骨髓间充质干细胞培养上清液抑制异体淋巴细胞增殖

骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）作为具有多向分化潜能的干细胞，具有广泛的临床应用前景。近年来的研究已经证实，MSCs具有免疫负调节作用，但其具体机制尚不清楚。我们试图通过研究MSCs培养上清液对异体淋巴细胞增殖的影响，观察MSCs的免疫调节作用，进一步探讨MSCs的免疫调控机制。     

脊髓压迫症状为初发表现的急性非淋巴细胞白血病二例

目的 提高对急性非淋巴细胞白血病(ANLL)脊髓压迫症状的认识.方法 报道2例并发脊髓压迫症状的ANLL的诊断、治疗经过及预后并进行相关文献复习.结果 2例患者发病年龄小,均为难治性白血病,在化疗过程中均死于并发症.结论 对于考虑白血病或明确诊断白血病同时伴有腰背痛、下肢感觉活动异常等症状者要注意脊髓压迫症,对于ANLL鞘内注射化疗药物应同样得到重视.     

慢性淋巴细胞白血病遗传学异常及临床疗效和预后分析

目的:探讨应用荧光原位杂交技术(FISH)检测慢性淋巴细胞白血病(CLL)常见染色体异常,并分析其与临床治疗、预后的相关性。方法:对26例初诊CLL患者进行免疫表型及常规细胞遗传学(CC)检测,同时以4种序列特异性探针p53、D13S25、ATM、RB1和1种着丝粒探针CSP12,采用FISH对20例正常对照骨髓建立各探针的检测阈值,然后对26例CLL患者进行检测,检测结果大于阈值为阳性,小于阈值为阴性。结果:所有患者均表达CD19(100%),CD5阳性率为84.6%(22/26),CD23阳性率为65.4%(17/26),CD22阳性率为61.5%(16/26)。CC检测18.5%有核型异常(3/26),FISH检测出20例至少有1种基因异常,依次为D13S25缺失40.0%(8/20),RB1缺失25.0%(5/20),CSP12三体占15.0%(3/20),CSP12单体占5.0%(1/20),p53缺失10.0%(2/20),ATM缺失5.0%(1/20)。18例患者接受了含氟达拉滨的化疗(RF/F/FCR/FC),15例(83.3%)获完全缓解(CR)和部分缓解(PR),4例口服苯丁酸氮芥,4例接受CHOP方案联合化疗,1例获CR,2例PR。结论:FISH技术适用于CLL患者的细胞遗传学分析,提高了CLL遗传学异常检出率,FISH检测结果可为临床治疗方案选择提供一定的理论依据。氟达拉滨治疗方案能明显提高CLL患者长期生存率。     

芍药苷对骨髓间充质干细胞增殖的影响

背景：研究显示芍药苷具有补血及治疗自身免疫性疾病的功效,骨髓间充质干细胞对机体的造血及免疫功能也起着重要的作用,但芍药苷对骨髓间充质干细胞的增殖及细胞因子的分泌和表达有何影响报道较少。目的：探讨芍药苷对人骨髓间充质干细胞增殖及白细胞介素6表达的影响。方法：采用密度梯度离心法和贴壁培养法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,用流式细胞术和成脂及成骨诱导法鉴定人骨髓间充质干细胞生物学特性, MTT法检测不同浓度芍药苷对人骨髓间充质干细胞增殖的影响, EL ISA 法测定芍药苷干预人骨髓间充质干细胞后培养上清液中白细胞介素6的分泌水平,RT-PCR 检测芍药苷干预后白细胞介素6 mRNA的表达情况。结果与结论：成功分离出骨髓间充质干细胞,具有成骨、成脂分化潜能。与对照组相比,芍药苷浓度为2μmol/L和10μmo l/L可明显促进骨髓间充质干细胞增殖。10μmol/L 芍药苷干预骨髓间充质干细胞后, G0/G1期细胞比例显著降低, S期细胞比例显著升高。10μmol/L 芍药苷干预组骨髓间充质干细胞白细胞介素6 的分泌和mRNA表达均显著高于对照组(P <0.01)。由此得出,一定浓度的芍药苷可促进骨髓间充质干细胞增殖,并提高骨髓间充质干细胞分泌白细胞介素6水平和基因表达。     

