HBeAg真核表达载体的构建及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

目的 克隆HBeAg基因,构建重组HBeAg真核表达载体,并在中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)中进行表达.方法 采用PCR法从HBeAg阳性乙型肝炎患者血清HBV DNA中扩增HBeAg基因,克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中,构建重组pcDNA-HBeAg真核表达载体,经PCR、双酶切、测序鉴定后,将其转染入CHO细胞,G418筛选,用PCR、免疫斑点、Western Blot、免疫细胞化学方法检测HBeAg在CHO细胞中的表达.结果 成功克隆到HBeAg基因,并构建了重组pcDNA-HBeAg真核表达载体;基因测序证实克隆的HBeAg基因中共有12个位点发生单碱基置换突变(C1819G,A2007T,C2046T,C2061G,G2106A,C2109A,C2146T,T2172C,C2203T,A2235G,G2253A,C2298T),1个位点发生缺失突变(2346 del T);成熟HBeAg蛋白中149位缬氨酸(valine,V)突变为苯丙氨酸(phenylalanine,F)(V149F),在HBeAg蛋白羧基端融合有一段长11个氨基酸的多肽(RLESRGPVZTR).PCR、免疫斑点、Western Blot和免疫细胞化学方法证实重组pcDNA-HBeAg真核表达载体可在CHO细胞中表达分泌型HBeAg蛋白.结论 重组HBeAg真核表达载体的构建和表达为HBeAg的临床诊断和深入研究提供了条件.     

肾综合征出血热患者血浆MCP-1水平及其临床意义

目的　分析肾综合征出血热（hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS）患者不同病期及不同临床型血浆单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemotactic protein-1, MCP-1）浓度变化与疾病相关性,为HFRS临床诊治提供参考依据。方法　以2012年10月—2014年1月期间在空军军医大学唐都医院住院就诊的81例HFRS患者及15例健康志愿者（正常对照组）作为研究对象,用酶联免疫吸附法分别检测其血浆中MCP-1水平,同步检测血常规、肾功能等指标,并分析MCP-1与临床常规检测指标的相关性。结果　在急性期,所有患者血浆MCP-1水平均明显升高,其中重型/危重型患者血浆MCP-1水平升高比轻型/中型更为显著;中型、重型、危重型患者血浆MCP-1水平急性期均高于恢复期及正常对照组（P均＜0.05）,恢复期与正常对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。Spearman相关分析显示血浆MCP-1水平与白细胞、尿素氮、肌酐水平呈正相关,与血小板水平呈负相关。结论　HFRS患者血浆MCP-1水平与疾病严重程度及疾病进程密切相关。     

肾综合征出血热患者血浆白细胞介素-18水平动态变化研究

目的检测肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)患者不同病期及不同临床型外周血中白细胞介素(interleukin,IL)-18浓度的变化,分析其与疾病的相关性,为研究HFRS的发病机制提供依据。方法收集唐都医院2011年10月—2014年1月81例不同临床型HFRS住院患者不同病期血样145份,同时选取15名健康志愿者作为正常对照,用酶联免疫吸附法检测其血浆中IL-18浓度,分析研究IL-18与其他检测指标的相关性。结果 HFRS患者血浆IL-18水平在发热期开始升高,少尿期达高峰,多尿期开始下降,但仍高于正常对照值;血浆IL-18水平在HFRS不同临床型之间都具有类似的变化趋势,急性期高于恢复期及正常对照值,恢复期高于正常对照值,且重型/危重型的变化更为明显。Spearman相关分析表明血浆IL-18水平与WBC和BUN水平呈中等程度正相关,与PLT呈中等程度负相关。结论 HFRS患者血浆IL-18水平与疾病严重程度及疾病进程密切相关,抑制IL-18的分泌可能会减轻机体的免疫病理损伤。     

