人FcγRⅡ真核表达质粒的构建及稳定转染细胞系的建立

目的:建立稳定表达人FcγRⅡ(human Fc gamma receptor Ⅱ ,huFcγRⅡ)的真核细胞系,为后续研究奠定基础.方法:采用RT-PCR方法从人外周血白细胞合成FcγRⅡcDNA,构建huFcγRⅡ表达质粒pcDNA3-huFcγRⅡ,经酶切和PCR鉴定后,将pcDNA3-huFcγRⅡ质粒通过脂质体转染法转染COS7细胞,并经G418筛选获得稳定表达huFcγRⅡ的细胞克隆.采用免疫荧光法和玫瑰花环试验检测huFcγRⅡ的表达.结果:构建的pcDNA3-huFcγRⅡ真核表达质粒经酶切鉴定与预期一致,稳定转入COS7细胞后,经免疫荧光染色,约90%的转染细胞可见荧光,而未转染的COS7对照细胞未见荧光.结论:成功构建pcDNA3-huFcγRⅡ真核表达质粒,建立了稳定表达huFcγRⅡ的细胞系,为进一步研究奠定了基础.     

缺失免疫抑制位点的人早孕因子重组蛋白的免疫原性

目的:构建缺失免疫抑制位点的人早孕因子基因的原核表达载体pGEX6P-EPF11,诱导GST-EPF11融合蛋白在大肠杆菌中表达,并免疫小鼠,测定效价。方法:以pMD18T-HSPE1模板,PCR扩增缺失免疫抑制位点的人早孕因子基因片段,经限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切后,连接到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达质粒pGEX6P-EPF11。将表达质粒转化大肠杆菌BL21,以1 mmol/L IPTG进行诱导表达GST-EPF11融合蛋白,Western blot鉴定。以表达的GST-EPF11融合蛋白作为免疫原免疫小鼠,抗体效价用ELISA检测。结果:在大肠杆菌中成功表达出相对分子质量约35 000的融合蛋白GST-EPF11。ELISA法检测免疫小鼠的抗体血清可达1∶12 800。结论:在大肠杆菌中成功表达出GST-EPF11融合蛋白,并免疫了小鼠,测定了抗体效价,为下步制备缺失免疫抑制位点的人早孕因子的单克隆抗体(mAb)奠定了基础。     

食品中黄曲霉毒素高灵敏检测方法研究进展

黄曲霉毒素(Aspergillus flavus toxin,AFT)主要是由黄曲霉(Aspergillus flavus)和寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)产生的次生代谢产物,目前已分离鉴定出12种,分别是黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、Q1、H1、GM、B2a和毒醇,黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2是粮油制品中黄曲霉毒素存在的主要形式[1].1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织的癌症研究机构(International Agency for Research on Cancer,IARC)划定为Ⅰ类致癌物,主要作用于肝脏,在天然污染的食品中以黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)最为多见,其毒性和致癌性也最强[2].     

在大肠杆菌中高效表达人Ⅰ型免疫缺陷病毒p24蛋白

In order to study the capsid protein (p24) of human immunodeficiency virus type 1(HIV-1),a plasmid vector pET24,containing the p24^gaq gene fragment encoding the p24 protein under the control of the bacteriophage T7 promoter ,was constructed.The pET24 plasmid-highly expressed a 30kDa protein of s10-p24 spanning 284 amino acid residues.The total amount of the fusion protein was approximately 38.4% of the total celluar protein in Escherchia coli BL21(DE3).Westein blotting and,immunodot blotting indicated that the recombinain protein could be relognized by anti-p24 monoclonal antibody and HIV-1 positive sera respectively.It is significance for preparing specific antibody,and diagnostic usage.     

白粉病发生程度对金银花药材中绿原酸含量的影响

中药材金银花为忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb·、红腺忍冬L·hypoglaucaMiq·、山银花L·confuseDC·和毛花柱忍冬L·dasystylaRehd·的干燥花蕾或带初开的花。《中国药典》2000年版一部以绿原酸作为金银花药材的质量控制指标。而金银花药材中绿原酸的含量受遗传背景、病虫害侵染、生长环境、生长发育阶段以及栽培技术等多种因素的影响[1]。白粉病是金银花药材栽培过程中经常发生的病害,作者通过研究不同农药防治金银花....     