WT1（+）急性髓系白血病M2型合并中枢性尿崩症1例并文献复习

急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)是一类髓系造血干祖细胞的恶性克隆性疾病,以骨髓与外周血中原始和幼稚细胞异常增生为主要特征。尿崩症(diabetes insipidus,DI)是精氨酸加压素(AVP)又称抗利尿激素(ADH)分泌缺陷或肾脏对精氨酸加压素不敏感所导致的综合征,分为中枢性尿崩症(central diabetes insipidus,CDI)和肾性尿崩症(nephrogenic dia-betes insipidus,NDI)[1]。中枢性尿崩症是急性髓系白血病的一种罕见的并发症,目前全球仅有约100例已发布的病例报告[2]。近期我科收治1例WT1(+)急性髓系白血病M2型合并中枢性尿崩症患者,现报道如下。      

成人骨髓间充质干细胞对K562细胞生长的影响

目的：研究成人骨髓间充质干细胞（MSCs）对K562细胞生长的影响。方法：从成人骨髓中分离、培养MSCs，并通过其形态的均一性及流式细胞术检测其表面标志以鉴定其纯度，观察其电镜下的超微结构。将分离培养的MSCs置于24孔板中，72h待其贴壁后，以丝裂霉素处理，与K562细胞共培养，计数法测定细胞增殖，观察成人骨髓MSCs对K562细胞生长的影响。结果：和单独的K562细胞生长曲线相比，与骨髓MSCs共孵育的K562细胞生长缓慢，无明显的指数生长期。结论：成人骨髓MSCs抑制K562细胞的生长，提示其可能有潜在的抗肿瘤作用，但其作用机制如何有待于进一步探讨。     

脊髓压迫症状为初发表现的急性非淋巴细胞白血病二例

目的 提高对急性非淋巴细胞白血病(ANLL)脊髓压迫症状的认识.方法 报道2例并发脊髓压迫症状的ANLL的诊断、治疗经过及预后并进行相关文献复习.结果 2例患者发病年龄小,均为难治性白血病,在化疗过程中均死于并发症.结论 对于考虑白血病或明确诊断白血病同时伴有腰背痛、下肢感觉活动异常等症状者要注意脊髓压迫症,对于ANLL鞘内注射化疗药物应同样得到重视.     

应用逆转录病毒载体转染K562细胞株的实验研究

目的:探讨多种细胞因子联合刺激下,逆转录病毒载体对K562细胞的基因转移效率。方法:以PA317-GCGPXSN细胞制备病毒上清,NIH3T3细胞测定病毒滴度后,取经过SCF、IL-3、IL-6预培养刺激后的K562细胞,实施基因转移,流式细胞仪及PCR方法测定基因转移效率。结果:①病毒滴度为1.9×105CFU/m l;②对照组K562细胞测定的荧光强度数值为0.56%,实验组为77.16%,两者差异有统计学意义(P<0.01)。PCR方法扩增到了NeoR基因的特异性片断。结论:细胞因子预刺激后实施基因转移,可有效地将外源基因转移进入K562细胞基因组中。     

