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目的: 构建重组载体pcDNA-λ并在COS7细胞分泌表达鸡Igλ轻链, 制备抗鸡Igλ轻链的单克隆抗体(mAb).方法: PCR扩增带有信号肽的鸡Igλ轻链基因, 限制性酶切消化后, 定向克隆于真核表达载体pcDNA3, 构建具有6×His标签、分泌表达的重组载体pcDNA-λ.重组载体转染COS7细胞后, SDS-PAGE分析真核表达载体pcDNA-λ在COS7细胞的分泌表达.用2×106个雏鸡B淋巴细胞免疫BALB/c小鼠, 取脾细胞与骨髓瘤细胞融合, 分别采用细胞免疫荧光和间接ELISA筛选阳性杂交瘤克隆.结果: 成功构建分泌表达鸡Igλ轻链的重组载体, SDS-PAGE分析表明在COS7细胞上清有目的蛋白的分泌表达.杂交瘤细胞经筛选与鉴定, 获得2株分泌抗鸡Igλ轻链mAb的杂交瘤细胞株, Western blot检测到该mAb对重组鸡Igλ轻链的反应性.结论: 构建了重组表达载体pcDNA-λ并在COS7细胞上清分泌表达了重组鸡Igλ轻链.并用淋巴细胞杂交瘤技术成功筛选出抗鸡Igλ轻链mAb.为深入研究鸡Igλ轻链的结构与功能奠定了基础. 相似文献
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马杜霉素又名马度米星、马度米星铵,是一种聚醚类离子载体抗生素.早在1983年由liu和labeda在微生物Actinomadura yumaensis的发酵产物中分离而得[1].由于马杜霉素具有抗球虫谱广、活性高、用药量小和球虫不易产生耐药性等优点,被广泛添加在动物饲料中[2].但在动物肌肉组织中残留,人食用含有马杜霉素的动物肌肉组织可引起血管舒张,特别是诱发心脏冠状动脉扩张和血流量增加,可引起冠状动脉疾病的病人冠状动脉扩张,病情恶化,造成较大健康危害[3-4].因此,建立准确、快速、有效地检测食品中马杜霉素的方法对于人类健康有一定意义.本文就马杜霉素的危害及其人工抗原制备的研究动态综述如下. 相似文献
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目的了解郑州市4种即食生鲜果蔬的安全状况,为农业部农产品质量安全风险评估提供科学依据。方法在5个大型超市和5个农贸市场随机抽取生鲜果蔬样品,按中华人民共和国《食品安全国家标准食品微生物学检验》规定的程序和方法检测了样品微生物的类群和数量,同时也对多种典型的致病菌进行了分离鉴定。结果检测样品240份,检出致病菌4株,总检出率1.67%。其中生菜样本中金黄色葡萄球菌1例,阳性率为1.67%;桃样本中沙门氏菌1例,金黄色葡萄球菌2例,阳性率为5.00%。结论郑州市即食生鲜果蔬中存在潜在的食源性致病菌污染风险。 相似文献
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抗克伦特罗单克隆抗体杂交瘤的建立及其分泌单抗的免疫学特性鉴定 总被引:9,自引:0,他引:9
目的 :建立抗克伦特罗 (CL)单克隆抗体杂交瘤细胞系 ,制备CL单克隆抗体 ,并鉴定其免疫学特性。方法 :用重氮化法将半抗原CL偶联于载体蛋白BSA ,形成结合抗原BSA CL ;以BSA CL免疫BALB/C小鼠 ,应用杂交瘤技术建立分泌CL单克隆抗体细胞株 ;用体内诱生腹水法生产CL单抗 ,硫酸钠盐析法提纯。应用抗小鼠同种型抗体测定单抗的同种型 ,用竞争性ELISA和胶体金膜层析试验测定CL单抗的反应特异性和反应动力学。结果 :筛选出C 4G1、C 2H6、C 2D6和C 4C94株高敏感性和高特异性杂交瘤生产单抗 ,其单抗的间接ELISA效价分别为 5× 10 -5、3× 10 -4、6× 10 -4、2× 10 -5;同种型分别为IgG1/κ、IgG1/κ、IgG2a/κ、IgG2a/λ。C 4G1的亲和力常数K =1 6 8× 10 8L/mol,C 2H6的亲和力常数K =1 3× 10 8L/mol。