血小板内皮细胞黏附分子-1基因多态性及血浆水平与严重冠脉粥样硬化病变的相关性

目的研究血小板内皮细胞黏附分子-1（PECAM-1）基因第3外显子C＋373G单核苷酸多态性及血浆可溶性PECAM-1（sPECAM-1）水平与严重冠状动脉粥样硬化的相关性。方法入选经冠状动脉造影诊断为三支病变的冠心病患者97例和冠脉狭窄〈50％的同期非冠心病患者89例。采用Pyrosequencing基因测序法检测PECAM-1第三外显子C＋373G单核苷酸多态性；采用酶联免疫吸附试验方法测定血浆中的sPECAM-1浓度。结果（1）冠心病组（CAD组）中GG型的比例显著高于对照组（26．3％：14．6％，P=0．047）。（2）CAD组sPECAM-1显著低于对照组[（61．14±34．57）p．g／L vs （33．62±38．58）μg／L，P〈0．001）。（3）在所有研究对象中，血浆sPECAM-1水平在各基因型中的分布具有一定的趋势[CC：（41．68±33．60）μg／L；CG：（47．17±38．15）μg／L；GG：（53．18±46．51）μg／L，P=0．433）。冠心病亚组中，sPECAM-1水平在基因型中的分布达到统计学上的差异[（CC：（23．64±16．90）μg／L；CG：（27．68±30．16）μg／L；GG：（53．97±54．90）μg／L；P=0．0123。结论PECAM-1 C±373G位点的突变是严重冠脉粥样硬化的一个遗传易患因子。sPECAM-1同冠心病具有一定的相关性。     

氧化型低密度脂蛋白诱导RAW264.7细胞表达V型和X型分泌型磷脂酶A2

目的通过研究不同氧化程度的氧化型低密度脂蛋白对鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞表达Ⅳ型胞浆型磷脂酶A2、V型和X型分泌型磷脂酶A2的调节作用,探讨氧化型低密度脂蛋白在促动脉粥样硬化过程中的炎症机制。方法利用不同的氧化方法对低密度脂蛋白进行氧化修饰,分别制备轻微修饰低密度脂蛋白、轻度氧化低密度脂蛋白和重度氧化低密度脂蛋白,将此三型氧化型低密度脂蛋白用于刺激RAW264.7细胞,分别孵育4 h及8 h后收集细胞裂解液和细胞培养上清液,分别用逆转录聚合酶链反应法检测胞浆型磷脂酶A2、V型和X型分泌型磷脂酶A2的mRNA表达,Western blotting法检测胞内和细胞培养上清液中V型和X型分泌型磷脂酶A2蛋白的表达。结果与PBS对照组及低密度脂蛋白组相比,RAW264.7细胞经各型氧化型低密度脂蛋白刺激后胞浆型磷脂酶A2的mRNA表达差异无显著性(P>0.05),但V型分泌型磷脂酶A2和X型分泌型磷脂酶A2的mRNA表达水平和胞内及细胞培养液中蛋白的表达水平均明显升高(P<0.05)。与轻微修饰低密度脂蛋白组和重度氧化低密度脂蛋白组相比,轻度氧化低密度脂蛋白组诱导V型分泌型磷脂酶A2和X型分泌型磷脂酶A2的mRNA和蛋白表达作用更强(P<0.05),而轻微修饰低密度脂蛋白组的作用又要强于重度氧化低密度脂蛋白组(P<0.05)。结论氧化型低密度脂蛋白可诱导RAW264.7细胞表达V型和X型分泌型磷脂酶A2,而两型轻度氧化的氧化型低密度脂蛋白诱导V型和X型分泌型磷脂酶A2表达的能力明显强于重度氧化程度的低密度脂蛋白,说明轻度氧化程度的氧化型低密度脂蛋白具有较强的诱导巨噬细胞产生炎症反应的能力。     

冠心病患者血白细胞不同亚群内载脂蛋白(a)和载脂蛋白B100含量的变化

目的研究冠心病患者白细胞不同亚群内载脂蛋白(a)和载脂蛋白B100的变化,并分析其与冠状动脉狭窄病变的关系。方法对冠状动脉造影证实无冠状动脉病变者(n=18)和冠状动脉三支病变者(n=13)进行研究。通过逆转录聚合酶链反应和荧光共聚焦显微镜、流式细胞仪分别检测细胞内载脂蛋白(a)和载脂蛋白B100的基因表达和蛋白含量。结果通过逆转录聚合酶链反应发现白细胞不能合成载脂蛋白(a)和载脂蛋白B100,而荧光共聚焦显微镜和流式细胞仪均证实白细胞三亚群内存在载脂蛋白(a)和载脂蛋白B100。流式细胞仪定量分析发现,冠状动脉三支病变组与无冠状动脉病变组比较细胞内代表载脂蛋白B100含量的平均荧光强度粒细胞(417±250比183±88,P<0.05)、单核细胞(189±77比41±13,P<0.01)及淋巴细胞(102±65比16±6,P<0.01)都明显增加,分别增加了128%、364%和532%。经过与血浆载脂蛋白B100浓度校正后也存在明显差异(P<0.01)。结论白细胞各亚群均可携带载脂蛋白(a)和载脂蛋白B100,其中细胞内载脂蛋白B100含量增加与冠状动脉狭窄病变有关。     

