透明质酸钠对大鼠成肌细胞增殖和分化的影响

目的 研究透明质酸钠对成肌细胞增殖和分化的影响。方法 采用酶消化法将新生SD大鼠骨骼肌组织分离、纯化、原代培养及传代培养；取第3代成肌细胞，分别加入浓度为0．05%、0．1％及0．2％的透明质酸钠溶液作为生长培养基行体外培养为实验A、B及C组，加入常规生长培养基为对照D组，观察各组成肌细胞增殖情况，并采用细胞计数及MTT法绘制生长曲线。另选择0．1%透明质酸钠融合培养基行体外成肌细胞培养，常规融合培养基作对照，观察透明质酸钠对成肌细胞分化功能的影响。结果A、B及C组成肌细胞增殖表现相似，2d时进入对数生长期，4d时均达顶峰；D组成肌细胞于3d时进入对数生长期，5d时细胞数倍增，6d时达顶峰。MTT法所测吸光度（A）值的变化反映成肌细胞的增殖情况，与细胞计数的结果一致，以B组细胞增殖作用最明显，B组A值在2～8d时均高于C、D组（P〈0．05），8d时高于A组（P〈0．05）。0．1％透明质酸钠融合培养基中的成肌细胞融合率较低且上升缓慢，7d时融合率最高，为11．7％；常规融合培养基成肌细胞融合率于6d时达到峰值，约为35．0%。结论 透明质酸钠与成肌细胞的细胞相容性较好，可以作为良好的成肌细胞培养基。     

与甲壳素缝线体外复合培养大鼠成肌细胞株L6细胞的形态学

目的：探讨甲壳素作为骨骼肌组织工程支架材料的可行性。 方法：实验于2002-06／12在南方医科大学应用解剖学研究所完成。大鼠成肌细胞株L6与甲壳素医用缝合线体外复合培养。倒置相差显微镜下观察细胞的形态和排列情况。并分别在体外复合培养的第1，2，3，4，5，6天，取出细胞支架复合体，扫描电镜观察成肌细胞的形态和排列情况。 结果：①扫描电子显微镜观察显示，甲壳素医用可吸收缝线的表面比较粗糙。②倒置相差显微镜下可见大鼠L6细胞与甲壳素制备的医用可吸收缝合线间黏附良好，细胞沿缝线排列呈现串珠样，并可以见到细胞聚集现象。③扫描电子显微镜观察，接种24h后，细胞主要为圆球形，随后细胞迁移、伸展、并见突起；第3天，成肌细胞主要为梭形，并见融合趋势；4d后，细胞沿材料纵轴排列并相互融合，并见肌小管样结构形成及细胞外基质分泌。 结论：甲壳素具有作为支架以构建组织工程化骨骼肌的潜能，支架的平行排列有助于工程化骨骼肌纤维良好方向性的形成。     

MyoD肌形成作用机制研究进展

MyoD是成肌调节因子家族四成员之一,具有碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)结构域,能把多种类型细胞转化为成肌细胞,能促使成肌细胞融合为肌管.在肌肉特异基因转录调控中,MyoD起着总开关的作用,作用于许多基因的启动子区或增强子区,在其他因子的辅助下,促进它们的转录活性.胰岛素样生长因子-Ⅱ、转录共激活因子p300/CBP、核因子90、核激素受体复合激活子、干扰素相关发育调节因子1等能促进MyoD对基因的转录调控;抑制素2、肌源性生长抑素、组蛋白甲基转移酶Suv39h1、DNA结合抑制因子Id、肿瘤坏死因子-α等可抑制MyoD对基因的转录调控及其活性,使MyoD能适应内环境和生理功能的需要.MyoD主要通过泛素蛋白酶体通路降解,以适应分子通路调节的需要.该文就MyoD肌形成机制的最新进展作一综述.     

平行结构支架材料对大鼠成肌细胞α-肌动蛋白的影响

目的：根据大鼠成肌细胞骨骼肌α-肌动蛋白mRNA的表达变化，初步探讨借助支架材料的有序排列构建具有理想方向性组织工程化骨骼肌的可行性。方法：将医用可吸收缝合线平行折叠并制备成类圆柱体状，与大鼠成肌细胞L6体外复合培养。以18s RNA为内参照，运用半定量RT-PCR检测大鼠成肌细胞骨骼肌α-肌动蛋白mRNA在体外培养早期的变化。结果：随着体外培养时间的延长，大鼠骨骼肌α-肌动蛋白的mRNA表达水平逐渐升高，并于体外培养第4d，维持在相对稳定的水平。结论：大鼠成肌细胞与具有平行结构支架材料体外复合培养早期，骨骼肌α-肌动蛋白的基因表达与骨骼肌再生有一定程度的吻合。     

大鼠肌卫星细胞成肌分化的体外实验研究

目的探讨肌卫星细胞体外分化和烟碱型乙酰胆碱受体表达。方法采用胰蛋白酶消化SD乳鼠的骨骼肌卫星细胞，差速贴壁法纯化，进行体外培养，观察卫星细胞的分化过程，利用免疫组织化学方法进行鉴定。用银环蛇毒素鉴定细胞表面的烟碱型乙酰胆碱受体，并用乙酰胆碱刺激细胞观察其收缩功能。结果体外培养的肌卫星细胞分化为成肌细胞，融合成肌管。α-sarcomeric actin.skeletal myosin 和 desmin t抗体鉴定为阳性。ACh可刺激卫星细胞形成的肌管收缩。卫星细胞无明显的N—ACh受体表达；而卫星细胞形成的肌管经分化培养后N—ACh受体呈局部块状聚集。结论肌卫星细胞分化后形成的肌管具有收缩功能，并且在分化过程中逐渐合成烟碱型乙酰胆硅罟仕     

