虫草素通过ERK1/2、Ezrin和Akt信号通路抑制胆囊癌细胞SNU-308的增殖和迁移

目的:探讨虫草素对胆囊癌细胞SNU-308增殖和迁移的影响及其分子机制。方法:MTT法和平板集落形成实验检测不同浓度虫草素对胆囊癌SNU-308细胞活力和集落形成能力的影响;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞凋亡和自噬相关蛋白以及Akt、ERK1/2和Ezrin蛋白的磷酸化水平;免疫荧光染色法检测细胞内LC3的表达水平;划痕愈合实验和Transwell实验检测虫草素对胆囊癌细胞迁移能力的影响;划痕实验检测Akt抑制剂和ERK1/2抑制剂及Ezrin基因沉默对细胞迁移能力的影响。结果:虫草素可显著抑制胆囊癌细胞的活力和集落形成能力(P0.05)。流式细胞术结果显示,虫草素可诱导胆囊癌细胞凋亡(P0.05)。Western blot结果显示,虫草素处理后Bcl-2表达降低,Bax、细胞色素C(Cyto C)、Fas、Fas L和cleaved caspase-3蛋白水平升高,自噬标识蛋白LC3-II/I比例和beclin 1表达上调(P0.05)。免疫荧光染色结果显示,虫草素处理后SNU-308细胞胞浆中LC3荧光颗粒的数量明显增多。划痕实验和Transwell实验结果显示虫草素可抑制细胞迁移(P0.05)。虫草素明显抑制Akt、ERK1/2和Ezrin蛋白的磷酸化水平(P0.05)。Ezrin基因沉默及Akti-1/2和GDC-0994均可抑制胆囊癌细胞的迁移作用(P0.05)。结论:虫草素通过诱导凋亡和自噬抑制胆囊癌细胞的增殖和迁移,其机制可能与调控ERK1/2,Ezrin和Akt信号通路有关。     

大孔树脂联用硅胶柱色谱法富集制备人工蛹虫草中虫草素的工艺研究

目的优选一种简单快捷分离制备人工蛹虫草中虫草素的工艺。方法首先考察7种不同极性的大孔树脂,优选出最佳吸附树脂,然后对树脂富集虫草素的吸附量、洗脱剂浓度、洗脱体积等工艺进行考察,最后对硅胶柱洗脱剂比例等条件进行考察,优选出最佳的硅胶柱分离洗脱剂。结果根据实验考察数据得出最佳工艺条件:大孔树脂型号为HPD-D,树脂对虫草提取液(0.1 mg/m L)的吸附量为2树脂床体积(2BV),用20%乙醇,洗脱体积为3BV可将虫草素洗脱完全,硅胶柱洗脱剂为乙酸乙酯∶丙酮(2∶1),分离制得虫草素晶体纯度约为93.60%。结论优选出的人工蛹虫草中虫草素的富集分离工艺简单快捷,适用于大规模生产制备虫草素。     

RP-HPLC法测定北虫草发酵培养物中虫草素的含量

目的:建立测定北虫草发酵培养物中虫草素含量的方法。方法:采用反相高效液相色谱法。色谱柱为DIAMONSIL-C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水-甲醇(5∶90∶5),流速为0.8mL·min-1,柱温为40℃,检测波长为259nm。结果:虫草素检测浓度在2.56～51.20μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.9998);平均回收率为98.35%,RSD=2.71%(n=6)。结论:本方法灵敏、快速、准确,适用于北虫草发酵培养物中虫草素的检测。     

