腺相关病毒与生物素葡聚糖胺顺行标记小鼠皮质脊髓束的比较

目的比较腺相关病毒(AAV)与生物素葡聚糖胺(BDA)用于顺行标记小鼠皮质脊髓束(CST)的差异,探索AAV病毒应用于小鼠皮质脊髓束的顺行神经示踪的优势。方法通过立体定位注射将AAV8-CAG-GFP-2A病毒与BDA分别注射到正常小鼠以及脊髓损伤小鼠大脑体感运动皮质,通过免疫组织化学法检测AAV与BDA标记到的CST轴突,并对轴突束(bundle)及轴突分支(branch)的荧光强度进行定量分析。结果在正常小鼠的脊髓颈段、胸段及脊髓损伤小鼠胸段,AAV与BDA均可标记到经典的CST轴突束,及投射到脊髓灰质中的轴突分支。相较于BDA,AAV在小鼠脊髓颈段和胸段均能标记到更广泛的CST轴突分支。结论 AAV对于CST轴突的标记效果优于传统的神经示踪剂BDA,可作为一种更好的神经示踪方法应用于小鼠皮质脊髓束及相关神经环路的形态学研究。     

Compound48/80对载脂蛋白E基因敲除小鼠颈总动脉套环诱导斑块的影响

目的采用肥大细胞脱颗粒剂———Compound 48/80作用于颈总动脉套环的载脂蛋白E基因敲除小鼠,以探讨肥大细胞脱颗粒对动脉粥样硬化斑块的影响及其可能作用机制。方法载脂蛋白E基因敲除小鼠高脂高胆固醇饲料喂养,行右颈总动脉套环术后分为实验组和对照组,分别腹腔注射Compound 48/80或D-hank’s。第4次注射后30 min,安乐死,取材。全自动生物化学分析仪测定血清中脂质含量,比色法测定血清中类胰蛋白酶活性,苏木素—伊红染色观察颈总动脉病理改变,甲苯胺蓝肥大细胞染色,免疫组织化学检测平滑肌肌动蛋白和巨噬细胞特异性抗原在斑块内的表达。结果Compound 48/80对血清脂质水平无明显影响。Compound 48/80明显刺激肥大细胞脱颗粒(80.6%±17.8%比13.5%±4.1%,P<0.01),升高血清中类胰蛋白酶活性(0.57±0.13 u/L比0.36±0.10 u/L,P<0.05)。套环能加速颈总动脉斑块形成(未套环侧颈总动脉斑块面积均为0,套环侧颈总动脉均有斑块形成),Compound 48/80增大套环侧颈总动脉斑块最大横截面积(58 500±7 500μm2比8 600±2 800μm2,P<0.01),并使管腔最大狭窄程度加重(81%±15%比41%±12%,P<0.05)。Compound 48/80使颈总动脉斑块内α平滑肌肌动蛋白表达量增加(1 219±364 iu比522±137 iu,P<0.05)和巨噬细胞特异性抗原表达量增加(426±133 iu比169±38 iu,P<0.05)。结论套环能加速载脂蛋白E基因敲除小鼠颈总动脉斑块形成。Compound 48/80使套环侧颈总动脉斑块最大横截面积和颈总动脉最大狭窄程度增加,其机制可能与其刺激肥大细胞脱颗粒促使平滑肌细胞增殖和巨噬细胞聚集有关。     

SR-BI过表达对J774细胞胆固醇转运的影响

目的用构建的人SR-BI（hSR-BI）真核表达载体转染J774细胞,观察细胞瞬时过表达SR-BI对J774细胞胆固醇转运功能的影响。方法用hSR-BI cDNA转染法转染J774细胞,用RT-PCR和Western blot检测各组细胞的SR-BI表达,优化转染条件;用液体闪烁计数法检测流入和流出细胞的[3H]胆固醇量,分析过表达SR-BIJ774细胞的胆固醇转运功能。结果与对照组和空载体转染的J774细胞相比,pcDNA3.1（-）＋hSR-BI转染的J774细胞SR-BI表达升高;与空载体转染的J774细胞相比,pcDNA3.1（-）＋hSR-BI转染的J774细胞的胆固醇双向转运功能增强。结论用hSR-BI真核表达载体pcDNA3.1（-）＋hSR-BI成功转染了J774细胞,使细胞过表达SR-BI,过表达的hSR-BI具有促进胆固醇转运的作用。     

