护肝中药“五田保肝液”急性毒性实验研究

[目的]明确护肝中药"五田保肝液"的用药安全剂量范围,为临床用药安全提供实验依据。[方法]依据中药、天然药物急性毒性实验研究技术指导原则设计实验,观察小鼠急性毒性反应,并记录其死亡情况,确定急性毒性实验中五田保肝液半数致死量(LD50)或最大给药量。[结果]半数致死量实验中未测得LD50,最大给药量实验获得小鼠最大给药量折合生药228 g/(kg·d),相当于成人临床用药量的120倍。[结论]护肝中药"五田保肝液"急性毒性反应低,临床常用药物剂量安全可靠。     

丹酚酸B对大鼠心肌缺血再灌注损伤内皮素及TXA2/PGI2系统的影响

目的　探讨丹酚酸 B(Sal B)对大鼠心肌缺血再灌注损伤 (MIRI)内皮素释放 (ET)及血栓素 /前列环素 (TXA2 / PGI2 )系统的影响。方法　大鼠心肌缺血 30 min后再灌注 1 2 0 min造成大鼠心肌缺血再灌注损伤模型 ,放免法测定给药前后血浆中 ET、TXB2 及 6- Keto- PGF1α的含量 ,观察 Sal B对 MIRI心肌的保护作用。结果　 Sal B可以减少 ET及 TXB2 的释放 ,提高 PGI2 的含量。结论　 Sal B可以减轻 MIRI,可能通过减少 ET的释放 ,改善 TXA2 / PGI2 系统的平衡状态 ,减轻心肌细胞的损伤。     

调肝导浊中药对血载脂蛋白含量及肝细胞膜脂蛋白受体的影响

为观察调肝导浊中药对血载脂蛋白的含量及肝细胞膜脂蛋白受体的影响。采用高胆固醇饮食造成动脉粥样硬化家兔模型，用免疫比浊法测定载脂蛋白AI和载脂蛋白B含量，体外培养大鼠肝细胞，将氧化型低密度脂蛋白直接加入培养液，采用原位杂交技术观察它对肝细胞膜脂蛋白受体的影响及调肝导浊中药对其的调节作用。结果发现，调肝导浊中药可有效升高载脂蛋白AI含量和降低载脂蛋白B含量，提示调肝导浊中药对脂蛋白受体途径具有良好的调节作用，可有效调节与脂质代谢密切相关的因素。从而防治高脂血症，抑制动脉粥样硬化的形成发展。     

丹酚酸B干预内皮祖细胞对骨髓间充质干细胞心脏移植后存活的影响

目的:观察丹酚酸B(SalB)预处理的内皮祖细胞(EPCs)不同比例与骨髓间充质干细胞(BMSCs)联合心脏移植后BMSCs的存活状况。方法:通过结扎左冠状动脉复制大鼠急性心肌梗死模型;密度梯度离心法和贴壁筛选法培养、纯化EPCs与BMSCs,免疫细胞化学法鉴定细胞;丹酚酸B最佳药物浓度处理的EPCs以不同比例与5-溴脱氧尿核苷(Brdu)标记的BMSCs混合,移植至心肌梗死区。4周后,硝基四氮唑蓝(N-BT)染色法测算心梗面积;免疫组化法检测Brdu的表达情况。结果:8:1组和模型组心肌梗死面积分别为(9.23±2.35)%和(19.60±3.23)%,8:1组与其他各组比较心梗面积显著缩小(P0.05)。4:1组和8:1组BMSCs阳性细胞数与其他治疗组比较,存活细胞显著增多(P0.05)。结论:丹酚酸B预处理的EPCs联合BMSCs的移植,能够提高BMSCs在梗死周边和缺血局部的存活。随着EPCs移植比例的增加,BMSCs的存活数量增多。     

当归补血汤立法理论及配伍应用的探析

通过查阅古代文献和现代研究资料，综合全面分析其立法理论及配伍应用。发现尽管对当归补血汤的立法有不同的认识，但均肯定其补气生血的作用，现代医学及药理学研究发现，当归补血汤配伍的合理性及应用的多方面性。当归补血汤药简力专，配伍独特，应用广泛，疗效显著。     

丹酚酸B对大鼠骨髓间充质干细胞分化过程中Desmin、α-actin mRNA表达的影响

[目的]探讨丹参单体丹酚酸B（SalB）在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）分化为心肌样细胞的情况及Desmin和d—actinmRNA的表达，确定大鼠MSCs体外诱导为心肌样细胞的条件、规律及转化细胞的特点。[方法]选用成年近交系Wistar大鼠，利用percoll分离液进行密度梯度离心法和直接贴壁法进行分离、提纯MSCs，并进行培养扩增。免疫组化方法对第9代MSCs表面抗原进行鉴定。分别应用10μmol／L5-氮胞苷（5-azacytidine，5-aza）及250μg，LSalB联合5-aza（5-aza＋SalB）对第9代的MSCs进行联合诱导24h，于诱导后第4周，用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测Desmin、α-actinmRNA的表达。[结果]1）第9代MSCs免疫组化染色CD44呈阳性表达，CD34呈阴性表达。2）诱导4周后，细胞体积变小，可见由几个细胞连接形成的多核肌管样结构。5-aza组、5-aza＋SalB组均出现明确的心肌早期分化基因与5-aza组相比，5-aza＋SalB组的Desmin和α—actinm RNA表达明显增强。[结论]SalB具有促进5-aza诱导的MSCs向心肌样细胞分化的作用。     