氧化型低密度脂蛋白诱导RAW264.7细胞表达Ⅴ型和Ⅹ型分泌型磷脂酶A2

目的 通过研究不同氧化程度的氧化型低密度脂蛋白对鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞表达Ⅳ型胞浆型磷脂酶A2、Ⅴ型和Ⅹ型分泌型磷脂酶A2的调节作用,探讨氧化型低密度脂蛋白在促动脉粥样硬化过程中的炎症机制.方法 利用不同的氧化方法 对低密度脂蛋白进行氧化修饰,分别制备轻微修饰低密度脂蛋白、轻度氧化低密度脂蛋白和重度氧化低密度脂蛋白,将此三型氧化型低密度脂蛋白用于刺激RAW264.7细胞,分别孵育4 h及8 h后收集细胞裂解液和细胞培养上清液,分别用逆转录聚合酶链反应法检测胞浆型磷脂酶A2、Ⅴ型和Ⅹ型分泌型磷脂酶A2的mRNA表达,Western blotting法检测胞内和细胞培养上清液中Ⅴ型和Ⅹ型分泌型磷脂酶A2蛋白的表达.结果 与PBS对照组及低密度脂蛋白组相比,RAW264.7细胞经各型氧化型低密度脂蛋白刺激后胞浆型磷脂酶A2的mRNA表达差异无显著性(P>0.05),但Ⅴ型分泌型磷脂酶A2和Ⅹ型分泌型磷脂酶A2的mRNA表达水平和胞内及细胞培养液中蛋白的表达水平均明显升高(P<0.05).与轻微修饰低密度脂蛋白组和重度氧化低密度脂蛋白组相比,轻度氧化低密度脂蛋白组诱导Ⅴ型分泌型磷脂酶A2和Ⅹ型分泌型磷脂酶A2的mRNA和蛋白表达作用更强(P<0.05),而轻微修饰低密度脂蛋白组的作用又要强于重度氧化低密度脂蛋白组(P<0.05).结论 氧化型低密度脂蛋白可诱导RAW264.7细胞表达Ⅴ型和Ⅹ型分泌型磷脂酶A2,而两型轻度氧化的氧化型低密度脂蛋白诱导Ⅴ型和Ⅹ型分泌型磷脂酶A2表达的能力明显强于重度氧化程度的低密度脂蛋白,说明轻度氧化程度的氧化型低密度脂蛋白具有较强的诱导巨噬细胞产生炎症反应的能力.     

冠心病患者外周血中载脂蛋白(a)和载脂蛋白B的表达和定位

目的:研究冠心病患者的血浆和外周血细胞中载脂蛋白(a)[apolipoprotein(a), apo(a)]和载脂蛋白B(apolipoprotein B, apoB)的表达变化及其在外周血细胞中的定位.方法:选择经冠状动脉造影诊断为冠心病且为三支病变的患者4例(A组)及冠状动脉造影正常对照者5例(B组).采集其外周动脉血检测血浆脂质水平,RTPCR方法检测外周血白细胞和血小板中apo(a)和apoB的mRNA表达,Western blot方法检测apo(a)和apoB在血浆、外周血白细胞和血小板中的蛋白表达及血浆apo(a)蛋白表型,并用激光共聚焦荧光显微镜及计算机三维成像技术分析外周血白细胞中apo(a)和apoB蛋白定位和含量.结果:冠心病患者与冠状动脉正常者相比,血浆高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol, HDL-C)水平明显降低[(0.62±0.05)mmol/L比(0.81±0.15)mmol/L, P<0.05],载脂蛋白A-I(apolipoprotein A-I, apoA-I)水平亦明显降低[(0.78±0.08)mmol/L比(0.9±0.07)mmol/L, P<0.05],伹血浆其他脂质水平差异无统计学意义.本研究并末发现apo(a)低相对分子质量亚型与冠状动脉病变相关,血浆apo(a)表型以s4为主.冠心病患者外周血血小板中apoB的蛋白水平比冠状动脉正常者减少25.1%(光密度值为0.67±0.18比1.0±0.1,P<0.05),但apo(a)表达在两组之间差异无统计学意义(光密度值0.43±0.18比0.61±0.4,P>0.05).用激光共聚焦荧光显微镜观察到白细胞中apo(a)和apoB共定位,冠心病患者apoB/apo(a)比值较冠状动脉正常者显著降低(光密度值1.60±0.12比4.4±0.35,P<0.05).但外周血白细胞和血小板中并未检测到apo(a)和apoB mRNA的表达.结论:外周血白细胞和血小板可携带载脂蛋白apo(a)和apoB,并且其含量在冠心病患者与冠状动脉正常者间存在差异.