Notch信号通路在小儿哮喘患者外周血单个核细胞的表达及其临床意义

目的初步探讨Notch信号通路相关分子在小儿哮喘患者中的表达及其临床意义。方法实时荧光定量聚合酶链反应和流式细胞术,分别从基因转录和蛋白表达水平检测20例小儿哮喘患者和20例健康对照者的外周血单个核细胞(PBMC)中Notch1、Notch2、Notch3、Notch4以及Notch的配体Jagged1、Jagged2、DLL1(Delta-like1)、DLL3(Delta-like3)、DLL4(Delta-like4)的表达。结果小儿哮喘患者PBMC中的Notch1、Notch3、Jagged1、Jagged2、Delta1的mRNA和蛋白的表达均明显高于健康对照组(P<0.01),Notch2、Notch4、Delta3和Delta4的基因和蛋白的表达在两者中未见明显差异(P>0.05)。结论 Notch信号通路的表达在小儿哮喘发病过程中有显著改变,可能参与小儿哮喘的发生发展,为深入研究小儿哮喘的发病机制提供思路。     

RDW与RPR在原发性胆汁性胆管炎病理分期严重程度判定中的价值

目的探讨红细胞分布宽度(RDW)及RDW与血小板计数的比值(RPR)在原发性胆汁性胆管炎病理分期严重程度判定中的价值。方法选取该院2015年2月至2017年11月收治的84例原发性胆汁性胆管炎(PBC)患者(患者组)与30例同期健康体检者(对照组)。并根据PBC患者的肝穿刺及组织病理结果将其分为早期组与进展组。比较患者组与对照组、早期组与进展组的RDW、RPR、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、清蛋白(ALB)、谷氨酰转移酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)以及总胆红素(TBIL)。结果患者组的RDW、RPR、AST、ALT、GGT、ALP和TBIL指标均显著高于对照组(P<0.05),ALB水平显著低于对照组(P<0.05)。PBC进展组RDW、RPR、AST、ALT、GGT、ALP和TBIL显著高于早期组,ALB水平显著低于早期组(P<0.05)。结论检测RDW与RPR有利于为PBC严重程度的判定提供有效参考信息,临床价值高。     

TLR3途径诱导多发性骨髓瘤细胞株增殖抑制和凋亡机制研究

目的 研究聚肌苷酸胞苷酸( polyI:C)激活的TLR3通路对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的增殖抑制和凋亡相关的生物学作用及相关机制.方法 RPMI8226细胞培养于RPMI 1640培养基,以不同浓度的polyI:C与该细胞作用不同的时间.收集细胞后,分别利用CCK-8和流式细胞术分析其增殖抑制和凋亡情况,同时抽提总RNA,相对定量PCR测定TLR3通路相关基因表达.结果 PolyI:C对RPMI8226的增殖抑制效应随着作用剂量的增加和时间的延长而增加,24h:12.30％±2.04％、22.50％±2.20％、37.90％±1.30％;48h:17.80％±1.52％、29.60±0.85％、45.80％±1.68％;72 h:25.10％±1.01％、34.60％±1.27％、60.50％±2.08％,差异有统计学意义(P＜0.05).浓度为50、100、200μg/ml的polyl:C与RPMI8226作用48 h后,细胞凋亡率分别为5.60％±1.06％、8.71％±1.06％、13.93％±1.17％,差异具有统计学意义(P＜0.05),而且随着polyI:C作用浓度增加,RPMI8226细胞中TLR3和TRIF mRNA相对于内参β-actin的表达均显著增高,TLR3:1.41±0.10、2.24±0.16、4.08±0.13;TRIF:1.07±0.16、1.97±0.13、3.56±0.19,各组间差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 TLR3途径可以有效地抑制多发性骨髓瘤细胞增殖,并且诱导其凋亡,对多发性骨髓瘤的生物治疗具有潜在应用价值.     

树突状细胞与自身免疫的关系

树突状细胞（DC）是一类专职抗原递呈细胞（APC），通过传导不同的调节信号调节T细胞应答或耐受。因此，DC很有可能成为免疫治疗的有力工具和靶点。近来很多数据表明DC在启动自身免疫应答中发挥重要作用。通过分析啮齿类动物和人体自身免疫病中的DC表型和DC—T细胞的相互作用可以阐明自身免疫病的部分发病机制，并且可以通过调节异常DC的功能达到免疫治疗的目的。     

原发性胆汁性肝硬化患者三种免疫效应分子的表达及临床意义

目的研究颗粒溶素（granulysin，GNLY）、颗粒酶B（granzymeB，GrB）及穿孔素（perforin，PF）三种免疫效应分子在原发性胆汁性肝硬化（primarybiliarycirrhosis，PBC）外周血中的表达并探讨其与PBC的关系。方法以正常健康人和肝炎后肝硬化患者为对照，用实时荧光定量RT—PCR方法检测PBC患者PBMC中GNLY、GrB及PFmRNA的含量。用ELISA方法检测PBC患者血清中GNLY表达情况并分析其与肝功能的相关性。结果PBC组GNLY、GrBmRNA平均拷贝数显著高于健康对照组（P〈0．01）和疾病对照肝炎后肝硬化组（P〈0．001），而PFmRNA与对照组相比差异无统计学意义。PBC患者血清中的GNLY蛋白表达显著高于健康对照组（P〈0．01）和乙型肝炎后肝硬化组（P〈0．01）。血清中GNLY浓度与血清GGT、AIJP的浓度呈正相关（P〈0．01）。结论PBC患者GNLY、GrBmRNA和含量显著高于对照组，同时ELISA方法检测出PBC患者血清中GNLY蛋白含量显著高于对照组，GNLY、GrB表达与PBC的发病存在一定的关联性，为临床PBC病情的监控提供可靠依据。     

