吩噻嗪衍生物协同放射对HeLa细胞增殖的抑制效应比较研究

目的 探讨吩噻嗪衍生物对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用及与放射联合应用抑制肿瘤的协同效应。方法 采用MTT法和细胞克隆形成法检测细胞的增殖活性和细胞辐射敏感性。结果 比较了6种吩噻嗪衍生物对HeLa细胞增殖的抑制效应，发现化合物α-氯-N-二甲胺基乙基吩噻嗪（PTZD2）、α-三氟甲基-N-二甲胺基乙基吩噻嗪（PTZD3）和α-氯-N-二乙胺基乙基吩噻嗪（PTZD5）的作用比较明显，在10μmol／L浓度能产生出显著抑制效应，40-50μmol／L浓度作用3和4d，细胞增殖完全被抑制而死亡。PTZD2或PTZD3与放射联合应用，显示出明显抗HeLa细胞增殖的协同效应，10μmol／L PTZD3对2和4Gy照射细胞的增殖抑制的增强比分别为3．5和1．8。实验结果还表明，在照射前18h用药的协同作用更加显著。结论 吩噻嗪衍生物具有程度不同的抑制HeLa细胞增殖的作用，与放射联合应用具有抗肿瘤的协同效应，而且照射前18h用药的效应最佳。     

DNA-PKcs失活对c-Myc蛋白表达的影响

目的：通过DNA-PKcs表达抑制的细胞模型，研究DNA-PKcs与癌基因c-myc表达调控的关系。方法：利用siRNA技术或抑制剂建立DNA-PKcs表达抑制细胞模型，Western印迹检测DNA-PKcs和c-Myc蛋白表达变化，Northern印迹检测癌基因c-myc的mRNA表达，SEAP检测系统检测c-myc转录活性变化。结果：稳定表达DNA-PKcs siRNA的细胞DNA-PKcs蛋白和c-Myc蛋白表达明显降低，同时c-myc转录活性也被抑制，但c-myc在mRNA水平无明显变化。渥曼青霉素（wortmannin，0．2μmol／L）同样也可抑制c-Myc蛋白表达和转录活性，而对c-myc的mRNA表达无影响。结论：DNA-PKcs参与c-myc基因的表达调控，DNA-PKcs是一个潜在的肿瘤治疗靶分子。     

微丝相关蛋白hHBRK1突变体的构建、表达及纯化

目的：构建微丝相关蛋白hHBRK1截短体和突变体原核表达载体，并表达及纯化融合蛋白。方法：采用常规PCR并结合定点突变技术，对hHBrkl基因进行缺失和点突变；利用限制性内切酶将PCR产物克隆至原核表达载体pGEX-4T；IPTG诱导融合蛋白表达，通过谷胱甘肽一琼脂糖纯化技术分离纯化GST融合蛋白。结果与结论：构建了包括氨基端缺失截短体hHBRK1-AN、羧基端缺失截短体hHBRK1-AC和点突变蛋白hHBRKl-S^56G^57在内的原核表达质粒，分离获得较高纯度的重组hHBRKl突变体融合蛋白，Western杂交证实纯化蛋白为GST融合蛋白。本实验为进一步研究hHBRK1的相互作用蛋白及其可能的结合位点提供了基础。     

SBAR交班对提高危重患者护理质量的效果探讨

目的研究SBAR交班对于提高危重患者护理质量起到的效果。方法将我院之前对于危重患者采用常规的护理模式下护理安全事故的发生几率,患者对护理工作的满意度以及护理人员对患者病情的掌握情况进行总结和记录。从2018年1月开始应用SBAR交班模式,将SBAR交班模式下的安全事故发生几率、患者满意度以及护理人员的护理工作质量进行统计,并与常规护理模式下的数据进行对比。结果 SBAR交班护理模式下,患者出现安全意外事故的几率相对于常规护理模式下较低,患者对护理工作的满意度也有所提高。护理人员的个人护理能力和护理工作质量得到了提升。数据对比差异具有统计学意义(P0.05)。结论 SBAR交班模式能够提高护理质量和患者的满意度,降低安全意外问题的发生率,对护理人员个人工作能力也能起到提升作用。应在临床护理中广泛应用。     

