约氏疟原虫与伯氏疟原虫侵入期抗原的初步研究

目的　用针对鼠约氏疟原虫(Plasmodiumyoelii)侵入期的8种单克隆抗体,对约氏疟原虫和伯氏疟原虫(P.berghei)侵入期即动合子、裂殖子和子孢子棒状体和表面抗原检测分析。　方法　间接免疫荧光实验(IFA)对各侵入期抗原进行亚细胞结构定位,SDSPAGE及Western印迹对两种鼠疟原虫的不同侵入期进行抗原组分分析。　结果　经上述两种方法检测发现,顶端复合体抗原成分复杂,约氏疟原虫和伯氏疟原虫的棒状体有共同的抗原表位,约氏疟原虫的动合子与其自身的裂殖子有类似成分,也有各自独特的抗原。两种鼠疟原虫动合子抗原有类似成分。约氏疟原虫的子孢子具有与裂殖子、动合子不同的抗原成分。　结论　疟原虫侵入期棒状体和表面抗原在同一虫种的不同侵入期和不同虫种中有共同的抗原表位,也有各自的独特组分。     

探讨肺纤维化时表达单核细胞趋化蛋白-1的主要效应细胞

目的 研究凝血酶对人肺上皮细胞及正常人肺成纤维细胞释放单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的调节作用.方法 人肺支气管上皮细胞(normal human bronchial epithelial cells,NHBE)、人肺癌上皮细胞系A549及正常人肺成纤维细胞(normal human lung fibroblasts,NH-LF)分别培养于96孔或6孔板培养板内,凝血酶诱导4h和24h后,收集上清液及细胞裂解液.ELISA方法检测MCP-1蛋白水平:实时荧光定量RT-PCR技术检测MCP-1 mRNA水平.结果 凝血酶可诱导NHBE、A549及NH-LF细胞释放MCP-1,但NH-LF细胞的MCP-1释放量远远高于NHBE及A549细胞;凝血酶还可诱导NH-LF细胞mRNA表达.结论 人肺成纤维细胞可能是肺内表达MCP-1的主要来源细胞,因此在肺纤维化时可能起重要作用.     

大鼠胰岛B细胞长寿基因SIRT1与转录调节因子FOXO1表达及其相关性研究

目的探讨大鼠胰岛B细胞在衰老进程中长寿基因SIRT1与转录调节因子FOXO1表达的相关性。方法2005年10月至2006年10月,在汕头大学医学院第二附属医院将11只18月龄健康雄性SD大鼠随机分为热量限制(CR)组6只和正常喂养对照组5只,饲养6个月后取胰尾组织,应用免疫组化染色分别检测胰岛中SIRT1、FOXO1和胰岛素表达及分布,衰老相关β-半乳糖苷酶(β-Gal)染色以反映胰岛B细胞衰老情况。结果SIRT1与FOXO1均可表达于胰岛细胞胞浆、胞核中;β-Gal和胰岛素表达于细胞浆中;与对照组大鼠相比,CR组大鼠胰岛SIRT1表达量较多(P<0.05),衰老相关β-Gal染色强度较弱(P<0.01),胰岛素表达量较低(P<0.05),但FOXO1表达量差异无显著性意义(P>0.05),伴随着SIRT1表达增加,FOXO1胞核阳性率明显降低(P<0.01)。结论热量限制诱导了大鼠胰岛B细胞SIRT1蛋白高表达;SIRT1可能通过抑制FOXO1活性而调控胰岛B细胞的衰老,有利于2型糖尿病的防治。     