小鼠B16黑色素瘤细胞酪氨酸酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达

目的:克隆酪氨酸酶基因(TYR), 并在毕赤酵母中表达和纯化其融合蛋白, 体外测定纯化的TYR活性.方法:利用RT-PCR技术, 从小鼠B16黑色素瘤细胞中克隆全长TYR, 克隆至pMD18-T载体, 进行双链核苷酸序列测定.构建TYR毕赤酵母表达质粒pPICZaA- TYR并导入毕赤酵母Pichia pastoris GS115, 表达的重组蛋白用SDS-PAGE和Western blot进行分析, 采用Co2 离子亲和层析柱纯化TYR并采用TYR多巴速率氧化法体外测定纯化的TYR活性.结果:克隆了TYR基因.构建了重组表达质粒pPICZaA-TYR.SDS-PAGE和Western blot分析显示, 在相对分子质量(Mr)为约53 000处出现1条特异性蛋白带, 且能与兔抗TYR抗体发生反应.结论:克隆TYR基因片段与基因库所登录的序列相一致, 并在毕赤酵母中获得表达和纯化并在体外测定了纯化的TYR活性.     

不同居群红花遗传多样性和遗传结构分析

目的：研究不同居群红花的遗传多样性和遗传结构,为红花优异品系筛选、资源分级和利用提供科学依据。方法：以4个居群的84份红花种质为试验材料,选用19条多态性好、条带清晰、稳定性高的SCoT标记对其进行扩增;采用NTSYS-pc 2.1、GenALEx 6.502和Popegen 1.32等软件对其进行聚类分析、遗传多样性和群体结构分析。结果：4个居群的多态位点百分率、香农信息指数、基因多样性指数变化范围分别为27.14%～71.43%、0.168～0.293和0.114～0.191,以国外居群最高;91%的变异发生在居群内,9%的变异发生在居群间;居群基因分化系数为0.1547,基因流为2.7316。结论：4个居群间基因交流较为频繁,遗传变异主要来源于居群内,国外居群与新疆居群遗传关系相对较近。该结果为红花的优良品种选育及资源持续利用的后续研究奠定了坚实基础。     

有益微生物驱动的铁棍山药有机防控体系初探

目的 利用微生物多菌合剂“宁盾”防治南方根结线虫引起的铁棍山药根结线虫病，开展微生物菌剂与多种铁棍山药全程有机种植过程中所用生物农药的相容性试验，初步建立铁棍山药有益微生物驱动的有机防控体系（以下简称BeMMO体系）。方法 于2019年在河南温县开展了1 hm²铁棍山药BeMMO体系示范试验，通过灌根、叶部喷施将“宁盾”应用于根结线虫发病田块，以当地有机种植体系为对照，统计BeMMO体系防病和促生效果。结果 BeMMO体系中根结线虫病发病率和病害严重度均显著低于当地有机体系，对根结线虫病的防效为80.1%；单位产量提高26.0%，每公顷收入增加171 450元。比较铁棍山药根茎的营养成分和药理活性成分含量，BeMMO体系山药折干率及还原糖、淀粉、总多糖、可溶性浸出物含量分别提高9.07%、10.00%、16.76%、11.69%、17.87%。BeMMO体系采收后的土壤有机质含量相较于种植前提高14.1%；而当地有机体系则降低7.2%。BeMMO体系种植后的土壤铵态氮、速效磷、有效钾含量与种植前相比，平均分别提高18.6%、14.8%、6.7%，土壤电导率（EC）降低6.5%，而当地有机体系土壤铵态氮、EC分别提高了14.0%、10.5%，速效磷、有效钾含量降低2.0%、4.8%。结论 BeMMO体系明显降低了根结线虫病害严重度，有效改良了土壤化学性质，提高了铁棍山药营养成分和活性成分含量，长期在有机铁棍山药上使用可产生更好的经济效益和生态效益。     

春雷霉素10%可湿性粉剂在水稻上的消解动态及残留研究

目的检测春雷毒素在水、植株和土壤中的消解动态,以及在稻穗、植株和土壤中的最终残留量。方法在河南、黑龙江和江苏三省的水稻中开展田间试验,利用液相色谱分离,质谱检测器检测,外标法定量检测春雷霉素残留量。结果残留消解动态试验显示水和植株中春雷霉素的残留量随时间逐渐降低,土壤中未检出。最终残留量试验发现糙米中春雷霉素的残留量均低于0.10 mg/kg,稻壳中均低于0.20 mg/kg,植株中均低于0.30 mg/kg,土壤中均未检出。结论春雷霉素不易在水、稻穗、植株和土壤中残留,对环境和人体安全。     

IgG Fc受体及其与系统性红斑狼疮发病机制的研究进展

IgG Fc受体(FcγRs)是一类重要的膜表面糖蛋白,是免疫反应的重要调节者,表达于几乎所有的免疫细胞.本文对FcγRs的免疫调节作用及其与系统性红斑狼疮(SLE)等自身免疫性疾病的关系进行综述.