大鼠心肌素慢病毒RNA干扰载体的构建及其对血管平滑肌细胞分化的影响

目的: 构建大鼠心肌素(myocardin)慢病毒RNA干扰(RNAi)重组质粒,分析该RNAi质粒的干扰效果及其对血管平滑肌细胞(VSMCs)分化的影响。方法: 设计并合成3对针对大鼠myocardin的shRNA片段,退火后将双链oligo-DNA克隆入慢病毒质粒载体pGCSIL- GFP获得重组干扰质粒pGCSIL- GFP-shMyocd。以pEGFP-N1 / X124G表达载体构建含Flag标签的myocardin表达质粒pEGFP-N1- Myocd。将重组干扰质粒和过表达质粒共转染293T细胞,Western blotting分析Flag标签蛋白的表达,筛选出干扰效率最好的干扰质粒并大量扩增。干扰质粒转染大鼠主动脉VSMCs,RT-PCR和Western blotting检测myocardin及分化标志物SM22α的表达。结果: 成功构建大鼠myocardin的慢病毒干扰质粒pGCSIL- GFP-shMyocd和过表达质粒pEGFP-N1-Myocd。上述2种质粒共转染293T细胞后,1号干扰质粒转染组Flag标签蛋白表达下降最显著。将1号质粒进行大包装,获得滴度为1×10¹² TU/L的慢病毒颗粒,该病毒转染VSMCs后,myocardin表达明显下调并伴随分化标志物SM22α表达的显著下降。结论: 成功构建大鼠myocardin慢病毒重组干扰质粒pGCSIL- GFP-shMyocd;抑制基因myocardin表达后伴随VSMCs分化的表达下降,提示myocardin在VSMCs分化过程中的重要性。pGCSIL- GFP-shMyocd重组质粒的成功构建为后续研究特定病理条件下(如动脉粥样硬化)VSMCs表型转变的分子机制奠定了基础。     

伦理框架下辅助生殖技术的法律构建

辅助生殖技术对社会、伦理道德观带来的巨大冲击日益加深。由于其导致生育和婚姻的分离,进而引发了一系列的伦理问题。如何协调医学科学和伦理道德的关系,使其不仅有利于生命技术的发展,也有利于维护人类社会伦理秩序,需要在伦理的框架下寻求相应的技术规范和法律制度的支持。     

干细胞构建组织工程皮肤的研究进展

组织工程学是近年来细胞生物学、工程材料学和临床医学交叉发展起来的一门新兴学科。组织工程学最基本的思路是在体外将分离的种子细胞接种到具有一定空间结构的载体支架上,通过细胞与细胞之间的相互作用形成具有一定结构功能的组织或器官。从组织工程学的观点来看,人工皮肤主要有三类：①表皮替代物,即培养表皮片;②真皮替代物,即胶原凝胶、胶原海绵合成膜、     

不同种子细胞在组织工程膀胱构建中应用的研究进展

组织工程膀胱构建的研究为膀胱缺损的修复提供了新的选择．它避免了传统的肠道代膀胱引起的代谢紊乱、感染、结石形成等并发症。组织工程膀胱构建研究中,种子细胞的选择、体外培养及扩增是关键。是成功构建组织工程膀胱必不可少的条件。理想的种子细胞应该具备来源广泛、易获得,体外易于培养扩增,与支架材料相容性好等优点。本文主要就不同的种子细胞在组织工程膀胱构建研究中的应用进展进行综述。     

医药营销管理专业实践教学体系的构建原则及目标定位

医药营销管理专业是医学高等院校近年来为了适应社会发展对医药营销人才需求而开发的新兴专业,该专业由于学科特点决定了其实践教学体系的构建特点。文章力图从实践教学体系的构建原则及教学目标定位来探讨医药营销管理专业实践教学体系的设计,为形成一个以培养技能型医药营销管理专业高级专门人才为目标的教学体系奠定基础。     