BMSc联合淫羊藿苷预处理的EPCs移植对AMI大鼠心功能的影响

目的：探讨中药淫羊藿苷预处理的内皮祖细胞（EPCs）与骨髓间充质干细胞（BMSCs）共移植后，对急性心肌梗死（AMI）大鼠心功能的影响。方法：密度梯度离心法和贴壁筛选法培养、纯化EPCs与BMSCs；免疫细胞化学法（CD34／CD133／CD44）分别鉴定两种细胞。结扎大鼠左冠状动脉，制作大鼠急性心肌梗死模型；淫羊藿苷最佳药物浓度处理的EPCs，与BMSCs混合，在大鼠心肌梗死区周边分5点注射。大鼠超声心动仪测定左室功能。结果：细胞移植4周后，EPCs与BMSCs共移植组LVDd、LVDs分别为6．925±0．848与4．323±1．193，EF、CO分别为76．71±9．78和0．111±0．029，与对照组差异具有统计学意义。结论：淫羊藿苷预处理的EPCs联合BMSc的移植促进了AMI大鼠左室功能的恢复。     

五田保肝液对酒精性肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1表达影响的实验研究

[目的]五田保肝液对酒精性肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。[方法]用白酒辅以吡唑、玉米油的混合食料灌胃的方法建立大鼠酒精性肝纤维化模型,随机分为正常组、模型组、中药低剂量组、中剂量组、高剂量组、易善复组(正常组10只,其余组各18只)。12周后处死苏木精-伊红(HE)、Masson染色观察肝纤维化的形成;酶联免疫检测法(ELISA)检测血清Ⅲ型前胶原蛋白肽(PⅢP)、层黏连蛋白(LN)两者含量;实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织中TGF-β1 mRNA的表达。[结果]模型组大鼠血清Ⅲ型前胶原蛋白肽(PⅢP)、层黏连蛋白(LN)含量和肝组织TGF-β1mRNA的表达明显增多,各治疗组相对于模型组均有不同程度减少,其中五田保肝液中、高剂量组降低更为明显。[结论]五田保肝液可抑制酒精性肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1的表达,这可能是其防治酒精性肝纤维化的机制之一。     

心脑血脉宁对家兔动脉粥样硬化易损斑块模型MMP-2＼TIMP-2表达的影响

[目的】探讨心脑血脉宁对家兔动脉粥样硬化易损斑块模型基质金属蛋白酶一2（MMP-2）、基质金属蛋白酶抑制因子一2（TIMP一2）表达的影响。【方法】通过喂养高脂饲料和主动脉球囊内皮拉伤术复制动脉粥样硬化易损斑块模型，实验分为模型组，假手术组，心脑血脉宁组，历时15周。处死后，取腹主动脉行苏木精一伊红（HE）染色，观察镜下病变，计数斑块破裂数，免疫组化方法检测MMP一2、TIMP一2蛋白含量。【结果】1）HE观察：假手术组镜下形态结构完整，模型组斑块中心可见大量脂核，斑块表面覆盖纤维帽，在斑块肩部可见残存泡沫细胞和大炎细胞浸润。心脑血脉宁组介于两者之间。2）免疫组化结果：与假手术组相比，模型组MMP一2、TIMP一2蛋白含量明显升高，差异有显著性（P〈0．01）；心脑血脉宁组MMP一2与模型组比较表达降低，差异有显著性（P〈0．01），而TIMP一2含量与模型组相比有降低趋势，但无统计学差异（P〉0．05）；心脑血脉宁组能够有效降低两者比值，与模型组相比差异有显著性（P〈0．01）。【结论】心脑血脉宁干预家兔动脉粥样硬化易损斑块模型，能减少斑块破裂，其机制可能与降低斑块MMP一2含量以及调节MMP一2与TIMP一2比值有关。     

中药心复康联合骨髓间充质干细胞移植对大鼠急性心肌梗死后心功能的影

【目的】探讨中药心复康联合骨髓间充质干细胞（BMscs）移植对大鼠急性心肌梗死后心功能的影响。【方法】经密度梯度离心和贴壁筛选法培养并纯化BMSCs,采用冠状动脉结扎法建立大鼠急性心肌梗死模型,术后采用中药联合干细胞移植,24h检测血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）活性,2周后超声心动仪检测大鼠心脏收缩功能[射血分数（Er）、左室短轴缩短率（Fs）、心输出量（co）1;处死动物,硝基四氮唑蓝（N—BT）染色评价梗死面积。【结果】联合治疗组较单纯细胞移植组能明显减小大鼠心肌梗死面积,降低血中MDA水平,提高SOD水平,EF、FS、CO也有不同程度改善。【结论】中药联合骨髓间充质干细胞移植较单纯细胞移植对结扎大鼠左冠状动脉前降支所致的急性心肌梗死具有更明显的保护作用。