TRAIL胸外段基因克隆及其表达与纯化

目的；克隆TNF相关的诱导凋亡配体胞膜外段基因（the extracellular region of the human TRAIL cDNA,TPAILex），构建表达载体并在大肠杆菌DH5α中高效表达有生物学活性的TRAIL蛋白胞膜外段。方法：抗CD3McAb刺激正常人外周血淋巴细胞，用RT－PCR、巢式－PCR方法从活化的淋巴细胞中获得人TRAIL基因及其胞膜外段cDNA，并克隆到pGEM-T Easy载体中，DNA测序鉴定，将TRAIL的胞膜外段基因插入表达载体pGEX-2T，构建重组表达质粒pGEX/TRAILex，用IPTG诱导表达TRAIL蛋白的胞膜外段，GST－Agarose 4B层析柱纯化GST－TRAILex融合蛋白，Western-blot鉴定纯化产物。结果：抗CD3 McAb能诱导正常人外周血核细胞TRAIL的高表达，成功地克隆了TRAIL胞膜外段基因，构建了重组表达载体pGEX/TRAILex，IPTG诱导后得到高效表达的TRAIL蛋白胞膜外段，经12％SDS－PAGE分析，可观察到一分子量和理论值相符（约54kD）的诱导表达。Kodak软件分析表达GST－TRAIL胞膜外段融合蛋白的表达量占菌体蛋白总量的28％，进一步分析证实TRAIL蛋白的胞膜外段主要以可溶性的形式表达，用GST－Agarose 4B层析柱纯化超声破菌后的上清，每升细菌培养液可得到9.8mg纯度的95％以上的GST－Tex。Western-blot结果证实54kD的表达带可与鼠抗TRAIL McAb起特异性反应。结论：成功地克隆了人TRAIL基因，并应用基因工程技术在大肠杆菌中高效表达人TRAIL蛋白的胞膜外段，为进一步研究TRAIL的功能及其在肿瘤生物治疗中的应用奠定了基础。     

肿瘤坏死因子—α在伴有血管病变的Ⅱ型糖尿病患者胰岛素抵抗发生中的意义

为探讨肿瘤坏死因子—α在伴有血管病变的Ⅱ型糖尿病患者胰岛素抵抗发生中的意义,本文采用放射免疫法检测了40例Ⅱ型糖尿病患者血清肿瘤坏死因子—α水平,比较其在伴有或无血管并发症的Ⅱ型糖尿病患者中的差别并分析其与胰岛素敏感性的关系。结果显示,伴有血管并发症的Ⅱ型糖尿病患者血清肿瘤坏死因子—α含量明显高于无血管并发症的Ⅱ型糖尿病患者,且与胰岛素敏感性呈负相关。提示肿瘤坏死因子—α在胰岛素抵抗发生中起重要作用。     

外科应试要点--颈部疾病(第14单元)

1　甲状腺功能亢进的外科治疗(1 )分类 :分为原发性甲状腺功能亢进 (伴有突眼 ) ,继发性甲状腺功能亢进 ,高功能腺瘤三类。(2 )临床表现 :①多食易饿、消瘦、心悸、怕热、多汗、易激动、手指震颤、失眠 ;②甲状腺弥漫肿大 ,可有震颤和血管杂音 ;③基础代谢率增高。脉率和脉压是判断病情的重要标志。(3)外科治疗手术适应证 :①中、重度原发性甲亢、继发性甲亢、高功能腺瘤 ;②有压迫症状的甲亢 ;③服药或放疗后复发的甲亢。(4)甲状腺手术概念 :甲状腺大部切除术 ,一般切除甲状腺组织 80 %～ 90 %。手术中要注意 :结扎上、下动脉 ;保护好喉返…     

化疗药物渗漏引起组织损伤的防治

化学治疗是肿瘤治疗的重要手段之一，化疗药物用药的主要途径是静脉给药，而静脉给药又与护士有着直接关系。化疗药物局部毒性反应可引起周围组织的反应，包括静脉炎、静脉变色、疼痛和斑与药物外渗的组织坏死，给病人增加了痛苦，近年来护理工作对此进行了防治方面的研究，介绍如下。     

喉癌及下咽癌术后并发应激性溃疡的监测与护理

应激性溃疡发生于大手术后、严重创伤、重症败血症和心脑肾功能受损等应激状态下。有报道，咽喉部手术后应激性溃疡发病率为13％，一旦发生出血，如不及时处理和治疗，病死率达35％～65％。我科自1998～2003年行喉癌及下咽癌手术9例术后发生应激性溃疡，由于我们密切监测，及时处理，患均痊愈出院，现将护理措施报告如下。     

石棉肺的免疫发病机制

石棉肺发病机理的全过程迄今尚未完全明了,以往提出有纤维机械刺激作用的物理学说和化学学说。随着免疫学的发展与应用,许多学者发现石棉肺患者存在细胞免疫(CMI)及体液免疫(HI)障碍,从而认为石棉肺同免疫病理损伤有密切关系。现将有关进展简要介绍如下。 1.细胞因子介导的病理效应肺泡巨噬细胞(AM)通过释放多种活性介质(表1)在右棉引起肺部炎症与纤维化过程中起了非常重要的作用。对AM的研     

结肠非低张双重造影的应用

本文应用结肠非低张双重对比灌肠造影诊断结肠病变,这是一种简单的方法。本文根据150例的实践径验介绍了技术、病人的准备、有关造影剂的问题和正常所见,并通过具体的病例阐述了结肠非低张双重对比检查的临床应用价值,并指出了本法的不足之处。     

多药耐药相关蛋白检测及其临床治疗意义

目的 肿瘤多药耐药相关蛋白检测对肿瘤临床治疗的意义.方法 5种多药耐药相关蛋白抗体,免疫组化S-P法.结果 28例恶性肿瘤的检测结果没有同一性,差异性P＜0.01,具有2种以上耐药例数为25例,89.3%.结论 病理科开展对恶性肿瘤进行多药耐药相关蛋白的检测,对临床开展肿瘤的个体化治疗有非常重要的意义.     

秋季养肺事半功倍

在夏天,人们喝冷饮,穿衣着装都尽量清凉,使得脾胃虚寒,脾受凉必然会对肺有影响。中医有"肺为娇脏"的说法,指肺怕冷又怕热,怕干又怕湿。如果您没有注意养肺,在秋季就要对肺更加关爱,因为在秋季养肺,可以得到事半功倍的效果。     

血清肿瘤学标志物与胃癌的诊断

血清肿瘤学标志物是指由恶性肿瘤细胞合成、分泌并释放入血和（或）体液中的生物活性物质，包括酶、激素、蛋白质、代谢产物等。其产生、变化与恶性肿瘤，尤其是胃癌的生长扩散及发生发展密切相关。近年来，随着免疫学、生物化学、分子生物学及其相应技术的发展，血清肿瘤标志物研究也得到了深化和突破，成为鉴别胃良恶性疾病研究中的一个方向，一个新靶点。血清标志物由于取材容易，病人容易接受，检测方法简单，重复性好，易于动态监测，已成为当今胃癌检查的一种重要手段。本文就血清肿瘤标志物在胃癌诊断方面的研究作一综述。