虫草活力素对大鼠慢性支气管哮喘模型气道重塑作用初探

目的对虫草活力素（简称虫草）在大鼠支气管哮喘（简称哮喘）模型气道重塑中的作用及相关机制进行初步探讨。方法 50只Wister大鼠[6～8周龄,（200±20）g],随机数字表法分为阴性对照组（A）、慢性哮喘单纯模型组（B）（卵清白蛋白系统致敏和反复激发）、慢性哮喘＋虫草50mg/kg治疗8周组（C）、慢性哮喘＋布地奈德（BUD）8周治疗组（D）及慢性哮喘＋BUD联合虫草8周治疗组（E）。肺组织切片HE染色观察病理变化并检测气道管壁厚度,采用免疫组织化学法检测气道转化生长因子β1（TGF-β1）表达水平,应用逆转录PCR法检测肺组织A2a腺苷受体（A2aAR）mRNA表达。数据统计采用ANOVA检验进行组间分析,Mann-Whitney检验进行组内两两比较,Spearman等级相关分析。结果①HE染色显示所有药物干预组较单纯模型组炎症细胞浸润、平滑肌肥厚及黏膜肺组织水肿等炎症表现明显减轻,以D和E组最为明显;②5组气道管壁厚度依次分别为（9.89±2.09）、（21.72±3.16）、（14.94±1.96）、（12.29±2.75）和（12.25±2.32）μm2/μm,F=31.37,P〈0.0001,所有药物干预组气道壁厚度均高于对照组（C组、D组和E组与A组比较后的P值分别为0.0001、0.0524、0.0524）,且低于单纯模型组（C组、D组和E组与B组比较后的P值均〈0.0001）,差异有统计学意义,C组气道壁较D组和E组增厚,差异有统计学意义（P值分别为0.0232和0.0147）;③5组TGF-β1表达强阳性率分别为（2.08±1.63）%、（29.37±5.08）%、（12.30±3.26）%、（10.78±3.35）%及（7.43±2.84）%,F=86.45,P〈0.0001,所有药物干预组TGF-β1蛋白表达均高于对照组（C组、D组和E组与A组比较后的P值均〈0.0001）,且低于单纯模型组（C组、D组和E组与B组比较后的P值均〈0.0001）,差异有统计学意义;E组较C组的蛋白表达有统计学意义下降（P=0.0052）;④5组肺组织A2aARmRNA表达相对强度依次为（0.35±0.06）、（0.27±0.10）、（0.52±0.07）、（0.24±0.05）及（0.47±0.08）,F=26.46,P〈0.0001,C组和E组A2aARmRNA表达高于A组（P值分别为0.0001及0.0007）、B组（P值分别为0.0002及0.0003）和D组（P值均〈0.0001）,差异有统计学意义,D组表达低于A组,差异有统计学意义（P=0.0003）;⑤所有大鼠支气管壁厚度与气道TGF-β1蛋白表达存在正相关（r=0.80,P〈0.01）,而C组大鼠肺组织A2aARmRNA表达和TGF-β1蛋白表达呈负相关（r=-0.68,P=0.03）。结论虫草对哮喘模型的气道重塑具有一定的改善作用,其机制可能通过增加慢性哮喘模型大鼠肺组织A2aARmRNA转录,抑制气道TGF-β1的生成,从而减轻气道重塑,且虫草与糖皮质激素联合应用对于降低TGF-β1的表达具有潜在协同作用。     

腺苷和虫草素在北虫草子实体各部位中的分布及含量

目的研究腺苷和虫草素在北虫草子实体各部位中的分布和总含量。方法用RP-HPLC法分别测定北虫草子实体头部、中部、底部及全部子实体中腺苷和虫草素含量。结果①1号样腺苷和虫草素的含量顺序为头部>底部>中部;总量顺序为中部>头部>底部。2号样腺苷分布规律没有明显变化,但各部位虫草素含量均有所改变,顺序为底部>中部>头部,总量顺序仍为中部>头部>底部。②两种样品的腺苷总含量没有明显差异,但2号样虫草素含量几乎是1号样的2倍。结论北虫草子实体各部位中腺苷和虫草素的分布以及总含量均有明显不同。     

