Circular RNA PPP1CC promotes Porphyromonas gingivalis-lipopolysaccharide-induced pyroptosis of vascular smooth muscle cells by activating the HMGB1/TLR9/AIM2 pathway

ObjectivePorphyromonas gingivalis (Pg) plays a critical role in the occurrence and development of atherosclerosis. Lipopolysaccharide from Pg (Pg-LPS) could lead to pyroptosis of vascular smooth muscle cells (VSMCs) and induce instability of atherosclerotic plaque. Therefore, pyroptosis of VSMCs could promote the process of atherosclerosis. However, the exact mechanism of Pg-LPS-induced pyroptosis of VSMCs is unclear.MethodsWe determined pyroptosis and expression of interleukin (IL)-1β and IL-18 in VSMCs using 4′,6-diamidino-2-phenylindole staining and ELISA after stimulation by Pg-LPS. We established a knockdown plasmid containing the circular (circ)RNA PPP1CC and transfected it into VSMCs. Luciferase assays were performed to reveal the association between microRNAs miR-103a-3p and miR-107 and circRNA PPP1CC.ResultsStimulation of Pg-LPS led to pyroptosis of VSMCs. Knockdown of circRNA PPP1CC relieved the Pg-LPS-induced pyroptosis of VSMCs and suppressed the expression of HMGB1, TLR9, AIM2, and cleaved caspase-1. Luciferase assays showed that PPP1CC directly targeted and competitively adsorbed miR-103a-3p and miR-107, weakening the inhibitory effect of these microRNAs on the expression of HMGB1.ConclusionKnockdown of circRNA PPP1CC relieved Pg-LPS-induced pyroptosis of VSMCs. Pyroptosis of VSMCs appears to promote atherosclerosis and may represent a novel therapeutic target for its treatment.     

口腔白斑病组织中环状RNA的差异表达谱分析

目的探讨环状RNA(circRNA)在口腔白斑(oral leukoplakia,OLK)组织及正常口腔黏膜组织(nor?mal oral mucosal,NOM)中表达谱的差异及临床意义。方法采用高通量测序技术检测6对OLK和NOM组织中差异表达circRNA,利用qRT?PCR验证所筛选的10个circRNA在6对OLK与NOM组织中的表达情况。通过酶耐受实验和sanger测序验证目标circRNA成环情况,对20对OLK与NOM组织中目标circHLA?C进行qRT?PCR验证。分别使用UCSC基因组浏览器对circHLA?C进行可视化分析;利用GO和KEGG富集分析对差异表达circRNA进行功能分析;TargetScan、MiRanda预测目标circRNA下游miRNA、mRNA,并构建竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)网络。结果测序数据显示OLK组织中共有366个显著差异表达的cir?cRNA,包括65个上调和301个下调circRNA。经qRT?PCR验证,筛选的10个circRNA中有7个表达结果同测序一致。且经酶耐受和sanger测序验证,确定上调的circHLA?C是具有反式剪接位点的真正的circRNA。相关性分析显示circHLA?C与OLK的异常增生程度呈正相关。ROC曲线分析提示circHLA?C具有诊断OLK的潜在价值,且具有较高的准确性和特异性。结论circRNA在OLK组织中异常表达,上调的circHLA?C表达可能与OLK异常增生程度相关,对OLK诊断具有指导价值。     

非编码RNA调控晶状体上皮细胞死亡在白内障中的作用

非编码RNA（ncRNA）是不编码蛋白质的RNA,其中包括微小RNA（miRNA）、长链非编码RNA（lncRNA）和环状RNA（circRNA）等。ncRNA可以广泛参与细胞增殖、分化、生长以及细胞死亡等重要的生物学过程。ncRNA的异常表达可导致晶状体上皮细胞发生细胞凋亡、焦亡以及自噬异常,使得晶状体透明度下降,从而导致白内障的发生。本文主要对8种miRNA（miR-125b、let-7a、miR-4328、miR-34a、miR-133b、miR138、miR-23b-3p、miRNA-30a）、9种lncRNA（lncRNA MIAT、lncRNA ANRIL、lncRNA PLCD3-OT1、lncRNA GPX3-AS、H19、TUG1、lncRNA PVT1、lncRNA ALB、KCNQ1OT1）以及一种circRNA （circHIPK3）调控晶状体上皮细胞死亡在白内障发生发展中的作用机制最新进展予以综述。     

环状RNA研究进展及临床应用

环状RNA(circular RNA,circRNA)是一类产生于RNA剪切过程的封闭环形RNA分子,主要由外显子和(或)内含子构成,广泛存在于真核细胞内,具有稳定性、物种保守性以及细胞、组织特异性.环状RNA参与细胞内RNA调控网络,与疾病的发生和发展密切相关,可能成为新型的生物标记物及治疗靶点.近年来,关于环状RNA产生、调控、生物学特性、功能及其与疾病的关系等均取得了较大的研究进展.本文综述了真核细胞内源性环状RNA的研究进展及其与疾病的关联.     