混合造血干细胞移植后输注供者淋巴细胞和白细胞介素2对急性髓性白血病疗效的影响

目的:观察急性髓性白血病经混合造血干细胞移植后,应用供者淋巴细胞输注 白细胞介素2治疗的效果,并与移植后未经特殊治疗的效果进行比较。方法:①选取2000-01/2004-07解放军兰州军区兰州总医院全军血液病中心收治的19例急性髓性白血病患者,实验经医院伦理委员会批准,患者均知情同意。随机数字表法分为两组:观察组8例,年龄17～40岁,M2a 4例,M4 1例,M5a 3例;对照组11例,年龄19～39岁,M2a 2例,M3a 2例,M4 3例,M5a 4例。②两组患者采用化疗联合重组人粒细胞集落刺激因子的方法动员自体外周血造血干细胞,采集后液氮中保存5d备用。③术前采用直线加速器对患者全身及肺部照射,预处理完毕后实施混合造血干细胞移植。首先回输自体单个核细胞中位数为4×108/kg,CD34 细胞中位数为6.2×106/kg,粒-巨噬祖细胞集落形成单位中位数为5.8×104/kg。间隔1～6h后,采集人类白细胞抗原半相合异体骨髓,按回输自体单个核细胞数的1/6～1/10输注给患者。④两组患者移植期间均住无菌层流病房,给予相应并发症的防治及支持治疗。在粒细胞降至0时注射重组人粒细胞集落刺激因子150μg/12h,促进造血恢复。观察组给予供者淋巴细胞输注 白细胞介素2治疗,每次采集的供者淋巴细胞中,CD3 淋巴细胞中位数为1.43×108/kg,CD4 细胞中位数为0.97×108/kg,CD8 细胞中位数为0.41×108/kg,中位治疗次数4(1～7)次,回输后即开始应用100wu/d重组人白细胞介素2,共10d。对照组混合造血干细胞移植后未给予特殊治疗。结果:19例急性髓性白血病患者均进入结果分析。①造血恢复:两组患者均获得造血重建,术后4～9d粒细胞均降至0,12～17d粒细胞达0.5×109L-1,16～21d白细胞达4.0×108 L-1,19～23 d血小板达20×108 L-1。16～21 d骨髓检查示恢复期骨髓象。②术后并发症:两组患者不同程度地出现口腔溃疡,随着造血恢复,7～10d溃疡消失。观察组1例患者出现出血性膀胱炎,两组各2例患者出现发热。无肝静脉闭塞病和移植物抗宿主病发生。③嵌合体形成:观察组中1例M4患者形成嵌合体,对照组中2例M4患者与1例M5患者形成嵌合体,嵌合体持续存在3～12个月。④供者淋巴细胞输注 白细胞介素2疗效:观察组中有1例M2a患者在接受2次特殊治疗后7个月复发死亡;1例M2a患者接受2次特殊治疗后1年出现骨髓增生异常综合征,脑出血死亡,1例M5a患者应用特殊治疗1次后出现不明原因高热、抽搐,死于癫痫持续状态,其余5例患者随访2年均健康存活,长期生存率为62.5%(5/8)。对照组有2例M2a患者、2例M4患者、1例M5患者于移植后1～7个月复发死亡,1例M3患者于移植后25d死于脑出血,其余2例M3患者、2例M4患者、1例M5患者随访2年均健康存活,长期生存率为45.4%(5/11)。结论:混合造血干细胞移植后应用供者淋巴细胞输注 白细胞介素2治疗,急性髓性白血病患者均获得造血重建且无移植物抗宿主病发生,其长期生存率有效提高。     

细胞因子对逆转录病毒载体介导的小鼠骨髓造血干细胞基因转移效率的影响

本实验探讨细胞因子SCF,IL-3和IL-6对基因转移效率的影响,为临床基因治疗提供可靠依据。以小鼠造血干细胞为靶细胞,应用包装细胞株PA317-GCGPXSN制备病毒上清,实施基因转移,采用FACS,GM-CFU,PCR和Southern blot方法测定基因转移效率。实验结果为:SCF,IL-3,IL-6单用或联合应用后,FACS测定的基因转移效率为0.07％-0.20％,GM-CFU测定的结果为20.4％-46.40％,阳性对照组测定的结果则分别为0.06％和10.92％。结论提示SCF/IL-3,SCF/IL-3/IL-6联合应用能显著提高基因转移效率。