肾综合征出血热患者血浆MCP-1水平及其临床意义

目的　分析肾综合征出血热（hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS）患者不同病期及不同临床型血浆单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemotactic protein-1, MCP-1）浓度变化与疾病相关性，为HFRS临床诊治提供参考依据。方法　以2012年10月—2014年1月期间在空军军医大学唐都医院住院就诊的81例HFRS患者及15例健康志愿者（正常对照组）作为研究对象，用酶联免疫吸附法分别检测其血浆中MCP-1水平，同步检测血常规、肾功能等指标，并分析MCP-1与临床常规检测指标的相关性。结果　在急性期，所有患者血浆MCP-1水平均明显升高，其中重型/危重型患者血浆MCP-1水平升高比轻型/中型更为显著；中型、重型、危重型患者血浆MCP-1水平急性期均高于恢复期及正常对照组（P均＜0.05），恢复期与正常对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。Spearman相关分析显示血浆MCP-1水平与白细胞、尿素氮、肌酐水平呈正相关，与血小板水平呈负相关。结论　HFRS患者血浆MCP-1水平与疾病严重程度及疾病进程密切相关。     

磷酸化ERK,p38MAPK在婴幼儿血管瘤组织中的表达及意义

目的探讨磷酸化ERK和p38MAPK信号通路在小儿血管瘤增生、消退中的作用。方法应用免疫组化SP法检测47例血管瘤(增殖期26例、消退期21例)组织中磷酸化ERK和p38MAPK的表达情况。结果磷酸化ERK阳性定位于细胞核,其在增殖期和消退期的阳性细胞指数分别为(67.71±12.68)%和(21.54±6.85)%;磷酸化p38MAPK阳性定位于细胞核,其在增殖期和消退期的阳性细胞指数分别为(83.78±5.25)%和(57.79±7.63)%;增生期磷酸化ERK与p38MAPK阳性表达呈正相关,而消退期呈负相关。结论磷酸化ERK和p38MAPK参与血管瘤的增生、消退过程;ERK通路可介导内皮细胞的增生和存活,而p38MAPK可能主要在消退期传递内、外源性凋亡信号,诱导内皮细胞凋亡。     

miR-200介导的IL-33表达参与支气管哮喘 发展过程的临床和小鼠实验研究

目的探讨miR-200对支气管哮喘发病过程的影响及潜在机制。方法选取22例为哮喘患者为哮喘组,14例正常人为正常组,检测两组支气管肺泡灌洗液(BALF)中miR-200a、miR-200b、miR-200c和血清中IL-33表达,分析IL-33与miR-200a、miR-200b、miR-200c的相关性。选取40只健康雄性BALB/c小鼠随机分为4组:对照组、卵清蛋白(OVA)组、OVA+miR-200b组、OVA+miR-200c组,每组各10只。采用OVA建立实验性哮喘小鼠模型,之后用miR-200b或miR-200c寡核苷酸通过鼻腔给药干预OVA小鼠,对照组小鼠用生理盐水代替。检测各组小鼠对不同浓度醋甲胆碱的气道阻力,及血清、BALF及肺组织中IL-33的含量,肺组织中miR-200b、miR-200c、IL-4、IL-5、IL-13的水平。结果与正常组比较,哮喘组患者BALF中miR-200b和miR-200c的表达显著降低(P 0. 05),miR-200a的表达无显著变化(P0. 05),此外哮喘组患者血清IL-33的含量显著增加(P 0. 05)。哮喘组患者血清IL-33的含量与BALF中miR-200b和miR-200c的表达呈显著负相关(P 0. 05)。与对照组比较,OVA组小鼠肺组织中miR-200b和miR-200c的表达显著降低(P 0. 05),血清、BALF及肺组织中IL-33的含量显著增加(P 0. 05),肺组织中炎症因子IL-4、IL-5和IL-13含量显著增加(P 0. 05),对8 mg/ml、12 mg/ml和16 mg/ml的醋甲胆碱的气道阻力显著增加(P0. 05)。与OVA组比较,OVA+miR-200b组和OVA+miR-200c组小鼠上述指标均逆转(P 0. 05)。结论 miR-200b/c表达降低与支气管哮喘的发展有密切关系,其可通过调节IL-33信号通路,可作为哮喘治疗的靶点之一。