两种物理疗法干预对受损周围神经的修复与再生作用

背景：周围神经纤维再生环境的改变，可以促进神经纤维的再生速度，加速神经功能的恢复。物理疗法可改善损伤部位局部微循环的流速，增进和刺激创伤的恢复进程，因此，对不同物理疗法的选择和照射剂量的控制，可否促进神经纤维再生速度?目的：观察不同物理方法照射对大鼠受损神经纤维再生的促进作用。设计：随机分组对照的动物实验。单位：北京大学医学部人体解剖学与组织胚胎学系实验室。对象：实验于2001—09／2002—09在北京大学医学部人体解剖学与组织胚胎学系实验室完成，雄性SD大鼠15只，体质量185～220g。干预：建立大鼠坐骨神经损伤模型后，随机分为3组。生物频谱组5只，红外线照射组5只，分别给予相应的物理照射。损伤对照组5只不做照射。3组动物分别在手术后第14天，取手术侧坐骨神经段切片，以光镜下观察受损神经纤维溃变率的减少间接了解物理疗法对神经受损后的保护功能。主要观察指标：神经断裂处及靠近脊髓侧4点(1，2，3，4mm)和远离脊髓侧4点(1，2，3，4mm)受损处神经纤维的溃变率。结果：15只大鼠均进入结果分析。①生物频谱组和红外线照射组的坐骨神经纤维与对照组在断裂处的远离脊髓侧神经纤维溃变率无差异(均为100％)。②在断裂处生物频谱组和红外线组的神经纤维溃变率明显降低(68％，89％)，对照组最高(100％)。③3组靠近脊髓侧4点神经纤维溃变率呈递减趋势，即越靠近脊髓侧溃变率越低；并且生物频谱组最低，红外线组次之，对照组最高。结论：受损周围神经修复后，选用物理疗法辅助治疗可使溃变的神经纤维数量减少，有促进和加快神经纤维恢复的作用，其中生物频谱照射法效果更好些。     

甲基强的松龙对嗅鞘细胞移植治疗受损视网膜神经节细胞的早期保护效应

目的:观察注射甲基强的松龙对嗅鞘细胞移植治疗受损视网膜节细胞的早期保护作用。方法:实验于2005-09/2006-09在北京大学医学部神经解剖实验室完成。实验动物分组:成年雄性SD大白鼠55只随机取出7只为正常对照组,不进行任何实验处理;其余48只为实验组,在手术显微镜下经动物的左侧眶上缘暴露视神经,然后将视神经鞘顺向划开,在距眼球后壁2mm处将视神经剪断。将实验组动物随机分成4组,每组12只:①损伤组。②静脉注射甲基强的松龙组,动物实施术后30min给予一次性尾静脉注射甲基强的松龙注射液(90mg/kg)。③嗅鞘细胞移植组,动物术后移植嗅鞘细胞组织层。④给药后嗅鞘细胞移植组,动物术后30min给予一次性尾静脉注射甲基强的松龙注射液(90mg/kg),然后移植嗅鞘细胞组织层。术后21d麻醉下处死各组大鼠。实验评估:通过视神经逆行荧光标记和蛋白免疫印迹方法观察视网膜神经节细胞存活状况以及热休克蛋白27表达情况。结果:55只SD大鼠均进入结果分析。①视网膜神经节细胞的存活数量:甲基强的松龙静脉注射组高于损伤组[(16.525±9.557),(9.889±5.585)个/视野,P<0.1],给药后嗅鞘细胞移植组明显高于甲基强的松龙静脉注射组和嗅鞘细胞移植组[(28.881±13.660),(16.525±9.557),(13.513±6.840)个/视野,P<0.1,<0.01]。②各组视网膜神经节细胞热休克蛋白27的表达:甲基强的松龙静脉注射组高于损伤组,给药后嗅鞘细胞移植组明显高于甲基强的松龙静脉注射组和嗅鞘细胞移植组。结论:早期注射甲基强的松龙使受损视网膜神经节细胞存活率升高,并使热休克蛋白27表达上调,同时亦表现出了对移植嗅鞘细胞移植治疗受损视网膜神经节细胞的显著保护效应。     

