骨髓单个核细胞移植对心肌修复相关因子的调节作用

目的:干细胞移植后可以通过分化为心肌细胞、减少心肌重构等方面发挥改善心功能的作用。观察急性心肌梗死后进行骨髓单个核细胞移植对相关细胞因子的调节作用,探讨干细胞发挥改善心脏重构的可能机制。方法:实验于2006-01/2007-02在福建省高血压研究所完成。①实验材料:清洁级SD大鼠由上海实验动物公司提供。②实验方法:取SD大鼠骨髓,分离出单个核细胞,以DAPI标记骨髓单个核细胞。取体质量200～250g雄性SD大鼠24只,建立急性心肌梗死模型后,随机分为2组,实验组从股静脉注入同种异体大鼠骨髓单个核细胞1.0×107,对照组注入等量的生理盐水。③实验评估:于移植后4周采用免疫组组织化学法检测DAPI阳性细胞、肌钙蛋白阳性细胞、基质细胞源性因子1、转化生长因子β及大鼠心功能改变。结果:24只大鼠均进入结果分析。移植后4周实验组基质细胞源性因子1表达较对照组明显升高,转化生长因子β表达较对照组下降;实验组在免疫荧光显微镜下可观察到DAPI和肌钙蛋白阳性细胞,心功能较对照组明显改善。结论:骨髓单个核细胞移植改善急性心肌梗死大鼠心功能的同时伴有基质细胞源性因子1表达增加及转化生长因子β表达下降。     

经皮球囊二尖瓣成形术的临床研究

目的:评价经皮球囊二尖瓣成形术(PBMV)患者的近期和长期疗效,并探讨老年二尖瓣狭窄(MS)或伴有重度肺动脉高压患者行PBMV的可行性。方法:对210例PBMV患者术前、后及其中80例患者随访10~14年的有关心脏参数进行分析、比较。结果:PBMV成功率99%(210/212)。210例患者行PBMV后即刻疗效:(1)二尖瓣面积(MVA)术前、后分别为(0.89±0.35)和(2.18±0.37)cm2(P<0.01);(2)二尖瓣跨瓣压差(MPG)分别为(14.9±5.1)和(7.1±1.8)mmHg,(P<0.01);(3)左房压(LAP)分别为(26.1±13.8)和(11.6±5.2)mmHg,(P<0.01);(4)术后心功能改善1级以上占100%,2级以上占85.8%。80例患者长期疗效:(1)MVA术前、后和随访10~14年分别为(0.83±0.35),(2.26±0.32)和(1.56±0.27)cm2,与术前比较P<0.01;(2)MPG分别为(16.1±4.8),(6.8±2.5)和(10.3±3.2)mmHg,与术前比分别为P<0.01,P<0.05;(3)心功能改善1级以上占87.8%;2级以上占60.3%;45例伴有重度肺动脉高压患者,术后肺动脉压从(67±15)mmHg下降至(47±16)mmHg,半年后继续降至(34±8)mmHg,P<0.01。结论:二尖瓣狭窄患者PBMV近期疗效和长期疗效满意,伴有肺动脉重度高压者或者老年人也是PBMV的适应证。     

自聚肽承载的Ephrin-b2/Fc重组蛋白在心肌梗死治疗中的缓释效应

目的通过体外观测和体内实验探讨自聚肽RAD16-Ⅱ对Ephrin-b2/Fc重组蛋白的控制释放效应及其免疫原性,解决心肌梗死蛋白质治疗中裸露的蛋白质在机体有效作用时间短且易被降解的问题。方法体外观测RAD16-Ⅱ的塑型及对Ephrin-b2/Fc重组蛋白的控制释放;构建SD大鼠心肌梗死模型,将存活大鼠分为2组分别予心肌内注射Ephrin-b2/Fc蛋白(E组,n=25)和自聚肽Ephrin-b2/Fc蛋白凝胶(ES组,n=25),在设定的时间点(1 h,3h,24 h,7 d,14 d)各收集心肌组织和血清样本5个,分别用免疫荧光和免疫印迹技术检测eprhin-b2蛋白驻留和丢失情况;皮下注射RAD16-Ⅱ,5 W后ELISA法检测血清抗体滴度,评估RAD16-Ⅱ的免疫原性。结果 RAD16-Ⅱ在PBS中可自我聚合组装成纳米纤维网状结构;这种结构在体外可使Ephrin-b2/Fc重组蛋白的释放持续144 h,其中超过50%量在120 h内释放;免疫荧光显示除注射后1 h外,Ephrin-b2/Fc蛋白在ES组的驻留量明显高于同期的E组(P0.05);免疫印迹显示注射早期,ES组Ephrin-b2/Fc蛋白的血液释入量明显少于同期的E组(P0.05);ELISA法检测血清抗RAD16-Ⅱ抗体效价与阴性对照组无显著差异。结论 RAD16-Ⅱ可明显地延缓Ephrin-b2/Fc重组蛋白的释放,是承载Ephrin-b2/Fc蛋白用于心肌梗死治疗和缺血性研究的较为可靠和安全的生物载体材料。     