槲皮素对大鼠卵巢发育和卵巢寿命的影响

背景：研究发现一些植物雌激素可改变生殖系统发育,并可能最终影响生殖衰老的年龄。槲皮素是一种黄酮类物质,具有微弱的雌激素效应,但对卵巢卵泡发育和卵巢衰老进程究竟有无影响还不清楚。 目的：观察槲皮素对大鼠卵巢卵泡发育和卵巢寿命的影响。 方法：健康成年SD 大鼠30只雌雄按2∶1合笼所生的新生雌鼠,分为3组：母鼠灌胃组,对孕10.5 d母鼠槲皮素灌胃,1次/d,直至分娩,取1,2,4 d新生雌鼠;腹腔注射组,对正常出生后12 h内新生雌鼠槲皮素腹腔注射,1次/d,取2,4 d新生雌鼠;空白对照组：不进行任何干预的1,2,4 d新生雌鼠;观察新生鼠卵巢发育情况。另取12月龄雌性大鼠22只,以数字表法随机分为实验组和对照组：实验组用槲皮素灌胃4个月,1次/d;对照组灌胃给予生理盐水。对灌胃前和灌胃期间12月龄雌性大鼠行阴道涂片,观察大鼠动情周期模式;灌胃结束后,计算卵巢和子宫系数,苏木精-伊红染色观察各期卵泡发育情况和卵泡总数变化。 结果与结论：用槲皮素干预1,2 d龄新生大鼠未装配的卵泡均减少,而发育更晚期阶段的卵泡即原始卵泡或发育卵泡有所增加。灌胃前大部分大鼠动情周期已经不规则,用药后,随着大鼠年龄的增长,实验组与对照组显示了相似的动情周期变化：规则的动情逐渐消失,周期变得延长或不规则,灌胃结束时均以不规则动情为主。灌胃4个月后,实验组大鼠卵巢大部分由闭锁卵泡组成,另外可见少许原始卵泡、发育卵泡以及窦状卵泡和黄体,实验组窦状卵泡较对照组增加(P < 0.05),两组卵巢和子宫系数及体质量增加无差异。 提示槲皮素可能具有一定促进卵巢卵泡发育和成熟的作用,但不影响卵巢寿命。     

沉默信息调节蛋白6基因重组腺病毒的构建及其在HepG2细胞中的表达

目的:构建高表达小鼠沉默信息调节蛋白6(SIRT6)基因的重组腺病毒Ad-SIRT6,并在HepG2细胞中验证其表达。方法:通过PCR获取SIRT6基因编码序列,克隆入pAd-Track-CMV载体质粒中;将重组质粒PmeⅠ线性化处理后与腺病毒骨架质粒pAdEasy共同电转入大肠杆菌BJ5183中,获得Ad-SIRT6质粒pAd-SIRT6;用PacⅠ线性化处理后,转染Ad293细胞,包装获得Ad-SIRT6。用该病毒感染HepG2,进行RT-PCR及Western blot验证目的基因的表达。结果:pAd-Track-CMV-SIRT6测序结果正确;pAd-SIRT6转染Ad293后,扩增并纯化得Ad-SIRT6;转染HepG2后,经RT-PCR及Western blot验证,可表达外源性SIRT6基因,且SIRT6总蛋白表达量增高(P<0.05)。结论:成功构建可高表达SIRT6基因的Ad-SIRT6,为进一步研究SIRT6基因在肝糖脂代谢中的作用机制奠定了基础。     

弓形虫速殖子死活快速鉴别的实验研究

目的寻求快速鉴别弓形虫速殖子死活的染色方法。方法用0．1％伊文思蓝、0．4％台盼蓝和0．5％溴酚蓝三种染液分别对死、活弓形虫速殖子进行染色。结果前二种染液均能使死亡弓形虫速殖子在1min内着色,活虫则不着色;后一种染液能使活动弓形虫速殖子在1min内着色,死虫则不着色。结论3种染液染色均可快速鉴别弓形虫速殖子死活。     

能量限制和高能量培养对HepG2细胞SIRT7表达的影响

目的观察能量限制(CR)、高能量[包括高糖(HG)、高脂(HP)]培养基对HepG2细胞SIRT7表达的影响,为进一步研究SIRT7的功能及其在相关代谢疾病中的作用机制提供线索。方法采用RT-PCR、Westernblotting等方法检测在不同培养条件下HepG2细胞SIRT7的表达水平。结果与HG[mRNA:(0.3001±0.09661)、蛋白质:(0.2435±0.01240)]培养基相比,CR和HP均上调HepG2细胞SIRT7的mRNA转录水平[(0.4185±0.07617)、(0.4443±0.04717)]和蛋白质表达水平[(0.3300±0.04769)、(0.7834±0.045937)],差异有统计学意义(P<0.05);且CR与HP相比,后者中SIRT7mRNA转录水平和蛋白质表达水平更高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SIRT7可能参与肝糖和脂代谢调节,影响脂肪肝的形成。     