虫草素联合谷氨酰胺对LPS诱导的脓毒症大鼠炎症失衡及肝肺病理变化的影响

目的　研究虫草素（cordycepin,Cop）联合谷氨酰胺（glutamine,Gln）对脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导的脓毒症大鼠炎症失衡和肝肺病理变化的影响及其可能机制。 方法　将大鼠按体重随机分为5组：对照组、模型组（LPS组）、LPS+Cop组、LPS+Gln组和LPS+Cop+Gln组,腹腔注射LPS（5 mg/kg）诱导建立脓毒症大鼠模型。ELISA检测外周血中炎症因子IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-10的含量;HE染色观察肝肺组织的病理损伤情况;TUNEL染色观察肝肺组织的细胞凋亡情况;Western blot检测肝肺组织中Caspase-3表达水平及NF-κB p65的磷酸化情况 。 结果　LPS+Cop组、LPS+Gln组和LPS+Cop+Gln组均能逆转LPS诱导的促炎因子（IL-6、TNF-α、IL-1β）的高表达和抗炎因子（IL-10）的低表达（P<0.05）,减轻病理损伤,抑制细胞凋亡（P<0.05）,降低凋亡蛋白Caspase-3高表达（P<0.05）,下调NF-κB p65的磷酸化水平（P<0.05）。 结论　在LPS诱导的脓毒症大鼠模型中,虫草素联合谷氨酰胺能有效改善其炎症失衡和肝肺病理变化。     

蝉拟青霉中虫草素提取液的稳定性及酸碱溶解度探究试验

目的：研究虫草素提取液的稳定性及酸碱溶解度,为虫草素的进一步开发利用奠定基础。方法利用75％乙醇、45℃超声波浸提虫草素的提取液对虫草素的稳定性、在酸碱溶液中的溶解度等进行了研究。结果虫草素对光的稳定性较差,光照可导致其分解;对温度的稳定性不高;维生素中,VA 不利于虫草素的保存,VB、VC、VE均有利于虫草素的保存;随着溶液碱性的增强虫草素的溶解度略微降低,溶液酸性越强虫草素越不易溶解。结论通过对虫草素提取液稳定性的初步研究,以期为虫草素的进一步开发利用奠定基础。     

Cordycepin decreases activity of hippocampal CA1 pyramidal neuron through membrane hyperpolarization

Cordycepin (3′-deoxyadenosine) is the main functional component of Cordycepins militaris, a renowned traditional Chinese medicine, which has been shown to possess anti-tumor, anti-inflammatory, anti-diabetic and neuro-protective effects. However, the effect of cordycepin on the central nervous system (CNS) remains unclear. In this study, the effects of cordycepin on neuronal activity were investigated on the CA1 pyramidal neurons in rat hippocampal brain slices using a whole-cell patch clamp technique. Our results revealed that cordycepin significantly decreased the frequency of both the spontaneous and evoked action potential (AP) firing. While AP spike width, the amplitude of fast after hyperpolarization (fAHP), and membrane input resistance were not altered by cordycepin, the neuronal membrane potential was hyperpolarized by cordycepin. Collectively, these results demonstrate that cordycepin reduces neuronal activity by inducing membrane hyperpolarization, indicating that cordycepin may be a potential therapeutic strategy for ischemic and other excitotoxic disorders.     

实验性鼠脑缺血时脑细胞线粒体酶活性的变化──人工虫草菌丝的抗线粒体损害作用

本文对鼠脑缺血后脑细胞线粒体柠檬酸合成酶（ＣＳ），琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）活性进行测定，并用人工虫草菌丝对各缺血时间组进行治疗，结合电镜对各实验组线粒体形态进行观察，发现鼠脑缺血早期即有线粒体形态学改变及ＣＳ、ＳＤＨ活性降低。应用人工虫草菌丝后，线粒体ＣＳ、ＳＤＨ活性有所增高。而线粒体形态学恢复的变化不大。揭示线粒体酶活性变化先于形态学改变。