高职高专院校双师型护理教学团队培养模式探索

目的：探索高职院校双师型护理教学团队的培养模式。方法：对新毕业教师采用医院进修及导师负责制培养,校内专任教师坚持医教结合、上级进修、出国学习等方法培养,同时,引进医院优秀护理人员进入学校做兼职教师。结果：有效提高了新毕业教师和校内专任教师临床一线护理工作能力,课堂教学效果明显提高,兼职教师教学方法和技巧不断提升,学生满意度提高,附属医院够资格的护士均获得了高校教师资格,形成了学历、年龄、职称等结构合理的护理教学团队。结论：该培养模式可有效提高护理专业教师的双师素质及双师能力,培养高素质的双师型护理教学团队,不断提高护理教育教学质量。     

uPA和PAI-1基因克隆及真核表达载体的构建及鉴定

目的：克隆人卵巢上皮癌组织uPA和PAI-1基因cDNA全长,构建表达uPA和PAI-1基因的真核表达载体。方法：采用RT-PCR技术从人卵巢上皮癌组织总RNA中逆转录uPA和PAI-1基因的cDNA全长,克隆到pGEM-TEasy Vector上,通过酶切和测序进行鉴定;酶切后与真核表达载体pcDNA3.1/myc-his（-）B连接,酶切及测序再次鉴定;采用脂质体法将重组质粒DNA转染至卵巢癌上皮细胞SKOV3细胞;采用有限稀释法和G418分别加压筛选并培养SKOV3-uPA和SKOV3-PAI-1细胞及对照细胞;Western blot法检测转染前后SKOV3细胞uPA和PAI-1基因的表达。结果：成功扩增出uPA和PAI-1基因的cDNA的全长,并克隆入T载体,DNA测序证实序列正确,通过连接成功构建含正确目的基因的表达载体pcDNA3.1-uPA和pcDNA3.1-PAI-1,Western blot能检测到uPA和PAI-1基因蛋白分别在SKOV3-uPA和SKOV3-PAI-1细胞中的表达。结论：成功构建了uPA和PAI-1表达基因的真核表达载体,为进一步研究uPA和PAI-1基因在卵巢癌侵袭转移中的作用提供了实验基础。     

靶向核仁素RNA干扰载体的构建与筛选

目的:设计靶向大鼠核仁素的RNAi序列,构建6个RNAi真核表达载体,采用转染工具细胞筛选有效靶点.方法:根据GenBank中的核仁素序列,设计特异性siRNA序列,将模板序列克隆至pGCsilencerTMU6/Neo/GFP质粒中,通过测序鉴定后,将重组质粒用脂质体转染技术导入H9C2细胞,荧光显微镜检测GFP表达以判断转染效率,Western-blot检测靶细胞中核仁素蛋白水平的表达,筛选有效干扰序列.结果:经测序鉴定,克隆的RNAi打靶序列完全正确,无碱基突变.转染H9C2细胞36 h后,荧光显微镜下可检测到GFP标记的核仁素蛋白的表达,转染效率达75%以上.Western-blot结果显示3号核仁素干扰质粒(Ncl-3)能明显下调H9C2细胞的核仁素表达.结论:成功构建靶向核仁素RNA干扰载体,并筛选出效能最优序列,为进一步相关研究奠定基础.     

职业潜水员人格特征模型的初步构建

目的:探讨职业潜水员的人格特点,初步尝试构建职业潜水员的人格特征模型。方法:采用卡特尔16PF,对交通部打捞局136例职业潜水员进行调查,数据运用SPSS13.0进行统计处理。结果:我国潜水员的职业人格特征主要由自律谨慎性、目标实现能力、思维开放性、现实敏感性、社会交往能力5个因子构成,可解释总变异53.37%。结论:五个因子基本可构建我国职业潜水员人格特征模型,对选拔和评价职业潜水员具有一定的参考价值。