慢性乙型肝炎、乙肝肝硬化、乙肝肝癌患者Th1/Th2型细胞因子水平变化研究

目的分析慢性乙型肝炎(CHB)、乙肝肝硬化(LC)、乙肝肝癌(HCC)患者血清中Th1/Th2型细胞因子水平变化,为慢性乙型肝炎至肝癌的发生发展过程中的免疫变化研究提供线索,并为患者的临床治疗研究提供免疫学指标。方法选取2010年2月-2011年11月于首都医科大学附属北京佑安医院就诊的40例CHB患者、40例LC患者、53例HCC患者,用Luminex技术检测血清中Th1类细胞因子[白细胞介素(interleukin,IL)-12、干扰素(interferon,IFN)-γ和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α]水平及Th2类细胞因子(IL-4、IL-6和IL-10)水平,并将25例健康志愿者作为正常对照组进行比较。结果除TNF-α外,CHB组、LC组和HCC组Th1类IL-12、IFN-γ和Th2类IL-4、IL-6、IL-10细胞因子水平均低于正常对照组;CHB组中大部分Th1类和Th2类细胞因子都高于LC组和HCC组;HCC组中TNF-α细胞因子水平要高于CHB组、LC组。结论 CHB、LC和HCC患者体内Th1/Th2细胞因子分泌水平受到抑制,Th1/Th2平衡发生漂移,对HBV病毒的清除作用受到抑制。TNF-α在肝癌发生过程中发挥着重要作用。     

两步和三步法分离样本资源库抗凝血单个核细胞和血浆效果比较

目的比较两步和三步法分离外周血单个核细胞(PBMC)和血浆的效果。方法对送至样本资源库的16例抗凝血标本分别采用两步法和三步法分离PBMC及血浆,并对2种不同处理方法的分离效果进行比较。两步法为将抗凝血加入淋巴细胞分离液,离心后分别分离PBMC和血浆;三步法则先离心分离血浆后再加入淋巴细胞分离液,离心后分离PBMC。结果 2种处理方法处理后检测的活细胞数、总细胞数及活细胞比例结果相近,差异均无统计学意义(P0.05)。两步法血浆中细胞因子水平均低于三步法,其中25种细胞因子比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论两步法省时,操作少,在分离PBMC方面效果与三步法类似;但两步法在分离血浆方面会影响血浆细胞因子水平。     

急性HIV感染者外周血T淋巴细胞CD57抗原动态表达及临床意义分析

目的 研究CD57在HIV急性感染者外周血T淋巴细胞的动态表达情况及临床意义.方法 随机选取2006年11月-2009年12月期间确诊为HIV-1急性感染的17位患者为研究对象,15例健康体检者为对照组,收集HIV感染者1、3、6个月时间点及对照组外周血单个核细胞(PBMC),以流式细胞仪双色、三色分析法分别分析CD3+ CD57+T淋巴细胞、CD3+ CD4+ CD57+T淋巴细胞、CD3+CD8+CD57+T淋巴细胞的比例,并分析其与病毒载量、CD4+T细胞计数间的相关性.结果 在感染1、3、6个月外周血淋巴细胞中,CD57+T淋巴细胞比例分别为15.24％±1.49％、13.51％±2.45％及14.65％ ±1.83％,正常对照组CD57+T淋巴细胞比例为3.72％±0.56％,HIV感染1、3、6个月CD57+T淋巴细胞比例较正常对照组明显增高,差异有统计学意义(P均＜0.0001).在感染的1个月、3个月外周血中CD8+CD57+在淋巴细胞中的比例分别为7.79％ +2.10％、9.88％±2.36％,与对应时间点的病毒载量成正相关关系,R2分别为0.3700、0.3768,P值分别为0.0096、0.0088;与对应时间点CD4+T细胞计数成负相关关系,R2分别为0.3768、0.4235,P值分别为0.0215、0.0017.急性HIV感染1个月时间点,6例病情快速进展患者与11例病情非快速进展患者,CD8+ CD57+T细胞比例分别为11.20％±2.21％、6.16％±1.09％,CD4+ CD57+T淋巴细胞比例分别为2.79％ ±0.31％、1.40％±0.30％,病情快速进展患者CD8+CD57+T、CD4+CD57+T淋巴细胞比例均高于病情非快速进展组,P值分别为0.0338、0.0106.结论 HIV感染急性期CD57+T淋巴细胞比例增加,其中CD8+ CD57+T淋巴细胞百分比可反映HIV病毒载量变化及CD4+T淋巴细胞的计数情况,HIV急性感染早期CD57在淋巴细胞高表达提示病情进展迅速.     

