脂质过氧化诱导培养的内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白-1

在人脐静脉和牛主动脉内皮细胞培养基中加入联胺，引发其脂质过氧化损伤，观察能否诱导内皮细胞表述单核细胞起化蛋白河。用斑点杂交法检测内皮细胞暴露于联胺后其单核细胞趋化蛋白-1mRNA的表达，杂交用的探针为了r32P5’末端标记的寡核苷酸探针。同时，用酶联免疫反应检测内皮细胞暴露于联胺后．其条件培养基中的单核细胞趋化蛋白-1蛋白含量。斑点杂交显示．培养的内皮细胞可表达单核细胞趋化蛋白-1mRNA，暴露于联胺后．其单核细胞趋化蛋白-1mRNA表达水平明显升高。而且，单核细胞趋化蛋白-1mRNA表达水平与联胺的作用时间和浓度均呈正相关。酶联免疫反应显示，各组条件培养基中的单核细胞趋化蛋白-1蛋白含量亦与联胺作用的时间和浓度呈正相关。提示内皮细胞的脂质过氧化损伤可诱导其产生单核细胞起化蛋白-1增加，在动脉粥样硬化发生过程中单核细胞的聚集可能起重要作用。     

单核细胞趋化蛋白-1在兔食饵性动脉粥样硬化病变中的表达

为了探讨单核细胞趋化蛋白－１（ｍｏｎｏｃｙｔｅｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔｐｒｏｔｅｉｎ－１，ＭＣＰ－１）在动脉粥样硬化病变中的表达情况，以含胆固醇饲料复制家兔高脂血症和动脉粥样硬化模型。用Ｐ末端标记的单核细胞趋化蛋白－１寡核苷酸探针检测斑块组织中单核细胞趋化蛋白－１ｍＲＡＮ的表达，夹心酶联免疫吸附法检测培养的斑块平滑肌细胞条件培养基中单核细胞趋化蛋白－１含量，免疫组织化学法观察斑块组织细胞中单核细胞趋化蛋白－１的表达。结果发现，动脉粥样硬化病变组织表达单核细胞趋化蛋白－１ｍＲＮＡ的积分光密度值（４．１５）为对照组（０．３８）的１０．７倍。培养的斑块平滑肌细胞条件培养基中单核细胞趋化蛋白－１含量（１０．０±０．８ｇ／Ｌ）明显高于正常平滑肌细胞条件培养基（７．０±０．７ｇ／Ｌ）和非条件培养基（６．４±０．７ｇ／Ｌ），差异有极显著性意义（Ｐ＜０．０１）。免疫组织化学发现，斑块中的内皮细胞、巨噬细胞源泡沫细胞和增殖的平滑肌细胞均不同程度地表达单核细胞趋化蛋白－１，以巨噬细胞源泡沫细胞表达最强。此结果提示在高脂血症时，参与动脉粥样硬化斑块形成的细胞处于相当活跃状态，均能产生和分泌单核细胞趋化蛋白－１。     

内皮细胞脂质过氧化损伤增强主动脉平滑肌细胞表达细胞周期素D

为探讨细胞周期素D在主动脉平滑肌细胞中的表述规律，揭示动脉粥样硬化中平滑肌细胞的增殖机制，在培养的免主动脉平滑肌细胞中分别加入不同程度的内皮细胞损伤后的条件培养基，24h后分别收集各组的平滑肌细胞，进行免疫组织化学染色和细胞核的增殖试验。结果发现，主动脉平滑肌细胞可表达细胞周期素D，其免疫反应产物主要位于细胞核内。内皮细胞损伤后的条件培养基能明显促进平滑肌细胞表达细胞周期素D，同时细胞核增殖实验显示，该条件培养基亦能促进平滑肌细胞的增殖．以上结果提示主动脉平滑肌细胞的增殖与细胞周期素D的表达密切相关，损伤后的内皮细胞可通过促进血管平滑肌细胞表达细胞周期素D而诱导平滑肌细胞增殖。     

内皮细胞脂质过氧化损伤与平滑肌细胞增殖的关系

用联胺作用于培养的人脐静脉内皮细胞引起其脂质过氧化损伤，用抗碱性纤维母细胞生长因子单克隆抗体和抗血小板源性生长因子ＢＢ多克隆抗体进行免疫组织化学染色，以检测内皮细胞暴露于联胺前后和ＰＤＧＦ－ＢＢ的表达，以及其条件培养基对平同细胞内ｂＦＧＦ表达的影响。用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法观察内皮细胞暴露于联胺后其条件培养基对ＳＭＣ是否有增殖活性，结果显示，联胺引起内皮细胞脂质过氧化损伤后，其ＰＤＧＦ－ＢＢ和ｂＦＧ     

脂质过氧化诱导培养的内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α和血管细胞粘附分子1

为了解脂质过氧化损伤能否诱导内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白１α和血管细胞粘附分子１ｍＲＮＡ,将培养的内皮细胞随机分为实验组（在培养液中分别加入１μｍｏｌ／Ｌ、５μｍｏｌ／Ｌ及１０μｍｏｌ／Ｌ联胺）和对照组（不加联胺）。用地高辛随机引物标记的人巨噬细胞炎性蛋白１α和血管细胞粘附分子１ｃＤＮＡ探针与各组内皮细胞进行核酸原位杂交。用异硫氰酸胍法提取各组细胞的总ＲＮＡ,与上述探针进行斑点杂交。原位杂交显示,     

