脂肪间充质干细胞的体外诱导和成血管作用

目的 研究在体外诱导脂肪间充质干细胞(ADMSCs)向内皮细胞分化、在立体培养基上的血管形成情况.方法 将传至第三代的ADMSCs用内皮细胞诱导液、Matrigel三维培养基进行诱导培养,对ADMSCs和诱导细胞选用CD31、CD44细胞表面抗原在流式细胞仪检测表达情况,用HE染色、FⅧ-RAg免疫组织化学染色及倒置显微镜、透射电镜等进行观察鉴定.结果流式细胞仪上检测ADMSCs的表达为CD44阳性、CD31阴性,诱导的细胞CD31阳性、CD44阴性.诱导细胞14d倒置显微镜下呈铺路石样形态,FⅧ-RAg染色细胞呈阳性,透射电镜下在细胞浆内见到内皮细胞特有标志物Weibel-Palade小体。ADMSCs在Matrigel三维培养基上诱导,24h细胞迁徙成团、有伪足伸出,诱导7d伸出的细胞形成交叉网格状,13d形成较长血管,20d较长血管粗而多、出现小分叉,30d长血管、分叉血管变粗厚;FⅧ-RAg染色后诱导血管亦呈阳性.结论 脂肪间充质干细胞在体外经诱导能向内皮细胞分化、能形成血管,可作为促进组织工程移植物血管化的良好的种子细胞.

Abstract：

Objective To study in vitro induction of adipose-derived mesenchymal stem cells (ADMSCs) into endothelial cells and blood vessel formation on three-dimensional (3D) media． Methods The 3rd passage ADMSCs were induced in vitro into endothelial cells on conditional medium and grew on Matrigel medium． The cell surface antigens CD31 and CD44 were detected with flow cytometric analysis before and after induction． HE staining, FⅧ-RAg immunohistochemical staining, inverted microscope and transmission electron microscope were used for morphological study.Results The expression of CD44 was positive and CD31 negative in ADMSCs in flow cytometric analysis.After induction,CD31 became positive while CD44 was negative． Paving-stone-like cell appearance was seen under inverted microscope 14 days after induction.The cells were FⅧ-RAg positively stained with immunohistological method,and Weibel-Palade body was observed under transmission electron microscope.On Matrigel media,the induced cells migrated in lumping with pseudopodia protrusion after 24 hours,and formed grid structure on the 7th day.Long vasculature was observed on the 13th day,and the vessels branched on the 20th to 30th day.The vessels stained positive for FⅧ-Rag． Conclusions ADMSCs have the potential to give rise to endothelial cells with in vitro induction and to form vessel structure in 3D media.ADMSCs have potential role in vascularized tissue engineering grafting．     

肥胖大鼠血清脂联素水平与血管内皮NF-κB、VCAM-1、ICAM-1关系的研究

目的 建立肥胖大鼠模型,观察肥胖大鼠血清脂联素的变化及动脉血管内皮核因子(NF)-κB、血管内皮细胞黏附分子(VCAM)-1、细胞间黏附分子(ICAM)-1的表达,探讨其在血管病变发生发展中的作用机制.方法 4周龄雄性健康SD大鼠48只,随机分为对照组(18只)和高脂组(30只),给予高脂饲料制备肥胖大鼠模型.8周后,以高脂组大鼠的体质量超过对照组大鼠平均体质量的20%作为肥胖组大鼠.用酶联免疫法检测血清脂联素含量,应用免疫组化技术测定NF-κB、VCAM-1、ICAM-1在血管内皮的表达.结果 高脂组大鼠平均体质量明显高于对照组,(446.82 ± 10.05)g比(365.21 ± 13.20)g,P ＜ 0.01;高脂组中有22只大鼠体质量超过对照组平均体质量20%,作为实验用肥胖大鼠(肥胖组).肥胖组大鼠血清脂联素水平明显低于对照组,(0.61 ± 0.13)ng/ml比(1.00 ± 0.17)ng/ml,P ＜ 0.01,动脉血管内皮NF-κB、VCAM-1、ICAM-1阳性表达显著高于对照组,且肥胖组大鼠血清脂联素水平与血管内皮NF-κB、VCAM-1、ICAM-1表达均呈明显负相关(r ＝ -0.938 ～ -0.891,P均 ＜ 0.001).结论 高脂饮食引起的肥胖可使血清脂联素水平降低,使脂联素对NF-κB的抑制减弱,导致肥胖大鼠血管内皮VCAM-1、ICAM-1表达的增加,从而使动脉血管内膜增厚,血管结构发生改变导致血管疾病的发生.     

