真核细胞内过表达的c-ret;用HA／myc抗体Western印迹检测，HA－ret TK myc-LZPR免疫共沉淀蛋白复合物；荧光蛋白标记的亚细胞定位。结果：PTC1可以与ATM激酶相互作用，此作用不依赖于电离辐射，且不被PI3K家族特异性抑制剂沃氏蓝霉素（wortmannin)所抑制，而野生型RET蛋白则不能同ATM结合；缺失体实验进一步证明两者的结合区段为ATM的LZPR结构域与PTC1的酪氨酸激酶结构域，构建PTC1绿色荧光蛋白表达质粒的亚细胞定位实验显示，PTC1以弥散形式分布于细胞质内。结论：胞浆蛋白PTC1可能借债某种途径使ATM在DNA损伤反应发生后重新定位，介导了细胞的恶性转化机制。     

运用抑制消减杂交构建辐射诱导EST库

目的 克隆并鉴定低剂量辐射射诱导基因,为探讨低剂量辐射生物学效应分子机理提供有益信息。方法 0．5Gyγ射线照射人胚肺细胞后,用抑制消减杂交技术（Suppression Subtractive Hybridizaation,SSH)构建低剂量辐射诱导EST库。用反向Northern杂交法对库中SEST片段进行筛选,挑取阳性克隆测序,并在GenBank序列数据中进行同源性比较。结果 得到受照后表达升高90个EST序列,代表21个基因的转录产物,部分基因的功能已明确。从功能上分析,这些基因产物的生物学作用涵盖了细胞周期、信号转导、细胞骨架、代谢、蛋白合成等几个重要的细胞生物学代谢反应过程,显示出细胞对低剂量辐射反应过程的多样性。另外,实验还获得4个新cDNA序列。结论 利用抑制消减杂交技术,从辐射前后HEL细胞中,得到低剂量辐射诱导EST片段,它们与细胞周期、增殖、代谢、信号转导、应激反应等相关,这些基因可能在细胞的低剂量辐射效应中起到重要作用。     

不同缺氧模型对HepG2细胞中miR-210表达的影响

目的探讨不同缺氧条件对HepG2细胞中miR-210表达水平的影响。方法采用CoCl2、物理缺氧以及Na2SO3 3种不同的缺氧条件诱导HepG2细胞,利用实时定量PCR技术检测不同缺氧模式诱导前后HepG2细胞miR-210等表达变化。结果 3种缺氧模式均可以诱导HepG2细胞miR-210表达上调,其表达与CoCl2及Na2SO3的浓度有剂量依赖关系。结论 CoCl2、物理缺氧以及Na2SO3 3种不同的缺氧条件均可以有效诱导HepG2细胞中miR-210的表达上调,3种模型均可用于缺氧诱导miRNA研究,同时进一步证明miR-210表达上调是由于细胞缺氧所致。     

中国人甲状腺乳头状癌中ret基因重排及类型的分析研究

目的 建立ret基因重排的分析方法，提示中国人甲状腺乳头状癌中是否存在原癌基因ret重排及重排类型。方法 应用RT—PCR方法对65例甲状腺乳头状癌石蜡切片标本进行ret基因重排检测，并对扩增结果进行测序鉴定。结果 在提取RNA成功的38例甲状腺乳头状癌(PK)标本中，有71％发生ret重排，其中10．5％表达RTC1；5．3％表达PTC3；5．3％表达PTC4，以PTC1发生的频率较高。仅1例表达PTC2与PTC3／PTC4混合型重排，中国人PTC可能与ret和H4及ELE1重排激活相关。结论 中国人PTC组织中存在4种重排，且以PTC1较为常见。单一标本中有多种重排形式并存，PTC1 3重排形式10例、3例PTC1 4、1例PTC2 3 4、1例PTC1 4、4例PTC1 3 4，单一标本中多种重排形式并存的比例高达50％，但与癌症的恶性程度、转移等无必然联系。     

类胰岛素生长因子与肝癌

肝癌是常见的恶性肿瘤之一,其病程快且预后很差.其发生是一个多因素多步骤协同的复杂过程.近来的研究报道,肝癌发生分子机制与类胰岛素生长因子体系信号通路异常相关,类胰岛素生长因子是一种多功能细胞增殖调控因子,他在胚胎发育、中枢神经系统发育及肿瘤细胞增殖等方面具有重要的生物学功能.类胰岛素生长因子的生物学活性受到包括类胰岛素...     

肝硬化患者血浆中AFP、PKM2和ALB mRNA的检测与分析

目的探讨乙肝肝硬化患者外周血血浆中甲胎蛋白（AFP）、丙酮酸激酶M2（PKM2）和白蛋白（ALB）mRNA的表达水平及其临床意义。方法采用实时定量PCR方法检测了38例健康人血浆及38例乙肝肝硬化患者血浆中AFP mRNA、PKM2 mRNA和ALB mRNA的表达水平,并分析其表达与临床检测指标间的相关性。结果 AFPmRNA、PKM2 mRNA及ALB mRNA的表达在肝硬化患者血浆和健康人血浆中存在明显差异,结果具有统计学意义（P〈0.01）。AFP mRNA和PKM2 mRNA的表达与临床检测指标没有显著相关性,ALB mRNA与γ-谷氨酰基转移酶及血清白蛋白具有相关性。与甲胎蛋白相比,检测的3种血浆mRNA在乙肝肝硬化患者中的高表达更明显。结论检测外周血血浆中AFP mRNA、PKM2 mRNA和ALB mRNA的表达对肝病的临床诊断及治疗具有指导意义。