清道夫受体A与动脉粥样硬化

清道夫受体A是一种细胞表面的糖蛋白,主要分布在巨噬细胞上,具有广泛的配体识别谱,最初是作为脂蛋白受体被发现的,可以内吞修饰的脂蛋白,促进动脉粥样硬化斑块的形成。近年研究发现,清道夫受体A还在介导巨噬细胞对内毒素清除及凋亡细胞的识别、细胞黏附以宿主防御等起重要作用。与对清道夫受体A的分子结构,表达调空和生物学功能等做一综述。     

过氧化体增殖物激活型受体γ对巨噬细胞脂质蓄积及CD36表达的影响

目的观察过氧化体增殖物激活型受体γ激动剂和拮抗剂对THP-1巨噬细胞胆固醇蓄积及CD36表达的影响。方法实验分对照组、氧化型低密度脂蛋白组、Ciglitazone处理组和GW9662处理组,后两组用50 mg/L氧化型低密度脂蛋白分别与过氧化体增殖物激活型受体γ激动剂Ciglitazone(10μmol/L)及拮抗剂GW9662(10μmol/L)共同孵育24 h,高效液相色谱分析法检测细胞总胆固醇蓄积情况,RT-PCR和Western blot分别检测THP-1巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达。结果与对照组(76.28±10.36 mg/g)相比,氧化型低密度脂蛋白(121.63±13.32 mg/g)能使细胞总胆固醇含量显著增加,而Ciglitazone能使氧化型低密度脂蛋白处理的细胞总胆固醇含量进一步增加(136.23±14.78 mg/g),GW9662能使氧化型低密度脂蛋白处理的细胞总胆固醇含量减少(98.52±11.45 mg/g)。过氧化体增殖物激活型受体γ拮抗剂GW9662使巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达下调及胆固醇蓄积减少,过氧化体增殖物激活型受体γ激动剂Ciglitazone使巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达上调及胆固醇蓄积增多。结论过氧化体增殖物激活型受体γ拮抗剂使THP-1巨噬细胞胆固醇蓄积减少及氧化型低密度脂蛋白诱导的CD36表达下调。     

化合物48/80对载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉斑块的影响

目的目前,肥大细胞与动脉粥样硬化的关系研究主要是病理学观察和细胞学实验。基于此种现状,本课题拟用化合物48/80探讨肥大细胞脱颗粒与载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉斑块的关系。方法40只10周龄载脂蛋白E基因敲除小鼠给予高脂高胆固醇饲养至16周龄,随机分为2组(n=20),实验组给予腹腔注射化合物48/80(0.5mg/kg),隔日一次,共4次;对照组腹腔注射Dhank’s。第4次注射后半小时,安乐死处死动物,摘眼球取血,分离血清,采用酶法测定血清脂质含量,采用比色法测定血清类胰蛋白酶活性浓度。原位灌流固定,取主动脉置10%中性缓冲福尔马林中固定,石蜡包埋,连续切片,HE染色、甲苯胺蓝染色以及α平滑肌肌动蛋白、Mac3、VEcadherin免疫组织化学染色。HMIAs2000高清晰度彩色医学图文分析系统进行图像分析。结果实验组血清类胰蛋白酶活性浓度明显高于对照组(0.57±0.13u/L比0.36±0.10u/L),但两组血清脂质含量无明显差异。实验组与对照组相比,主动脉外膜脱颗粒肥大细胞百分率升高(80.6%±17.8%比13.5%±4.1%,P<0.05),主动脉斑块最大横截面积增大[(1.25±0.36)×104μm2比(0.79±0.24)×104μm2,P<0.05],斑块内α平滑肌肌动蛋白阳性细胞百分率下降(36.2%±14.9%比69.7%±31.3%,P<0.05)斑块内Mac3阳性细胞百分率升高(58.6%±17.3%比28.5%±16.4%,P<0.05),而斑块内膜VEcadherin平均光密度减小(48±8比65±10,P<0.05)。结论化合物48/80促使肥大细胞脱颗粒,并使载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉斑块最大横截面积增大、斑块内Mac3阳性细胞百分率升高、α平滑肌肌动蛋白阳性细胞百分率下降、斑块内膜VEcadherin平均光密度减小。     