嗅神经鞘细胞和自体坐骨神经移植修复受损视神经

背景:有研究已初步证明了甲泼尼龙对受损视网膜节细胞的早期保护作用。目的:观察甲泼尼龙联合嗅神经鞘细胞和自体坐骨神经移植大鼠受损视神经纤维及其髓鞘的形态学及计数变化。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-09/2006-03于北京大学医学部神经解剖实验室完成。材料:选取成年雄性SD大鼠40只,取其中4只做形态学正常对照。方法:其余36只大鼠按随机数字表法分为6组,即视神经损伤模型组、甲泼尼龙组、嗅神经鞘细胞移植组、嗅神经鞘细胞移植 甲泼尼龙组、坐骨神经移植组、坐骨神经移植 甲泼尼龙组,每组6只。主要观察指标:取视神经,制作冰冻切片,移植后14,21d分别从各组切片中随机抽取10张载玻片,对生物素标记的葡聚糖胺染色的视神经纤维及甲苯胺蓝染色的视神经髓鞘进行形态学观察,电镜下对视神经纤维髓鞘进行计数。结果:顺行追踪剂生物素标记的葡聚糖胺在视神经中的染色结果主要表现为嗅神经鞘细胞移植 甲泼尼龙组、坐骨神经移植 甲泼尼龙组,与视神经损伤模型组相比,神经纤维排列较整齐,发生中晚期溃变的纤维比例较小。移植后14,21d,甲泼尼龙组视神经纤维髓鞘数量均显著高于视神经损伤模型组(P<0.05,0.01)。坐骨神经移植 甲泼尼龙组均显著高于坐骨神经移植组(P<0.05)。嗅神经鞘细胞移植 甲泼尼龙组均显著高于嗅神经鞘细胞移植组(P<0.05)。结论:形态学结果表明嗅神经鞘细胞和自体坐骨神经移植与甲泼尼龙的联合作用能激发并增强受损中枢神经的自我保护及修复作用,对视神经纤维及其髓鞘溃变速度有延缓作用。     

环境温度变化对去卵巢大鼠下丘脑视上核和室旁核c-Fos蛋白表达的影响

目的:以不同温度刺激去卵巢大鼠,观察下丘脑视上核(SO)和室旁核(PVN)细胞c-Fos蛋白表达的变化,探讨更年期妇女血压、渗透压以及体温调节功能异常的可能机制.方法:将去卵巢(OVX)和假手术(Sham)大鼠分别置于4,10,25,33和38℃5个温度等级的培养箱内,2 h后取脑.采用免疫组织化学法检测各实验组SO和...     

Nogo受体(N-20)在大鼠视神经损伤后视网膜的表达

观察Nogo受体(NgR)在Wistar大鼠视神经(ON)损伤后视网膜各层的表达变化及分布规律,为Nogo蛋白抑制中枢神经再生的理论提供形态学依据。本实验各组动物均采用眶内眼球后2 mm ON切断术,术后动物分别存活3 d和7 d后取视网膜固定、冰冻后做水平切片,用免疫组织化学的方法观察NgR的表达情况。结果显示:NgR在正常对照组视网膜内3层有表达;在切断ON后实验各组有强烈表达;各组在损伤ON和移植神经组织后存活3 d时也有强烈表达,至7 d时表达有所下降。以上结果表明:NgR在大鼠ON损伤后视网膜的表达位于节细胞层、神经纤维层和内网层;其表达程度与移植物的种类有关,并可随存活时间的延长而下降。     

大鼠嗅球和鼻腔嗅粘膜成鞘细胞的形态学研究

目的：观察大鼠嗅神经成鞘细胞在嗅球和嗅粘膜的分布及其形态学结构特征，研究其与中枢神经再生的关系。方法：Luxol固蓝染色、Mallory染色和NGFRp75免疫组织化学染色结合透射电镜观察。结果：在嗅球纤维层的成鞘细胞随神经纤维呈纵向排列，在嗅小球层的成鞘细胞则围绕着嗅小球环行排列。在嗅粘膜的成鞘细胞位于柱状上皮深方，沿基底膜分布。成鞘细胞的胞体为细长梭形，有较长的突起，细胞核呈圆形或椭圆形。在嗅小球周围或嗅粘膜内的成鞘细胞呈NGFRp75免疫反应阳性。在电镜下，嗅球成鞘细胞的纵断面上可见其胞体呈长梭形，细胞核为不规则形，核仁清晰。在胞体的周围有大量的平行神经纤维纵向排列，在放大的横断面上，可见在1个成鞘细胞的细胞核周围有数根神经纤维被胞质包裹在一起。结论：嗅成鞘细胞是一种特殊的胶质细胞，分布于嗅球的纤维层、嗅小球层和嗅粘膜内。嗅神经成鞘细胞的胞体细长，有较长突起，其轴系膜紧密包裹成束的无髓神经纤维。     