三支血管完全闭塞行急诊PCI一例

患者 ,男 ,43岁 ,因“突发胸前区压榨性疼痛 1 5ｈ”于2 0 0 2年 2月 2 7日凌晨 2 :30入院。体表心电图显示 :Ｖ2 ～Ｖ5ＳＴ段抬高 0 2～ 0 4ｍＶ ,Ⅱ ,Ⅲ ,ａＶＦ可见ｑ波 ,ＳＴ段未抬高。入院诊断考虑急性广泛前壁心肌梗死并可疑下壁心肌梗死 ,ＫｉｌｌｉｐⅠ级。于 3:10ａｍ给予尿激酶 15 0× 10 4单位静脉溶栓治疗 ,同时辅以硝酸甘油、法安明、泡腾型乙酰水杨酸水溶片、舒降之、倍他洛克及钾镁合剂治疗。溶栓后 2ｈ内胸痛无缓解 ,Ｖ2 ～Ｖ5ＳＴ段无下降 ,原来ＳＴ段未抬高的Ｖ6 导联也出现ＳＴ弓背向上抬高约 0 4ｍＶ ,未出现再灌注…     

二维斑点追踪技术评价移植心脏左心室扭转

目的 探讨左室扭转评价移植心脏左心室功能的价值.方法 30例心脏移植受者,17例正常人,应用二维应变软件测量左室基底部和心尖部旋转角度、整体扭转角度及达峰时间,计算解旋率,比较两组间差异,并分析其与舒张末期、收缩末期容积及射血分数之间的关系.结果 移植组心尖部旋转角度及整体扭转角度均小于对照组.扭转角度与收缩末容积呈负相关,与射血分数呈正相关.两组间解旋率无明显差异.结论 二维斑点追踪技术可以准确反映左室扭转运动,为移植心脏左室收缩功能的整体判断提供重要的依据.     

慢病毒载体介导血管生长素1基因修饰骨髓间充质干细胞对颈动脉粥样硬化的影响

背景:骨髓间充质干细胞易于被外源基因转染,且具有向损伤组织趋化聚集的特性,便于将目的基因导入其中并发挥治疗性作用,可以通过分化为血管内皮细胞修复损伤的血管内膜.目的:探讨慢病毒载体介导的血管牛长素1基因修饰骨髓间充质干细胞移植后,对大鼠颈动脉粥样硬化的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-02/2008-05在福建省高血压研究所及福建医大附属第一医院中心实验室完成.材料:4周龄雄性SD大鼠32只,8只用于制备骨髓间充质干细胞,剩余24只随机分为3组;模型对照组、空载体组、血管生长素1转染组,8只/组.方法:以重组慢病毒为载体构建血管生长素1基因工程干细胞,以绿色荧光蛋白为报告基因,调整细胞密度为(1.0～2.0),1010 L-1.3组大鼠均采用球囊损伤法+高脂饮食构建颈动脉粥样硬化模型,造模后即刻,空载体组将未感染的0.1 mL骨髓间充质干细胞悬液注入颈总动脉外膜,分3点注射;血管生长素1转染组同法注入等量重组慢病毒感染的骨髓间充质干细胞悬液,饲养2个月后处死大鼠,取颈动脉组织.主要观察指标:Western blot法检测转基因干细胞中血管生长素1的表达,荧光免疫组织化学及苏木精-伊红染色检测动脉内膜/中膜面积比.结果:24只大鼠均进入结果分析.血管生长素1转染组表达血管生长素1蛋白,另2组无血管生长素1蛋白表达.移植后2个月,荧光显微镜下空载体组、血管生长素1转染组动脉壁内均可见绿色荧光蛋白阳性细胞;各组均可见动脉内膜增生,斑块形成;与模型对照组比较,空载体组内膜面积,中膜面积值无明显变化(P＞0.05),血管生长素1转染组内膜面积,中联面积值明显减小(P＜0.05).结论:经血管生长素1基因修饰的骨髓间充质干细胞移植可明显减轻动脉粥样硬化程度.     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠心梗后细胞因子VEGF、SDF-1、TGF-β1表达及心脏功能的影响