红-9-(2-羟基-3-壬基)腺嘌呤对低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉压力和内源性腺苷的影响

目的 观察红-9-(2-羟基-3-壬基)腺嘌呤(EHNA)对低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠肺动脉压力和内源性腺苷水平的影响,了解HPH与内源性腺苷水平的关系.方法　24只SD大鼠随机分为常氧组、低氧组和低氧+EHNA组,每组8只.低氧组和低氧+EHNA组大鼠每天置于含氧体积分数为(100±5) mL·L-1、二氧化碳体积分数<1 mL·L-1的大型玻璃箱中,在缺氧3 d后分别腹腔注射等量9 g·L-1盐水和EHNA(30 mg·kg-1·d-1)连续4 d.常氧组大鼠在自然空气条件下饲养.于实验第8天将大鼠麻醉,右颈外静脉插管,利用四道生理记录仪测定每只大鼠的平均肺动脉压(mPAP);完成压力测量后,左心室取血,采用高效液相色谱仪检测其血浆中腺苷水平.结果 低氧组mPAP水平[(16.50±2.43) mmHg,1 mmHg=0.133 kPa]及内源性腺苷水平[(24.75±3.08) mg·L-1]均显著高于常氧组[(11.25±1.75) mmHg,(11.50±2.05) mg·L-1](Pa＜0.01);低氧+EHNA组内源性腺苷水平[(8.58±1.90) mg·L-1]低于低氧组,而mPAP[(19.64±3.44) mmHg]显著高于低氧组(Pa＜0.01).结论　EHNA导致HPH大鼠肺动脉压力进一步升高,可能与其降低血浆内源性腺苷水平有关.     

2型糖尿病患者血清VEGF与sVCAM-1水平的变化及其临床意义

目的探讨2型糖尿病（type Ⅱ diabetes mellitus,T2DM）血清中血管内皮细胞生长因子（VEGF）与可溶性血管细胞黏附分子-1（sVCAM-1）的水平及其临床意义。结论采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测20例2型糖尿病患者和25例正常人血清VEGF与sVCAM-1水平。结果 2型糖尿病患者血清VEGF和sVCAM-1水平（389.64±54.60）pg/ml和（1443.87±422.33）ng/ml较正常对照组（100.60±22.81）pg/ml和（648.26±173.66）ng/ml明显升高（P〈0.05）。结论 2型糖尿病患者血清VEGF、sVCAM-1含量增高,可能与2型糖尿病的发病机制有关。     

干扰素-γ诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞表达细胞黏附因子-1和干扰素-γ受体α

目的 以体外培养的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMMVECs)为研究对象,探讨干扰素-γ(IFN-γ)对于体外培养的RIMMVECs表达细胞黏附因子-1(ICAM-1)和IFN-γ受体α(IFN-γRα)的影响.方法 体外分离培养RIMMVECs,用不同浓度的IFN-γ对所培养的RIMMVECs进行诱导,通过荧光定量RT-PCR法和流式细胞术,从mRNA和蛋白水平检测活化后的RIMMVECs表达ICAM-1和IFN-γRα的情况.结果 浓度为20 μg/L和40 μg/L的 IFN-γ可以激活RIMMVECs,在mRNA和蛋白水平均能提高ICAM-1的表达,并且6 h时达到高峰;20 μg/L的IFN-γ刺激RIMMVECs后,可使其上调表达IFN-γRα mRNA,但是蛋白表达量却随着刺激时间逐渐降低;而40 μg/L的IFN-γ刺激RIMMVECs 2 h后,IFN-γRα mRNA 达到峰值,6 h之后,其表达量呈下降趋势,IFN-γRα蛋白浓度也随之逐渐降低;10 μg/L的IFN-γ对于ICAM-1和IFN-γRα的表达无影响.结论 IFN-γ可能是通过影响微血管内皮细胞(MVECs)表面IFN-γRα分子和ICAM-1的表达,从而调控和参与细胞免疫反应和炎症反应.     

外源性HGF基因转染对肺动脉高压兔肺血流灌注及肺动脉压力的影响

目的: 探讨外源性肝细胞生长因子(HGF)基因转染高动力性肺动脉高压家兔后促进侧支肺血管生成、改善肺血流灌注、降低肺动脉压力的可行性。方法: 将肺动脉高压兔随机分为对照组、空病毒组和HGF基因转染组; HGF 基因转染组经气管内滴入法转染Ad-HGF, 对照组和空病毒组分别气管内滴入同体积PBS液和Adeno-Null; 4周后, 通过MacLab/8s多功能生理仪行血流动力学检测, 通过抗FⅧ+α-SMA抗体免疫荧光双标检测肺小动脉密度、FITC-lectin灌注+抗α-SMA荧光双标记了解肺血管灌注情况。结果: 气管内给药4周后, HGF基因治疗组含平滑肌细胞的小动脉密度较肺动脉高压对照组和空病毒组(12.5±2.7)/mm²明显增多(P<0.05); HGF组肺血流灌注获得有效改善, 而肺动脉高压对照组和空病毒转染组肺血管仍处于狭窄甚至闭塞状态; HGF治疗组肺动脉平均压明显低于肺动脉高压对照组和空病毒转染组(P<0.05)。结论: 肺动脉高压模型动物经气管滴入法转染外源性HGF, 可以促进肺侧支血管生成, 增加肺灌注并有效降低肺动脉压力。     