基因修饰细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的电生理评价

目的：采用神经电生理检查方法,观察逆转录病毒载体介导脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）基因修饰成肌细胞对损伤脊髓的治疗作用。方法：３０只ＳＤ大鼠在Ｔ９水平制成脊髓横断损伤模型,并随机分为基因细胞组（Ａ组）、成肌细胞组（Ｂ组）及损伤对照组（Ｃ组）,每组１０只大鼠。术后３个月,采用皮质体感诱发电位（ＣＳＥＰ）和运动诱发电位（ＭＥＰ）等电生理检测技术,观察轴突是否有再生及其神经功能恢复程度。结果：（１）Ａ组     

MyoD基因诱导大鼠心脏成纤维细胞分化为成肌细胞的实验研究

目的：探讨MyoD基因诱导大鼠心脏成纤维细胞分化为成肌细胞的可能性。方法：将MyoD基因重组腺病毒载体转染大鼠心脏成纤维细胞，观察转染后大鼠心脏成纤维细胞形态的变化；用RT-PCR和Western blot方法检测MyoD和肌细胞生成素的表达；免疫组化检测骨骼肌肌球蛋白和结蛋白的表达。结果：MyoD基因转染后的大鼠心脏成纤维细胞形态和排列方式发生明显变化；RT-PCR可检测出转染后细胞表达MyoD；Western blot结果表明转染后细胞表达MyoD和肌细胞生成素；免疫组化检测骨骼肌肌球蛋白和结蛋白表达均为阳性。结论：MyoD基因可诱导体外培养的大鼠心脏成纤维细胞分化为成肌细胞，为进一步研究MyoD对心肌损伤的修复作用奠定了基础。     

体外培养的成肌细胞间隙连接蛋白43的表达及变化

为探索成肌细胞增殖分化时间隙连接蛋白(connexin)43的表达和变化，建立乳鼠成肌细胞体外培养，采用0．1％胶原酶消化法分离细胞及非连续密度梯度离心法纯化细胞，以电镜及免疫组织化学法鉴定成肌细胞；采用Western blot法检测分化过程中connexin 43的变化。结果表明，成肌细胞体外培养可以表达connexin 43，但随着细胞的融合分化，其表达量下降。结论：体外培养的成肌细胞间隙连接蛋白表达减少可能影响该细胞作为种子细胞进行心脏移植的效果。     

天麻素对大鼠骨骼肌细胞化学损伤的保护

背景:现代药理学研究表明,天麻的主要成分天麻素可以恢复大脑皮质兴奋与抑制过程间的平衡失调,产生镇静、安眠和镇痛等中枢抑制作用。目的:观察天麻素对L6大鼠成肌细胞化学损伤的保护作用。方法:用H2O2建立L6大鼠成肌细胞的化学损伤模型。DMEM培养液制备不同浓度的天麻素(1.562500,0.781250,0.390625g/L)预处理保护组的L6大鼠成肌细胞24h,然后用0.1mmol/LH2O2孵育80min,同时设置增殖组(用不同浓度的天麻素预处理,但不经H2O2处理),模型组(仅用H2O2处理),阳性对照组(仅有L6细胞悬液),阴性对照组(只有DMEM培养液),对照组既不用天麻素预处理,也不用H2O2孵育。结果与结论:MTT检测显示,增殖组和保护组L6大鼠成肌细胞存活率明显高于模型组;DAPI荧光标记细胞核为蓝色,模型组细胞荧光度较弱,且数目显著少于保护组;苏木精-伊红染色显示保护组的细胞核形状较规则,细胞轮廓较清晰,而模型组破损细胞较多;Bax和Bcl-2免疫荧光细胞化学结果表明,模型组促凋亡基因bax表达明显高于保护组,而抑制凋亡基因bcl-2的表达量完全相反;流式细胞仪检测显示保护组的凋亡率显著低于模型组(P<0.05)。提示天麻素对保护大鼠骨骼肌细胞化学损伤有显著效果。     

香烟提取物通过减少HDAC2表达诱导小鼠C2C12成肌细胞衰老

目的:探讨香烟提取物(CSE)能否引起小鼠C2C12成肌细胞衰老,并研究成肌细胞衰老与组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)的关系。方法:培养C2C12细胞株,分化为成熟成肌细胞,观察CSE干预对成肌细胞衰老和HDAC2表达的影响,采用real-time PCR和Western blot方法分别检测HDAC2 mRNA和蛋白的表达;β-半乳糖苷酶染色检测衰老细胞的百分率。结果:MTT法测定最佳CSE浓度与干预时间分别为60 m L/L和24 h。CSE干预后β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数增加,同时伴有HDAC2 mRNA和蛋白表达的减少。四溴苯三唑(TBB)在促进HDAC2 mRNA和蛋白表达的同时,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数减少;用HDAC2的特异性阻滞剂丙戊酸抑制HDAC2 mRNA和蛋白的表达时,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数增加。结论:香烟提取物可通过减少小鼠C2C12成肌细胞HDAC2的表达促进细胞老化。