目的 观察急性心肌梗死大鼠移植异体骨髓间充质干细胞后血管内皮生长因子（VEGF）、基质细胞源性因子－1（SDF-1）、转化生长因子β1（TGF-β1）及心脏功能的变化。方法 密度梯度离心法和贴壁筛选法获得SD大鼠骨髓间充质干细胞,实验动物随机分为2组：细胞移植组即实验组（n＝8）、无细胞移植组即对照组（n＝8）。于移植4周后处死动物,免疫组化检测VEGF、SDF-1、TGF-β1及Buxco 系统测大鼠的心功能。结果 实验组在移植4周后免疫组化显示VEGF表达较对照组明显升高（15.02±1.87 VS 5.45±0.90,P<0.05）, SDF－1较对照组明显升高（20.02±3.87 VS 8.24±1.17, P<0.01）、TGF-β1较对照组降低（13.24±2.07 VS 26.33±4.17,P<0.01）;心脏功能亦较对照组显著改善（P<0.05）。结论 骨髓间充质干细胞移植到梗死心肌后可以干预VEGF、SDF－1、TGF-β1的分泌促进梗死后心脏功能的恢复。     

血管生成素1通过整合素对大鼠骨髓间充质干细胞的黏附、活力及抗凋亡影响

背景：前期实验已证实骨髓间充质干细胞表面存在整合素受体,但血管生成素1是否能通过整合素受体促进骨髓间充质干细胞的生存、抗凋亡目前尚不明确。 目的：探讨血管生成素1对大鼠骨髓间充质干细胞黏附、活力、抗凋亡的影响,并初步分析其信号转导机制。 设计、时间及地点：细胞学体外对照观察,于2008-01/10在厦门大学附属中山医院开放实验室完成。 材料：清洁级SD大鼠40只,由中科院上海实验动物中心提供。人血管生成素1为R&D公司产品。 方法：密度梯度离心结合贴壁分离法体外分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞,第3～6代细胞用于实验。分别以不同的基质包被24孔培养板1 h,清洗后再加入单细胞悬液,设立7组：第1组作为对照,以含0.1%牛血清白蛋白的PBS包被;第2~4组分别以玻粘连蛋白、纤维粘连蛋白、血管生成素1包被;第5~7组单细胞悬液预先分别与乙二胺四乙酸、β1抗体、RGD抗体孵育10 min后再加入24孔板,行血管生成素1包被。 主要观察指标：通过黏附测定、锥虫蓝染色、MTT试验、Hoechst染色和Annexin V/PI法检测血管生成素1对骨髓间充质干细胞的黏附、活力、抗凋亡等生物学效应,结合整合素抗体和信号转导阻滞剂通过Western blotting法检测磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B、总丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B、Bcl-2和β-actin水平。 结果：成功分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞仪鉴定其纯度达98.3%。黏附试验显示与对照组比较,培养1,2, 3 d血管生成素1均能促进骨髓间充质干细胞的黏附(P < 0.01),该效应能被乙二胺四乙酸、整合素亚单位β1抗体和RGD抗体所抑制(P < 0.01)。血管生成素1能促进骨髓间充质干细胞在血清饥饿下的存活(P < 0.01)、增殖(P < 0.01)和提高磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B、Bcl-2的表达来拮抗紫杉醇诱导的凋亡(P < 0.01),RGD抗体能抑制上述作用。 结论：血管生成素1可与整合素受体结合促进骨髓间充质干细胞的黏附、存活和增殖,并通过上调磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B和Bcl-2的表达发挥抗凋亡作用。     

血管生成素1通过NF-κB传导通路影响内皮祖细胞炎症反应中黏附分子的表达

目的探讨血管生成素1(Ang-1)影响内皮祖细胞(EPC)炎症反应中黏附分子表达的主要信号传导通路。方法以慢病毒为载体将Ang-1导入EPC中,采用肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导内皮祖细胞炎症,使用特异性抑制剂PDTC抑制NF-κB,通过荧光定量PCR、ELISA检测各组(空白对照组、TNF-α组、Ang-1组、PDTC组、Ang-1+PDTC组)细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)的mRNA和蛋白表达水平。结果与TNF-α组相比,Ang-1组、PDTC组及Ang-1+PDTC组ICAM-1、VCAM-1的mRNA和蛋白表达水平均明显下调(P<0.05),三组间无明显差异(P>0.05)。结论血管生成素1通过NF-κB传导通路抑制EPC炎症反应中ICAM-1、VCAM-1的表达。     

福辛普利和氨氯地平对高血压病患者血压和肾功能的影响

目的：探讨福辛普利和氨氯地平对高血压病患血压和肾功能的影响。方法：40例高血压病患随机被分成2组,福辛普利组（20例,10mg,1次／日）,氨氯地平组（20例,5mg,1次／日）;疗程24周,治疗前,后观察血压和肾功能变化。结果：（1）两组患治疗后动脉压及蛋白的排泄量均显降低;（2）福辛普利组尚能显提高肾小球滤过率（P＜0．05）。结论：福辛普利和氨氯地平均能有效降低高血压病虱的血压及尿蛋白排泄量。福辛普利还有保护肾功能的作用。