天然及氧化型低密度和极低密度脂蛋白诱导培养的内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1 α和血管细胞粘附分子

为探讨天然及氧化修饰脂蛋白对培养的内皮细胞MIP-1α及VCAM-1mRNA表达的作用，取正常人新鲜血液，用超速梯度离心法分离出LDL和VLDL后，加Cu2+使之氧化，成为OX-LDL和OX-VLDL。培养人脐静脉内皮细胞(EC)，待其汇合后分别加入LDL、OX-LDL、VLDL、OX-VLDL，使其终浓度为25μg／m1，对照组不加脂蛋白。培养24h后，收集EC，用异硫氰酸胍法提取其总RNA，用地高辛标记的MIP-1α和VCAM-1cDNA探针进行斑点杂交。结果显示，培养的EC能表达MIP-1α和VCAM-1mRNA，当其暴露于LDL和VLDL后，其MIP-1α和VCAM-1mRNA表达轻度增加，而当EC暴露于OX-LDL和OX-VLDL后，其MIP-1αmRNA表达水平明显增高，分别为对照组的3．2倍和2．5倍；VCAM-1mRNA的表达分别为对照组的2．6倍和2．17倍。提示脂蛋白，特别是氧化修饰的脂蛋白，可促进EC表达MIP-1α和VCAM-1mRNA，在动脉内膜单核细胞的募集中起重要作用。     

联胺诱导内皮细胞PDGF─BB和bFGF表达及其条件培养基对平滑肌细胞增生活性的研究

联胺诱导内皮细胞ＰＤＧＦ─ＢＢ和ｂＦＧＦ表达及其条件培养基对平滑肌细胞增生活性的研究夏春枝，邓仲端，李丽珠，翟智玲（武汉同济医科大学病理学教研室，４３００３０）正常动脉壁内环境的稳定依赖于动脉壁细胞之间特别是内皮细胞（ＥＣ）和平滑肌细胞（ＳＭＣ）之间...     

内皮细胞脂质过氧化损伤增强主动脉平滑肌细胞表达细胞周期素D

为探讨细胞周期素Ｄ在主动脉平滑肌细胞中的表达规律，揭示动脉粥样硬化中平滑肌细胞的增殖机制，在培养在兔主动脉平滑肌细胞中分别加入了同程度的内皮细胞损伤后的条件培养在２４ｈ分别收集各组的平滑肌细胞，进行免疫组织化学染色和细胞核的增殖试验，结果发现，主动脉平滑肌细胞可表达细胞周期素Ｄ，其免疫反应产物主要位地细胞核内，内皮细胞损伤后的条件的培养基能量产滑有细胞表达细胞促进平滑肌细胞的增殖，以上结果提示主动     

天然及氧化型低密度和极低密度脂蛋白诱导培养的内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α和血管细胞粘附分子1

为探讨天然及氧化修饰脂蛋白对培养的内皮细胞 MIP- 1α及 VCAM- 1m RNA表达的作用 ,取正常人新鲜血液 ,用超速梯度离心法分离出 L DL 和 VL DL 后 ,加 Cu2 使之氧化 ,成为 OX- L DL 和 OX- VL DL。培养人脐静脉内皮细胞 (EC) ,待其汇合后分别加入 L DL、OX- L DL 、VL DL、OX- VL DL,使其终浓度为 2 5 μg/ ml,对照组不加脂蛋白。培养 2 4h后 ,收集 EC,用异硫氰酸胍法提取其总 RNA,用地高辛标记的 MIP- 1α和 VCAM- 1c DNA探针进行斑点杂交。结果显示 ,培养的 EC能表达 MIP- 1α和 VCAM- 1m RNA,当其暴露于 L DL 和 VL DL 后 ,其 MIP- 1α和 VCAM- 1m RNA表达轻度增加 ,而当 EC暴露于 OX- L DL 和 OX- VL DL 后 ,其 MIP- 1α m RNA表达水平明显增高 ,分别为对照组的 3.2倍和 2 .5倍 ;VCAM- 1m RNA的表达分别为对照组的 2 .6倍和 2 .17倍。提示脂蛋白 ,特别是氧化修饰的脂蛋白 ,可促进 EC表达 MIP- 1α和 VCAM- 1m RNA,在动脉内膜单核细胞的募集中起重要作用     

天然及氧化型低密度和检低密度脂蛋白诱导培养的内皮细胞 …

为探讨天然及氧化修饰脂蛋白对培养的内皮细胞ＭＩＰ－１α及ＶＤＭ－１ｍＲＮＡ表达的作用，取正常人新鲜血液，用超速梯度离心法分离出ＬＤＬ和ＶＬＤＬ后，加Ｃｕ＾２＋使之氧化，成为ＯＸ－ＬＤＬ和ＯＸ－ＶＬＤＬ。培养人脐静脉内皮细胞（ＥＣ），待其汇合后分别加放ＬＤＬ、ＯＸ－ＬＤＬ、ＶＬＤＬ、ＯＸ－ＶＬＤＬ，使其终浓度为２５ｕｇ／ｍｌ，对照组不加脂蛋白。培养２４ｈ后，收集ＥＣ，用异硫氰酸胍法提取其总ＲＮＡ，用