经WestGold蛋白质印迹鉴定单抗与CL特异性结合。C 4G1单抗对CL的半数抑制浓度 (IC50 )为 7 94ng/ml,对沙丁胺醇 (Sb)的IC50 为 10 0 0ng/ml,对肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素和来克多巴胺的IC50 均≥ 6 4 0 0ng/ml;C 4G1单抗与Sb的交叉反应性为0 79% ,与异丙肾上腺素的交叉反应性为 0 12 % ,而与肾上腺素、去甲肾上腺素、来克多巴胺、各类抗生素及多种维生素均无交叉反应性。结论 :用单克隆抗体杂交瘤技术 相似文献
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在大肠杆菌中高效表达人I型免疫缺陷病毒p24蛋白 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 表达人I型免疫缺陷病毒(HIV-1)衣壳蛋白p24,为制备抗p24单克隆抗体及其诊断抗原奠定基础。方法 将编码HIV-1p24蛋白的p24^gag基因片段,克隆到原核表达载体pET-17b的T7噬菌体启动子下游,构建重组表达质粒,转化大肠肝菌BL2(DE3),IPTG诱导表达,表达产物以SDS-PAGE,Westernblotting及点免疫印迹分析,结果 构建成功重组表达质粒pET24经I 相似文献
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目的:构建牛Fcγ2R胞外区基因的原核表达载体,并在E.coli BL21(DE3)中表达。方法:提取健康成年牛的白细胞总RNA,经RT-PCR扩增牛Fcγ2R胞外区基因片段,并将其克隆到载体pGEM-TEasy,经限制性内切酶EcoR I和Not I双酶切鉴定及序列测定后,再将其亚克隆入原核表达载体pET28a中,构建重组质粒pET-2R,转化E.coli BL21(DE3)经LPTG诱导表达组氨酸融合蛋白。结果:获得682bp的编码牛Fcγ2R胞外区基因片段。以构建的重组质粒pET-2R转化E.coli BL21(DE3)后,经IPTG诱导,表达出相对分子质量(Mr)约为30000的重组蛋白。SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于E.coli BL21(DE3)的胞质中,Western blot检测表明该蛋白能和牛IgG2结合。结论:成功地构建了原核表达载体pET-2R,并表达出重组蛋白。为研究牛IgG和受体的相互作用机制及其介导的免疫反应打下了基础。 相似文献
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目的本研究合成并鉴定了AFB1人工抗原,制备AFB1的单克隆抗体(AFB1mAb)。方法采用NHS法将AFB1分别偶联于载体蛋白BSA和OVA上,分别合成W人工抗原AFB1-BSA和AFB1-OVA,紫外分光光度法和SDS-PAGE进行鉴定;AFB1-BSA免疫BALB/C小鼠,通过间接ELISA和阻断ELISA法选择细胞融合备用鼠;用杂交瘤技术制备AFB1mAb,并对其效价、亲和力、敏感性、特异性、亚型进行鉴定;体内诱生腹水法大量制备单抗。结果 UV图谱和SDS-PAGE图表明结半抗原AFB1和载体BSA及OVA偶联成功;筛选出2H5-F6、2H5-C9、2H9-C3三株杂交瘤细胞;鉴定单抗亚型均为IgG1;细胞上清效价1:2.0×102~1:1.28×103,2H5-F6的腹水效价1:1.28×106,AFB1mAb亲和常数Ka为2.65×1010 L/moL,对AFB1的IC50为2.58 ng/mL;与AFB2的交叉反应率为1.61%,与其他类药物无交叉反应。结论通过试验获得高效价、敏感、特异的AFB1mAb,可用于各种食品中AFB1残留的快速免疫学检测试验。 相似文献