circUTRN24通过肝星状细胞自噬介导胆道闭锁肝纤维化

目的 探究胆道闭锁中circUTRN24与自噬途径的关联,以及是否通过自噬参与胆道闭锁的肝纤维化过程。方法 通过RT-qPCR、Western blot分别检测BA组和对照组的肝组织中circUTRN24以及自噬相关蛋白的表达,并进行相关性分析。在细胞水平,通过慢病毒转染使人肝星状细胞系LX-2过表达circUTRN24,Western blot检测转染前后自噬相关蛋白Beclin-1、LC3以及HSC活化相关指标α-SMA、COL-Ⅰ的表达水平。结果 胆道闭锁患儿肝组织中circUTRN24以及自噬相关蛋白Beclin-1的表达明显高于对照组,并且呈正相关关系。过表达circUTRN24的LX-2细胞中自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ及HSC活化相关指标α-SMA、COL-Ⅰ均明显升高。结论 circUTRN24可能通过调控肝星状细胞自噬过程促进胆道闭锁肝纤维化的进展。     

hsa_circ_0001785在乳腺癌患者血清中的表达及临床意义研究

［摘要］　目的　探讨hsa_circ_0001785在乳腺癌患者血清中的表达及临床意义。方法　选择2021年9月至2022年3月广州医科大学附属第五医院甲乳外科收治的乳腺癌患者43例（乳腺癌组）,乳腺良性肿瘤患者54例（良性肿瘤组）,健康体检者45名（健康对照组）。采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测其血清hsa_circ_0001785的相对表达量,并进行三组间比较。分析hsa_circ_0001785表达水平与乳腺癌患者临床病理特征的关联性。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析hsa_circ_0001785诊断乳腺癌的效能。结果　乳腺癌组血清hsa_circ_0001785表达水平显著高于良性肿瘤组和健康对照组（P<0.05）,良性肿瘤组和健康对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。ROC曲线分析结果显示,血清hsa_circ_0001785具有诊断乳腺癌的应用价值（AUC=0.780,P<0.05）,且诊断效能优于癌胚抗原（CEA）、癌抗原125（CA125）。乳腺癌患者血清hsa_circ_0001785的表达水平与其年龄、肿瘤类型、TNM分期、淋巴结受累、远处转移、雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、人类表皮生长因子受体2（HER2）均无显著关联（P>0.05）。结论　hsa_circ_0001785在乳腺癌患者血清中高表达,有作为乳腺癌诊断分子标志物的潜力。     

不同基因作为竞争性内源RNA参与膀胱癌调控的研究进展

竞争性内源RNA（competing endogenous RNA,ceRNA）是一种新的转录后RNA相互调控机制,越来越多的研究发现长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）、环状RNA（circular RNA,circRNA）和假基因（pseudogenes）可以与微小RNA（microRNA,miRNA）竞争,影响靶RNA的稳定性或翻译,从而调控基因表达。近年来,不同基因作为ceRNA参与膀胱癌调控的研究已引起学者的广泛关注。为此,本文综述了lncRNA、circRNA和假基因作为ceRNA在膀胱癌中作用的研究进展,以及不同基因作为ceRNA调控膀胱癌的信号转导通路。从ceRNA分类的角度综述各类ceRNA在膀胱癌发生发展过程中的研究进展。     

circKDM4C对肺癌细胞增殖和迁移侵袭影响

目的本研究探讨circKDM4C在肺癌中的表达及生物学功能。方法通过qRT-PCR检测circKDM4C在肺癌细胞系A549、H1299、H1650、H1975及肺正常上皮细胞BEAS-2B中的表达。siRNA转染A549和H1975,沉默circKDM4C,获得4组细胞系,分别为A549si-circKDM4C组和其对应的对照组A549si-NC,H1975si-circKDM4C组和其对应的对照组H1975si-NC。CCK-8和Transwell assay检测4组细胞的增殖、迁移和侵袭情况。流式细胞术检测细胞周期。蛋白质印迹法检测细胞周期抑制蛋白(p53、Rb、p21)和上皮间质转化(EMT)相关蛋白(N-cadherin、E-cadherin、Vimentin)的表达。circKDM4C在肺正常上皮细胞与在各肺癌细胞中的表达进行差异分析,A549si-circKDM4C组与A549si-NC组,H1975si-circKDM4C组与H1975si-NC组在细胞增殖、迁移、侵袭、细胞周期及相关蛋白表达水平进行差异分析,差异分析采用t检验。结果 circKDM4C在肺癌细胞A549、H1299、H1650和H1975的相对表达量分别为0.52±0.04、0.26±0.03、0.31±0.03和0.48±0.05,均低于正常肺上皮细胞BEAS-2B的表达(1.00±0.09),t值分别为19.21、16.29、31.14和25.41,均P<0.01。转染siRNA后,与对照组A549si-NC组和H1975si-NC组相比相比,A549si-circKDM4C组(t=7.45,P=0.023)和H1975si-circKDM4C组(t=16.33,P=0.027)中的circKDM4C相对表达量均降低,差异有统计学意义。转染si-circKDM4C后,A549si-circKDM4C组和H1975si-circKDM4C组细胞细胞增殖能力提高。Transwell迁移结果显示circKDM4C沉默后,细胞相对迁移数目A549si-circKDM4C组(2.71±0.20)比A549si-NC组(1.02±0.08)高,t=17.67,P=0.009;H1975si-circKDM4C组(3.02±0.13)同样比H1975si-NC组(1.01±0.05)高,t=26.27,P=0.004。Transwell侵袭结果显示侵袭相对细胞数量A549si-circKDM4C组(2.54±0.15)比A549si-NC组(1.04±0.10)高,t=21.62,P=0.007;H1975si-circKDM4C组(3.73±0.32)比H1975si-NC组(1.02±0.10)高,t=25.74,P=0.002。circKDM4C沉默后,促进了细胞周期,降低了周期抑制蛋白p53、Rb和p21的表达;此外N-cadherin和Vimentin表达增加,E-cadherin表达降低,促进了肺癌细胞上皮间质转化。结论 circKDM4C抑制了肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭为肺癌患者提供了潜在的治疗靶点。