DTNBP1基因rs4715986位点多态性与中国汉族人群偏执型精神分裂症相关

目的通过两步法研究中国汉族人群DTNBP1基因的多态性与偏执型精神分裂症的相关性。方法发现阶段:在532例偏执型精神分裂症患者及488名健康对照中使用Sanger测序方法检测DTNBP1的11个SNP位点。验证阶段:在1 111例偏执型精神分裂症患者及1 435名健康对照中使用Taqman探针分型的方法对发现阶段检出阳性的rs4715986位点进行验证。结果发现DTNBP1中的rs4715986位点与偏执型精神分裂症的高患病风险相关(χ~2=11.02,P0.01)。在验证人群中重复出rs4715986与偏执型精神分裂症的相关性(χ~2=9.29,P=0.01)。结论DTNBP1基因rs4715986位点的多态性与偏执型精神分裂症的高患病风险相关。DTNBP1可能是中国汉族人群偏执型精神分裂症的易感基因。     

肥大细胞脱颗粒对载脂蛋白E基因敲除小鼠斑块稳定性的影响

目的 探讨肥大细胞脱颗粒对颈总动脉套环的载脂蛋白E基因敲除小鼠斑块稳定性的影响.方法 40只雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠予以高脂高胆固醇饲料喂养,行右颈总动脉套环术,术后4周,随机分为实验组和对照组,实验组小鼠腹腔注射肥大细胞脱颗粒剂--化合物48/80(0.5 mg/kg),对照组小鼠腹腔注射相同体积的溶媒D-Hank's,隔日一次,共4次.第4次注射后30 min安乐死,取材.比色法测定血清类胰蛋白酶活性;甲苯胺蓝染色检测肥大细胞脱颗粒;苏木素-伊红染色观察颈总动脉病理改变及斑块内出血;Ⅷ因子相关抗原免疫组织化学染色检测斑块内新生血管密度;血管内皮钙粘蛋白、白细胞介素1β免疫组织化学染色检测其在斑块内的表达量.结果 实验组套环侧颈总动脉内膜下斑块内泡沫细胞、细胞外脂质及炎性细胞较对照组明显增多;实验组肥大细胞脱颗粒、血清类胰蛋白酶活性、斑块内新生血管密度、斑块内出血、斑块内白细胞介素1β及血管内皮钙粘蛋白的表达量比对照组显著增高(P<0.05或P<0.01).结论 肥大细胞脱颗粒增加斑块内泡沫细胞、细胞外脂质及炎性细胞,并促进斑块内血管新生、斑块内出血及白细胞介素1β和血管内皮钙粘蛋白的表达,从而使斑块稳定性削弱.     

2660例腹式输卵管结扎术临床体会

２６６０例腹式输卵管结扎术临床体会甘肃省泾川县泾明卫生院（７４４３２１）冯进元孙玉慧在农村开展计划生育工作中，输卵管结扎仍是当前常用的安全有效的永久性避孕方法。笔者自１９９０年元月至１９９６年１０月，共施行输卵管结扎术２６６０例，未出现过术中损伤，术...