M2抗体重组人源靶抗原二联体在原发性胆汁性肝硬化患者中的检测及应用

目的 利用重组抗原BCOADA-E2和PDC-E2的二联体（BP），检测PBC患者血清中的M2抗体并探讨其临床意义。方法 经Ni—NTA亲和柱纯化重组表达的BP融合蛋白，分别建立免疫印迹法（IBT）和酶链免疫吸附（ELISA）法检测60份PBC患者血清，以60份其他肝病患者、60份自身免疫病患者、80例正常人血清为对照组。结果 经常规试剂盒检测为M2（＋）的60份患者血清，利用重组抗原检测阳性53例，阴性7例，阳性率为88．3％；经常规试剂盒检测为M2（-）的60份自身免疫病患者血清、60份其他肝病患者和80例正常人血清，利用重组抗原检测为M2（-）。结论 利用重组抗原BP检测M2抗体敏感性较高。对临床辅助诊断PBC提供一定的手段。     

HOTAIR基因多态性与结直肠癌发病风险

目的探讨HOTAIR基因rs920778、rs4759314、rs1899663多态性位点与结直肠癌(colorectal cancer,CRC)易感性的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法对200例CRC患者和200例健康人对照组HOTAIR基因rs920778、rs4759314和rs1899663多态性位点进行基因分型,并通过SHEsis在线软件构建单倍型。结果 rs1899663基因型频率在病例组和健康人对照组间差异有统计学意义(P=0.009)。与GG基因型相比,该位点TT基因型携带者与CRC发病风险降低相关(OR=0.36,95%CI:0.15～0.84,P=0.019),而GT/TT基因型携带者与CRC的风险降低亦存在相关性(OR=0.56,95%CI:0.37～0.85,P=0.006)。结论 HOTAIR基因rs1899663位点的T等位基因与CRC的发生率降低相关,rs920778和rs4759314位点的多态性与CRC的遗传易感性无关。     

急性乙型肝炎患者外周血单个核细胞颗粒溶素mRNA定量测定及临床意义

目的应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测乙型肝炎（简称乙肝）患者外周血单个核细胞（PBMC）中颗粒溶素（GNLY）mRNA的表达,探讨GNLY基因表达水平与急性乙肝的关系。方法实时荧光定量RT-PCR分别检测40例急性乙肝患者及100名正常对照的PBMC的GNLY基因表达水平,同时检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平。结果急性乙肝患者发病期mRNA表达显著高于正常对照组（P〈0.01）,恢复期GNLY基因表达与正常对照组差异无统计学意义（P〉0.05）。乙肝患者GNLYmRNA与血清ALT、AST呈正相关。结论实时荧光定量RT-PCR检测GNLY mRNA的表达准确可靠。患者外周血GNLY基因表达水平与急性乙肝的发生发展存在一定的相关性。     

定量RT-PCR检测PBC患者外周血中颗粒溶素的基因表达水平

目的建立检测人颗粒溶素(granulysin,GNLY)mRNA含量的实时荧光定量RT-PCR的方法,并测定PBC患者外周血单个核细胞(PBMC)中GNLY的基因表达水平,探讨GNLY基因表达水平与原发性胆汁性肝硬化(PBC,primarybiliary cirrhosis)发生发展的关系。方法基于TaqMan荧光探针技术,构建质粒pET28a-GNLY,作为定量模板,建立实时荧光定量RT-PCR方法。用此方法测定了60例PBC、60例乙型肝炎肝硬化及60例健康对照者外周血中GNLY mRNA的含量。结果PBC患者GNLY mRNA的表达范围为5.35×107-4.61×109拷贝/μg RNA;健康对照者为9.28×105-7.32×107拷贝/μg RNA。PBC组GNLY mRNA的平均拷贝数显著高于健康对照组(P<0.01)和疾病对照乙型肝炎肝硬化组(P<0.001)。结论成功建立了人GNLY基因表达含量的荧光定量检测方法,PBC患者GNLY mRNA的含量显著高于健康对照组,GNLY表达与PBC的发生发展存在一定的关联性。     

性病门诊男性人乳头瘤病毒基因型与临床诊断相关性分析

目的:调查性病门诊男性感染人乳头瘤病毒(HPV)及其基因亚型分布并分析与临床主要症状之间的关联,为防治男性HPV感染提供参考。方法:回顾性分析2016年2月至2018年2月就诊于常熟地区性病门诊患者602例,采集外生殖器脱落细胞标本,提取核酸进行扩增,以基因芯片法检测HPV基因亚型。统计分析患者临床诊断症状类型与基因型分布之间的关系等。结果:性病门诊男性HPV阳性率48.2%(290/602),其中低危型占47.2%(137/290)。多重感染占30.0%(87/290)。主要流行的基因型依次为6、11、39、52等。临床症状主要表现为病毒性疣占43.1%(125/290),皮疹占41.0%(119/290)。病毒性疣患者中主要为低危型的6、11占60.0%(75/125),显著高于高危型的15.0%(15/125)(P0.05);皮疹患者低危型占38.7%(46/119),与高危型38.7%比例相同;包皮/阴茎头炎患者中低危型感染显著高于高危型(56.0%vs 32.0%,P0.05);无症状/体检中高危型占84.6%(11/13),显著高于高低危混合型15.4%(2/13)和低危型0(0/13)(P0.05)。结论:常熟市性病门诊男性HPV感染阳性率48.2%,以低危型单一感染为主。低危型感染症状表现为病毒性疣与包皮/阴茎头炎等;无症状健康体检中以高危型居多。