正常人外周血淋巴细胞 IL—2受体免疫放射测定

采用~(125)I 标记小鼠抗人IL—2受体(P55)的抗Tac(CD_(25))单克隆抗体,成功地建立了人IL—2受体的免疫放射分析法,动态观察了人外周血淋巴细胞经PHA 刺激24、48和72h 后IL—2受体表达的时间曲线,通过Scatchard 作图分析表明~(125)I—抗Tac 单克隆抗体与PHA 活化的上述三个时间点的T 淋巴细胞的最大结合容量(B_(max))分别为43000位点/细胞、54000位点/细胞和61000位点/细胞。本研究为临床IL—2受体检测提供一种简便的免疫放射测定法。     

积雪草总苷对环磷酰胺致小鼠免疫功能低下的影响

目的 探讨积雪草总苷（TCA）对环磷酰胺（CTX）致小鼠免疫功能低下的影响。方法采用一次性腹腔注射CTX 100mg／kg制造小鼠免疫损伤模型，同时应用TCA24、12、6mg／kg 3个剂量灌胃10d进行预防性治疗，观察其对小鼠胸腺指数、脾脏指数、巨噬细胞吞噬百分率、血清溶血素水平等指标的影响。结果 TCA高剂量（24mg／kg）、中（12mg／kg）剂量对小鼠胸腺指数、吞噬百分率和血清溶血素水平有明显的增强作用，同时TCA高剂量对小鼠脾脏指数也有一定的保护作用。结论TCA对CTX致小鼠免疫功能低下有一定的预防作用。     

协同刺激分子CD28在结核杆菌抗原体外激活人外周血γδT细胞中的作用

目的 :为了探讨CD2 8协同刺激分子在结核杆菌 (Mtb)低分子多肽抗原体外激活人外周血γδ T细胞中的作用。方法 :采用激发型抗CD2 8单抗模拟第二信号 ,Mtb低分子多肽抗原作为刺激原 ,对纯化的人外周血T细胞进行体外刺激和培养 ;用流式细胞仪检测γδ T细胞上CD2 8分子的表达、γδ T细胞的增殖效应及活化的γδ T细胞上CD6 9分子的表达。结果 :人外周血γδ T细胞中有 5 0 %左右表达CD2 8分子 ;抗CD2 8单抗协同Mtb抗原可刺激γδ T细胞的活化和增殖 ;但抗CD2 8单抗或Mtb抗原单独刺激则无作用。活化的γδ T细胞表面表达CD6 9分子。结论 :Mtb抗原在选择性活化人外周血γδ T细胞时需要第二信号的参与 ;CD2 8在Mtb抗原激活γδ T细胞时可提供协同刺激信号 ;CD6 9可作为γδ T细胞的早期活化标志。     

PD-L与不同受体结合介导不同的生物学效应

PD L1和PD L2作为新发现的B7超家族成员 ,它们的受体之一是CD2 8超家族成员PD 1,最近研究证实它们还存在第二受体。本文将就其与不同受体结合所起的生物学作用及其与B7家族其他成员之间的关系作一综述。     

人源化抗体构建过程中假链的产生及应对策略

目的在人源化抗体构建过程中，采用方便、快捷的分子克隆手段。消除SP2／0内源性畸形轻链转录本以获得正确的轻链cDNA。方法在mRNA抽提时，不用常规的TRIZOL法抽提总RNA，而采用经腹腔培养。生长状态良好的杂交瘤细胞。用QIAGEN公司Oligotex Direct mRNA Purification Kit，将polyA^＋的mRNA富集。可有效减少畸变转录本的含量，提高功能型mRNA的丰度。利用polyA^＋RNA。采用RT-PCR，我们成功地克隆到了轻链可变区序列，序列分析证实读码框完全正确，属于轻链可变区基因。结果NCBI数据库BLAST显示。克隆的基因序列符合小鼠lg可变区特征，具有正确的CDR和FR功能区及VJ连接区。结论采用polyA^＋ mRNA富集技术，成功克隆获得阻断型抗人CD154 mAb（4F1）单克隆抗体的轻链、重链可变区基因，成功地消除了SP2／0内源性畸形转录本对免疫球蛋白功能性轻链基因的影响。     