流感患者TNF-α和IL-10水平以及与病毒载量相关性研究

目的探讨流行性感冒(流感)患者与健康人群血清中细胞因子水平的差异,分析TNF-α和IL-10与流感病毒载量的关系。方法通过Luminex平台多因子检测系统对40例健康对照者和36例流感患者血清中的细胞因子进行定量分析。通过实时荧光定量PCR技术对36例流感患者体内流感病毒进行定性及定量分析。结果 36例流感患者血清中,TNF-α和IL-10水平均显著高于健康对照者,差异有统计学意义(P均0.05);且IL-10水平随流感病毒载量的增多而升高。结论细胞因子TNF-α和IL-10水平在流感病程中显著增高,IL-10水平与流感病毒载量呈正相关关系。     

流式样本保存时间对肝癌患者外周血T淋巴细胞和NK细胞的影响

目的观察样本保存时间对流式细胞仪检测肝癌患者外周血T淋巴细胞亚群的影响。方法随机选取肝癌患者16例,采血后6 h内分离外周血单核细胞,将细胞分成五组,包括立即上机组、4℃PBS保存1 d、2 d、3 d及5 d检测组,分别进行流式检测。结果样本保存3 d组淋巴细胞的物理参数发生变化;样本保存3 d组CD3+T淋巴细胞百分比显著降低(P 0. 05);样本保存3 d组NK细胞百分比显著降低(P 0. 05)。结论临床样本在收集后进行外周血单核细胞分离,将细胞用PBS于4℃条件下保存3 d内进行淋巴细胞和NK细胞的上机检测结果比较稳定。     

单独感染HCV与HCV/HIV共感染患者外周血T淋巴细胞分化分析

目的 探讨单独感染HCV与HCV/HIV共感染患者外周血T淋巴细胞分化情况.方法 采集单独感染HCV患者(12例)、HCV/HIV共感染患者(27例)以及正常人群(13例)的外周静脉血,检测ALT、AST等生化指标;提取外周血单个核细胞(PBMC),通过流式细胞检测技术检测CD4+T和CD8+T细胞比例.结果 HCV/HIV共感染患者ALT水平[(53.08±9.78) U/L]显著高于单独感染HCV患者[(26.22±4.25)U/L],差异有统计学意义(P=0.0064).处于中期分化状态的CD4+T细胞,在正常人群中所占比例为(35.13±3.24)％,显著高于单独感染HCV患者[(9.01±3.70)％]和HCV/HIV共感染患者[(8.10±2.14)％],差异有统计学意义(P＜ 0.001).正常人群、单独感染HCV患者与HCV/HIV共感染患者晚期分化的CD4+T细胞所占比例分别为(2.52±2.54)％、(14.30±9.85)％及(15.23±11.58)％,正常人群晚期分化的CD4+T细胞比例显著高于单感染HCV与HCV/HIV共感染患者的比例,差异有统计学意义(P＜0.05),单独感染HCV与HCV/HIV共感染患者之间无差异.正常人群处于早期分化和中期分化的CD8+T细胞的比例分别为(42.73±2.08)％、(36.17±2.85)％,均显著高于单独感染HCV患者同期水平[(28.27±4.36)％、(13.15±4.23)％]及HCV/HIV共感染患者[(18.02±2.01)％、(16.60±3.06)％],差异均有统计学意义(P＜0.05);单独感染HCV患者的早期分化CD8+T细胞比例也显著高于HCV/HIV共感染患者,差异有统计学意义(P＜0.05).而处于晚期分化的CD8+T细胞,正常人群所占比例为(12.02±1.54)％,显著低于单独感染HCV患者[(49.30±3.85)％]及HCV/HIV共感染患者[(54.23±2.58)％],差异有统计学意义(P＜0.05).结论 单独感染HCV及HCV/HIV共感染影响T淋巴细胞的分化状态;HCV/HIV共感染影响处于早期分化的CD8+T细胞比例.     

样本资源库中肝病患者和HIV感染者外周血单个核细胞分离效果比较

目的样本资源库中不同患者分离的外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）保存效果不同,从而影响后续科学研究。对肝病患者和人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染者PBMC分离效果进行分析比较,有助于更好的对患者PBMC细胞质量进行控制。方法121例标本根据疾病诊断分为肝病患者35例,HIV感染者51例,对照组35例。淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离PBMC,吖啶橙/碘化丙啶双染色法检测PBMC的活细胞、总细胞和细胞活性。结果3组人群PBMC总细胞数结果显示对照组分离细胞最多（1.54×106, 9.03×105～3.53×106）,其次为HIV感染者人群（1.08×106, 3.72×105～2.82×106）,最后为肝病患者（8.49×105, 3.61×105～2.30×106）,3组之间差异具有统计学意义（P＜0.05）。活细胞结果显示对照组分离后活细胞浓度最高（1.53×106, 8.79×105～3.51×106）,其次为HIV感染者人群（1.06×106, 3.46×105～2.77×106）,最后为肝病患者（8.44×105, 3.54×105～2.25×106）,3组之间差异具有统计学意义（P＜0.05）。细胞活性结果显示对照组细胞活性（98.40±0.39）高于肝病患者（97.28±0.33）和HIV感染者（96.86±0.37）,3组之间差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论肝病患者和HIV感染者在分离PBMC活细胞、总细胞和细胞活性方面均要低于正常对照组。