2Gy和10Gyγ射线照射正常人淋巴母细胞基因表达转录谱的比较

目的 了解中等剂量和大剂量辐照对基因表达影响的差异性，以此探讨不同剂量γ射线生物学效应的分子基础。方法 正常人淋巴母细胞经2和10Gy^60Coγ射线照射后培养4h（未照射为对照组）。用包含有14022个基因的人类cDNA芯片分析基因转录谱，每个剂量点重复一次芯片检测，照射组与对照组细胞的差异表达基因表达量比值大于2或小于0．5，并且2次检测结果一致的基因点为有效差异表达基因。结果 2Gy照射后共有32个基因表达下凋，46个基因表达上调；10Gy照射后共有219个基因表达水平下降，26个基因表达水平上升，在两个剂量照射条件下都表达下调的基因至少有11个，同时上调的基因有9个，这些基因大多与细胞信号转导、细胞周期调控、DNA损伤修复、细胞凋亡等相关。结论 观察到中等剂量和大剂量辐照的相同诱导表达变化基因，10Gy剂量照射使大量的基因表达抑制，将导致细胞多方面的生理功能障碍。     

抑制CHD6表达对A549细胞辐射敏感性的影响

目的通过RNA干扰技术建立染色质重构蛋白CHD6基因表达抑制的细胞模型,研究CHD6对人肺腺癌细胞A549细胞增殖及辐射敏感性的影响.方法利用质粒介导的siRNA技术建立CHD6基因表达抑制细胞模型,RT-PCR检测CHD6 mRNA的表达,细胞生长曲线和流式细胞技术分别检测A549细胞增殖及细胞周期的变化,荧光染色法检测细胞凋亡,细胞克隆形成率检测A549细胞辐射敏感性.结果通过本研究,成功构建了siRNA抑制CHD6表达的细胞模型;通过siRNA抑制CHD6的表达,A549细胞增殖能力明显增强,细胞对2 Gy以内γ射线照射有明显辐射抗性;大剂量照射后的细胞凋亡率无明显改变.结论抑制CHD6基因表达将提高细胞增殖能力和细胞的辐射抗性.     

转录因子Sp1对肺癌细胞LKB1-VEGF通路调控作用研究

目的:通过构建LKB1基因获得性肺癌细胞模型,了解转录因子Sp1对LKB1-血管内皮生长因子(VEGF)通路的调控作用.方法:应用巢式PCR(nPCR)方法扩增LKB1基因编码区,构建LKB1真核表达载体;Western 印迹检测LKB1在A549细胞中的表达;siRNA技术干扰Sp1的表达;RT-PCR联合ELISA方法检测VEGF的变化;SEAP检测系统检测Sp1的转录活性.结果:成功构建LKB1基因稳定表达细胞模型;LKB1蛋白下调VEGF表达和Sp1转录活性;siRNA介导的Sp1沉默伴随VEGF表达下调.结论:转录因子Sp1参与LKB1基因对VEGF的表达调控.     

ERK1/2-Sp1信号通路对肺癌细胞VEGF的调控作用

背景与目的:了解ERK1/2-Sp1信号通路对肺癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)基因的调控作用.材料与方法:采用激酶特异抑制剂PD98059抑制ERK1/2的活性,Western blot检测ERK1/2的表达.RNA干扰技术沉默Sp1基因,Mercury信号通路系统检测Sp1的转录活性.RT-PCR检测VEGF和Sp1基因的变化. 结果:ERK1/2激酶的活性几乎可被150μmol/L PD98059完全抑制,ERK1/2激酶活性下调伴随VEGF的表达下降.PD98059下调Sp1转录因子的活性.Sp1基因沉默后VEGF的表达量下调. 结论:在肺癌细胞中存在ERK1/2-Sp1-VEGF信号通路,ERK1/2激酶调控VEGF的表达可能部分依赖于转录因子Sp1的活性.