甲基强的松龙上调受损视网膜节细胞内Hsp27蛋白的表达

目的研究甲基强的松龙（MP）上调热休克蛋白（Hsp27）蛋白对受损中枢神经元自我保护及修复机制的激发和增强作用,为进一步促进受损中枢神经元存活和纤维再生创造有利的条件.方法建立中枢神经损伤模型（视神经眼眶内切断术）,经或未经MP治疗的术后动物分别存活4、7 14、21、28 d,取视网膜,切片,Nissl染色观察视网膜节细胞（RGCs）形态和存活数量的变化,用免疫组织化学染色的方法观察节细胞层中Hsp27的表达（检测A值）.用SAS软件对数据进行统计学处理.结果 MP治疗组可见受损RGCs在7、14 d的存活数量增多,有统计学意义（P＜0.01）,在受损RGCs表达增多的Hsp27表达更加强烈（检测A值）.RGCs存活率与A值在各个时间点的变化趋势相似.结论 MP可使具有保护作用的Hsp27表达上调,从形态学角度提示了MP可能激发并增强受损中枢神经的自我保护及修复机制.     

莉芙敏对去卵巢大鼠下丘脑视前区5-HT1AR和5-HT2AR表达的影响

目的:观察去卵巢大鼠应用黑升麻异丙醇提取物--莉芙敏(ICR)治疗1-4周后,免疫组化方法检测5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)和5-HT2AR在大鼠下丘脑视前区表达的变化情况,为莉芙敏缓解围绝经期潮热症状的机制研究提供形态学依据.方法:雌性大鼠分为假手术组(Sham组)、去卵巢组(OVX组)、OVX后戊酸雌二醇治疗...     

嗅神经鞘细胞和自体坐骨神经移植修复受损视神经

背景：有研究已初步证明了甲泼尼龙对受损视网膜节细胞的早期保护作用。 目的：观察甲泼尼龙联合嗅神经鞘细胞和自体坐骨神经移植大鼠受损视神经纤维及其髓鞘的形态学及计数变化。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2005-09/2006-03于北京大学医学部神经解剖实验室完成。 材料：选取成年雄性SD大鼠40只，取其中4只做形态学正常对照。 方法：其余36只大鼠按随机数字表法分为6组，即视神经损伤模型组、甲泼尼龙组、嗅神经鞘细胞移植组、嗅神经鞘细胞移植+甲泼尼龙组、坐骨神经移植组、坐骨神经移植+甲泼尼龙组，每组6只。 主要观察指标：取视神经，制作冰冻切片，移植后14，21 d分别从各组切片中随机抽取10张载玻片，对生物素标记的葡聚糖胺染色的视神经纤维及甲苯胺蓝染色的视神经髓鞘进行形态学观察，电镜下对视神经纤维髓鞘进行计数。 结果：顺行追踪剂生物素标记的葡聚糖胺在视神经中的染色结果主要表现为嗅神经鞘细胞移植+甲泼尼龙组、坐骨神经移植+甲泼尼龙组，与视神经损伤模型组相比，神经纤维排列较整齐，发生中晚期溃变的纤维比例较小。移植后14，21 d，甲泼尼龙组视神经纤维髓鞘数量均显著高于视神经损伤模型组(P < 0.05，0.01)。坐骨神经移植+甲泼尼龙组均显著高于坐骨神经移植组(P < 0.05)。嗅神经鞘细胞移植+甲泼尼龙组均显著高于嗅神经鞘细胞移植组(P < 0.05)。 结论：形态学结果表明嗅神经鞘细胞和自体坐骨神经移植与甲泼尼龙的联合作用能激发并增强受损中枢神经的自我保护及修复作用，对视神经纤维及其髓鞘溃变速度有延缓作用。     

脊髓损伤大鼠脊髓及泌尿生殖道caspase-3和nNOS表达的改变

目的：观察SD大鼠脊髓损伤后脊髓及泌尿生殖道凋亡促进因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）和一氧化氮合成酶（nNOS）表达的改变。方法： 成年雄性SD大鼠16只,随机分为对照组（n=8）和脊髓损伤组（n=8）;脊髓损伤组采用改良的重物坠落法（Allen法）制作大鼠T9-T10脊髓节段不完全损伤模型。分别行caspase-3免疫组化及nNOS免疫组化染色,用半定量方法评价正常及脊髓损伤大鼠脊髓、膀胱壁及阴茎组织表达caspase-3和nNOS的改变情况。结果：脊髓损伤后大鼠脊髓内nNOS和caspase-3均表达增强（P<0.001）,而膀胱壁及阴茎组织内caspase-3表达增强（P<0.001）,nNOS表达减弱（P<0.001）。结论：脊髓损伤大鼠脊髓及泌尿生殖道表达caspase-3和nNOS发生了改变,但并非同步,机制各有不同。