CXCR4抑制剂AMD3100对2型登革热病毒诱导血管内皮细胞株Eahy926凋亡的影响

目的: 探讨趋化因子受体CXCR4抑制剂AMD3100对2型登革热病毒(DV2)诱导人脐静脉血管内皮细胞株 Eahy926凋亡的影响。方法: 免疫组织化学法检测Eahy926细胞的Ⅷ因子。Eahy926细胞分成未感染组和DV2感染组,流式细胞术检测两组细胞不同时点(24 h、36 h、48 h和60 h)CXCR4的表达水平。流式细胞术分析未感染组、DV2感染组及DV2+AMD3100组不同时点的细胞凋亡率。免疫荧光法检测细胞膜表面磷脂酰丝氨酸(PS)。结果: Eahy926细胞有Ⅷ因子表达。在DV2感染Eahy926后的4个时点中,CXCR4的表达均有上调,其中以48 h感染组最明显(66.13%±10.30%,P<0.05)。DV2感染能诱导Eahy926细胞凋亡,其中36 h感染组凋亡率出现高峰(29.85%±15.78%,P<0.05)。应用AMD3100后在各时点均能上调DV2感染组的凋亡率,免疫荧光观察到DV2感染组及DV2+AMD3100组绿色荧光标记的细胞增多。结论: DV2感染能诱导血管内皮细胞Eahy926凋亡并上调CXCR4的表达,CXCR4抑制剂AMD3100促进DV2诱导Eahy926细胞凋亡的发生。     

慢性阻塞性肺疾病的全身效应

 慢性阻塞性肺疾病（Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD）是一种常见病、多发病,其典型表现为气流受限和气道重塑,导致肺的结构与功能的改变。由于COPD的患者多种炎症介质的激活使患者处于系统性炎症状态,使得COPD不仅仅是呼吸系统的疾病,同时还包含许多肺外表现,即全身效应。常见的全身性表现包括：骨骼肌萎缩、恶液质、骨质疏松;而慢性炎症使COPD的患者缺血性心脏病、肺动脉高压、糖尿病等疾病的患病率大大增加。     

单左冠状动脉1例

作者在解剖教学一成年男尸心脏时,发现其右冠状动脉缺如,仅有左冠状动脉,现报道如下:找寻右冠状动脉时,于主动脉右窦处未见右冠状动脉开口,但发现在右心耳与肺动脉之间有细小的动脉,于是沿左冠状动脉旋支的走行进行追踪.在冠状沟近房室交点处,旋支发出2支分布于右冠状动脉供血区(图1):一支走行在后室间沟内,另一支沿冠状沟右行,沿途发出分支分布到心右缘、右心室等处,其终末支变细走行于右心耳与肺动脉之间(图2).由于右冠状动脉缺如,旋支走行遥远而部分代替了右冠状动脉血供,因此左冠状动脉旋支代偿性增粗.     

低氧性肺动脉高压和慢性支气管炎、肺气肿并肺动脉高压动物模型的异同

目的 比较低氧性肺动脉高压与慢性支气管炎、肺气肿并肺动脉高压动物模型的异同,为研究慢性阻塞性肺疾病中肺动脉高压形成机制提供良好的实验模型.方法 24只雄性SD大鼠随机纳入10%低氧组(A组)、慢性支气管炎、肺气肿并肺动脉高压组(B组)及正常对照组(C组),8只/组.吸入10%氧2周制作A组,气管内注入脂多糖和每天烟熏混合刺激加18%低氧制作B组模型.各组测定血气分析、肺血流动力学并对肺泡灌洗液行白细胞计数、分类.肺组织HE染色或三联染色后观测气道炎症和肺血管重构的病理形态学改变.结果 (1)与C组比较,A、B组右心室收缩压、平均肺动脉压、右心室与左心室+室间隔重量比升高,腺泡内肌化型动脉增多、管壁增厚(P＜0.05).(2)BALF分析A组白细胞总数与C组差异无显著性(P＞0.05);B组白细胞总数及中性粒细胞增多(P＜0.05).(3) A组气道炎症以上皮细胞变性坏死、黏液杯状细胞增生为主,炎细胞浸润不明显.B组气道炎症符合慢性支气管炎、肺气肿改变,管壁呈现以淋巴细胞为主的多种炎细胞浸润.结论 B组同时体现了慢性气道炎症、肺气肿改变和肺血管重构的特征,更适合用于慢性阻塞性肺疾病中肺动脉高压形成机制的研究.