参照多重PCR片段分析法进行实时荧光PCR法对ABCB1三等位基因测定结果读取方法的确定

目的 为解决实时荧光PCR法对三等位基因测定结果无法正常读取的问题,通过参照多重PCR片段分析法,确定实时荧光PCR法读取方法,实现临床对ABCB1三等位基因准确、简便且价格低廉的检测.方法 收集西安市精神卫生中心2020年3月-2021年3月DNA样本2794例,抽取5％作为实验样本,分别进行实时荧光PCR法和多重P...     

采用HPLC-MS-AIS法测定钩藤中四种生物碱含量

目的 采用高效液相-质谱联用-自体内标法（HPLC-MS-AIS）测定钩藤中四种主要的吲哚类生物碱（钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱）含量。方法 采用C₁₈色谱柱（3.0 mm×50 mm，3.3 μm）；0.1%甲酸水溶液∶乙腈=82∶18为流动相；流速0.5 mL/min；柱温30℃。质谱条件：电喷雾离子源；正离子多反应监测模式；毛细管电压为4 000 v；选择质子数/电荷数（m/z）：385.25/160.10（钩藤碱）、385.30/160.10（异钩藤碱）、383.25/160.15（去氢钩藤碱）、383.25/160.15（异去氢钩藤碱）作为检测离子对；进样量2 μL。结果 钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱线性范围分别为2.30~600.00 ng/mL（r=0.999 3）、2.30~600.00 ng/mL（r=0.999 2）、2.47~650.00 ng/mL（r=0.999 4）、2.47~650.00 ng/mL（r=0.999 2），精密度和稳定性的相对标准偏差（RSD）均<5.00%，准确度为92.40%~104.10%，加样回收率为95.90%~104.60%。结论 采用HPLC-MS-AIS法测定钩藤中四种生物碱含量简便准确，可作为钩藤药材质量控制的新方法。     

建立2D-HPLC同时检测钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的方法

目的 建立二维高效液相色谱法（2D-HPLC）同时检测钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱四种钩藤生物碱含量的方法。方法 采用Aston SC2（3.5 mm×25 mm，5 μm）一维色谱柱，Aston SH C₁₈（3.5 mm×10 mm，5 μm）中间色谱柱，Aston SCB（4.6 mm×125 mm，5 μm）分析色谱柱，一维流动相为CAA-1，分析流动相为BPI-1∶MPI-1∶OPI=45∶14∶41，流速1.0 mL/min，柱温40℃，检测波长254 nm，进样量500 μL，分析时间9.5 min。结果 钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱线性范围分别为9.77~10 000.00 ng/mL（r=0.999 6）、10.74~11 000.00 ng/mL（r=0.999 7）、10.74~11 000.00 ng/mL（r=0.999 7）、10.74~11 000.00 ng/mL（r=0.999 6），精密度、稳定性和重复性相对标准偏差（RSD）<5.00%，准确度为95.20%~104.01%，方法回收率为93.63%~101.38%。结论 建立的2D-HPLC同时检测钩藤中四种生物碱含量的方法简单准确，可作为钩藤药材质量控制的新方法。