阴道毛滴虫Rab11鸟苷三磷酸酶eDNA克隆和序列分析

目的 近年研究表明Rab11鸟苷三磷酸酶在调节各种真核细胞的膜转运通道中发挥着重要作用。但是，对于原生动物毛滴虫膜转运系统的研究仍甚少。本研究旨在克隆和分析阴道毛滴虫Rabll鸟苷三磷酸酶基因，以便进一步探讨其功能。方法 使用SMART cDNA文库构建试剂盒构建阴道毛滴虫cDNA表达文库，用生物信息学进行TvRab11同源分析，鉴定TvRab11基因，用PCR方法扩增基因组DNA，TA克隆TvRab11 cDNA、测序及序列分析。结果 在分离出的cDNA克隆中发现一个Rab11鸟苷三磷酸酶同源基因。该cDNA序列长710bp，读码框含636bp，推测蛋白质序列具211个氨基酸。序列分析表明该基因系Rab11亚家族的同源基因，其推测肽链与拟南芥Rab11c的同源性晟高（一致性60％，相似性79％），与人类Rab11b次之（一致性58％，相似性78％）。该氨基酸序列拥有Rab鸟苷三磷酸酶家族的所有保守结构域和特异性Rab结构域（RabF1-5）。进化树分析也表明该基因系Rab11的同源基因。序列分析还显示该基因的基因组DNA序列与cDNA序列完全一致．提示该基因无内含子。结论分析表明该基因是阴道毛滴虫Rab11鸟苷三磷酸酶同源基因，其功能有待进一步研究。     

三种库蚊核糖体DNA第二内转录间隔区(ITS2)序列测定与系统进化分析

对广东省野外采集的库蚊属中2个亚属中的3种库蚊,褐尾库蚊Culex fuscanus(Lutzia、路蚊亚属)、二带喙库蚊Cx.bitaeniorhynchus和致倦库蚊Cx.pipiens quinquefasciatus(Culex、库蚊亚属)进行核糖体DNA第二内转录间隔区(ITS2)序列测定,并与GenBank中已知库蚊属中路蚊亚属、库蚊亚属、新库蚊亚属和黑蚊亚属的11种和伊蚊属1种蚊虫的ITS2进行序列分析。结果表明:褐尾库蚊与同亚属的非洲蚊种(Culex tigripes)亲缘关系最近,基因同源性为65.27%;库蚊亚属的二带喙库蚊与伪杂鳞库蚊基因同源性为75.87%;致倦库蚊与尖音库蚊复合组内淡色库蚊的基因同源性97.13%。在所选库蚊中,黑蚊亚属与伊蚊最接近,其次是新库蚊亚属和路蚊亚属的蚊虫。在库蚊属4个亚属中,路蚊亚属与库蚊亚属有更近的亲缘关系,这也印证了库蚊亚属某些幼虫与路蚊亚属幼虫具有相似习性的遗传基础。系统进化关系分析结果与经典分类学分类系统接近一致,但库蚊亚属的进化可能更具多样性。     

阴道毛滴虫Rab6鸟苷三磷酸酶同源基因的cDNA克隆和序列分析

Rab鸟苷三磷酸酶是细胞膜转运机制的关键调节分子,与原虫的分泌功能密切相关。本研究旨在克隆和分析阴道毛滴虫Rab6鸟苷三磷酸酶同源基因,以便进一步探讨其功能。作者从阴道毛滴虫cDNA表达文库中分离出2个Rab6鸟苷三磷酸酶同源基因的cDNA克隆,其中1个cDNA序列长658对碱基,读码框含597对碱基,推测蛋白质序列具198个氨基酸。序列分析表明该氨基酸序列与Rab6a蛋白亚家族的同源性最高。另一cDNA序列长764对碱基,读码框含657对碱基,推测蛋白质序列具218个氨基酸。序列比对分析显示该氨基酸序列与Rab6b蛋白有较高的同源性。2个氨基酸序列都拥有Rab鸟苷三磷酸酶家族的所有保守结构域、特异性RabF结构域和典型的异戊烯化结构域。进化树分析提示毛滴虫的这2个基因系Rab6家族的同源基因,在进化上更接近原虫和单细胞的酵母Rab6亚家族。序列分析还显示这2个基因都无内含子,其基因组DNA序列与其cDNA序列完全一致。