抗人CD40人-鼠嵌合抗体在CHO细胞中的表达及其功能研究

目的:实现抗人CD40的人-鼠嵌合抗体(ch-5C11)在的CHO细胞中的稳定表达并对其生物学活性进行初步的研究。方法:pIRES/hu5C11嵌合抗体重组表达质粒用脂质体法转染CHO细胞,采用RT-PCR对CHO细胞进行基因水平鉴定,以流式细胞术(FCM)和Western blot对表达上清中ch-5C11人免疫球蛋白Fc段和κ链成分进行检测,利用Protein G亲和层析和Lowry法进行纯化和定量,MTT实验检测表达ch-5C11对Daudi细胞增殖的抑制效应。结果:获得稳定分泌目的蛋白的CHO稳定株,RT-PCR结果表明目的基因成功整合在CHO稳定株中,FCM和Western blot结果表明稳定株上清中含有抗人CD40抗体,且含人免疫球蛋白Fc段和κ链;Lowry法定量ch-5C11浓度为0.535mg/L,并经SDS-PAGE蛋白电泳鉴定纯度良好;ch-5C11能抑制Daudi细胞增殖。结论:获得了持续分泌ch-5C11的CHO稳定株,功能学研究显示ch-5C11能抑制B细胞淋巴瘤细胞株体外增殖。     

IL-10对单核来源的DC体外分化发育及功能的抑制效应

目的：研究IL-10对单核细胞来源的DC体外发育分化和功能的影响及TNF-a和sCD40L对IL-10抑制DC生物学功能的阻断或逆转效应。方法：检测经IL-10抑制及添加上述干预因素后DC的表型、刺激T细胞增殖和分泌IL-12的能力。结果：IL-10能够抑制幼稚DC的成熟，促进其向巨噬细胞分化，并伴随有DC激发T细胞增殖和分泌IL-12能力明显下降，这种抑制效应与IL-10浓度存在相关性；IL-10对由sCD40L诱导成熟的DC无抑制作用，但能抑制TNF-a诱导成熟DC分泌IL-12的能力；在IL-10作用后加入TNF-a或sCD40L均不能逆转IL-10对DC抑制作用；在IL-10作用的同时加入sCD40L而不是TNF-a能完全阻断IL-10抑制DC刺激T细胞增殖和分泌IL-12的作用。结论：IL-10是肿瘤细胞逃脱免疫攻击的重要因子，能够抑制DC的成熟、抗原提呈以及削弱其刺激T细胞增殖的能力等多重负性作用，其对由TNF-a或sCD40L途径诱导成熟的DC的抑制作用不一致，CD40信号干预对制备肿瘤免疫治疗运用的DC具有重要的价值。     

BAFF分子在部分肾移植受者外周血淋巴细胞异常高表达及其可能的生物学意义

目的：分析BAFF分子在肾移植受者外周血淋巴细胞的表达情况以及初步分析其异常表达的生物学意义。方法：以来院随访的肾移植受者为研究对象,采集患者外周血,以EDTA-Na2抗凝。采用单色和多色标记的免疫荧光分析法,分析BAFF分子在外周血淋巴细胞的表达情况,同时检测淋巴细胞CD3、CD4、CD8、CD134、CD25和CD127的表达。结果：共分析了86位肾移植受者。BAFF分子在受者外周血淋巴细胞的表达率分别介于0.18%至76.97%之间。以15%为界将所有数据分成两组（表达率〉15%组和表达率〈15%组）,对所获得的数据进行统计分析。在BAFF分子表达率〉15%组其BAFF分子表达的平均值为36.91%;BAFF^＋细胞群的增加与外周血CD4^＋/CD8^＋比值、与循环中CD4^＋CD25^＋CD127^-/low T细胞群等没有显著相关性;但是与循环中CD134^＋ T细胞群和CD4^＋CD134^＋ T细胞群的增加存在显著相关性（P〈0.01和P〈0.05）,具有统计学意义。而BAFF表达率〈15%组所检测的相关指标均没有统计学意义。结论：BAFF分子在部分肾移植受者外周血淋巴细胞的异常高表达可能与移植排斥反应相关。     

B7-H3单抗交联作用对Mo-DC体外生物学功能的影响

探讨B7-H3分子对人外周血单核细胞来源树突状细胞(Mo-DC)体外成熟和生物学功能的影响。采用常规方法从健康人外周血单核细胞诱导DC,在诱导过程中,加入B7-H3单抗21D4共培养,经流式细胞术检测Mo-DC上B7-H3分子和其他共刺激分子的表达,ELISA试剂盒检测培养上清中细胞因子IL-10和IFN-γ的分泌量,并采用3H-TdR掺入法测定T细胞的增殖。结果:B7-H3分子在未成熟和成熟Mo-DC上均有高水平表达,抗人B7-H3单抗21D4能上调Mo-DC表面CD80、CD86和CD83的表达,提高Mo-DC的共刺激能力,促进T细胞的体外增殖,并能显著促进T细胞分泌IL-10。由此表明,B7-H3单抗21D4交联作用可以促进Mo-DC体外成熟,上调其共刺激T细胞的能力。