Immune responses to the expressed products of the CSP antige n gene of Plasmodium falciparum southern China isolate FCC1/HN in Hela cell

Objective To construct a eukaryotic expression system with pcDNA3-PfCSP/Hela for the Circ umsporozoite protein (CSP) gene of Plasmodium falciparum (P.falciparum), t o observe the immune responses in BALB/c mice induced by the expressed proteins .Methods The recombinant plasmid pcDNA3-PfCSP was transformed into the Hela cell line. The expressed protein was isolated and analyzed by using SDS-PAGE and used for immunization of BALB/c mice by subcutaneous, intravenous, and intraperitone al adminstration.Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA), Dot-ELISA, Wester n blot, T lymphocyte proliferation test, natural killer cell(NKC) activity assay , and CD4(+) and CD8(+) T cell detection were used for observation of humoral an d cellular immune responses.Results Immune sera strongly reacted with the expressed protein, antibody titer was up to 1∶6400 as detected by ELISA.Western blot analysis revealed a specific b and at 38.3 Kda.When the spleen cells of normal and immunized BALB/c mice we re specifically stimulated with expressed protein, the optical densities were 0 .12±0.03 and 0.34±0.04, respectively.The latter were significantly highe r than the former (P<0.01).We used the MTT colorimetric assay to measure NKC activity of mice spleen.The results showed that the NKC activity of immuni zed BALB/c mice was remarkably higher than that of the controls (P<0.05). CD4(+) and CD8(+) T cells were detected by using monoclonal antibody immunofluor escence methods.The results showed that the percentage of CD4(+) and CD8(+) T cells of immunized group were significantly higher than that of control group ( P<0.05).Conclusions The humoral and cell-mediated immune responses and elevated NKC activity to pr oducts made with a eukaryotic expression system could be specifically detected i n BALB/c mice.These findings indicate that the expressed protein could enhance the immune function in mice.     

钙调蛋白基因缺陷HIS3酵母菌株的构建和鉴定

目的：构建白念珠菌钙调蛋白基因（CMD1）缺陷HS3酵母菌体,为进一步探讨钙调蛋白基因突变对真菌生长周期及致病性的影响奠定基础。方法：首先将含cmd1::TRP1置换序列的质粒I转化二倍体酵母菌株YPH501(his3trplural）,经Soutthern印迹法筛选出含TRP1序列的菌株。其次,将含CMD1序列的质粒Ⅱ转化以上TRP1阳性菌株,进行减数分裂后选择得到TRP1阳性酵母菌株单倍体。最后,将含trp1:HIS3置换序列质粒Ⅲ转化上述TRP1阳性单倍体菌株,用不含His培养基培养得到钙调蛋白基因缺陷HIS3酵母菌株。结果：经Southern印迹法证实cmd1：TRP1基因置换克隆;减数分裂后选择得到了TRP1阳性酵母菌株单倍体;质粒Ⅲ转化单倍体后经不含His培养基培养得到CMD1缺陷HIS3菌株,接种于不含Trp倍养基上未见有菌落生长,说明质粒Ⅲ转化单倍体后已将his3TRP1转换成HIS3trp1。结论：成功构建了钙调蛋白基因缺陷HIS3酵母菌株,基因型为cmd1trp1HIS3。     

孕烯醇酮唾液酸苷对β-淀粉样蛋白致神经元损伤的保护

阿尔茨海默病(AD)是一种老年神经系统退行性疾病。有学者认为:β-淀粉样蛋白(Aβ)形成聚集,产生聚集依赖的(aggregation-dependent)神经元毒性作用是产生AD的关键步骤[1]。Aβ的一个片段Aβ25-35可产生自由基和氧化应激,增加神经元对NMDA的敏感性,造成神经元内Ca2+常态水平的不稳定,使胞内[Ca2+]升高,从而产生神经元细胞膜的损伤和神经变性,因此实验研究中常以Aβ25-35作为损伤物质,造成对神经元等的损伤。唾液酸是细胞表面的一个九碳糖,与糖蛋白和糖脂结合,参与维持细胞完整性、神经营养和细胞轴束生长作用,但它不易透过血-脑屏障。…     

热休克蛋白gp96的纯化及其对荷肝癌小鼠的治疗作用

肿瘤的手术治疗和放射治疗有着立竿见影的作用 ,但肿瘤的治愈率很难得到突破。疫苗能充分调动全身的免疫细胞及 /或免疫分子 ,发挥抗肿瘤效应 ,显示出广阔的应用前景[1] 。近年来有研究证实热休克蛋白 (ＨＳＰ)具有抗肿瘤作用[2 ] ,我们用蛋白层析法及Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹法分离并鉴定小鼠肝癌细胞Ｈ2 2 的ｇｐ96 ,并以ｇｐ96免疫治疗Ｂａｌｂ/ｃ小鼠 ,观察其抗肿瘤效应。一、材料与方法1 材料 :(1)主要试剂及仪器 :ＣＤ4 ＰＥ单抗、ＣＤ8 ＰＥ单抗、γ干扰素 (ＩＦＮ γ) 荧光素异硫氰酸脂 (ＦＩＴＣ)单抗、白细胞介素 (ＩＬ 10 ) ＦＩＴ…     

2型糖尿病尿5种蛋白联合检测的临床意义

目的 :了解 2型糖尿病尿 5种蛋白变化的临床意义。方法 :对 2 0 4例 2型糖尿病患者和 44例正常对照者(C组 )同时进行 2 4h尿Alb、Trf、IgG、RBP、NAG(分别简称UAE、UTE、UIE、URBPE及UNAGE)、尿糖排泄 (UGE)和肌酐清除率 (Ccr)的检测。根据 2 4hUAE分为 3组 :正常白蛋白尿组 (Ⅰ组 ) ;微量白蛋白尿组 (Ⅱ组 )及大量白蛋白尿组(Ⅲ组 )。结果 :(1) 2 0 4例中 ,微量和大量白蛋白尿发生率为 41 2 %和 7 8% ,与C组相比 ,Ⅱ组Ccr略降低 (P >0 0 5 ) ,Ⅲ组Ccr明显降低 (P <0 0 5 ) ;(2 )UTE在 3组患者中均与UAE呈显著相关 ;UIE在Ⅲ组与UAE明显相关 ;UNAGE在Ⅱ组与UAE明显相关 ;(3)URBPE增高的发生率在Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组分别为 11 5 %、42 9%和 75 %。结论 :不同分子量尿多种蛋白联合检测对糖尿病肾脏病变的早期发现和定位有较大的价值     

作为抗肿瘤药物靶向载体LDE的可行性研究

目的：观察LDE－ACM复合物对裸鼠胃癌SGC－7901,NKM－45细胞株皮下移植肿瘤的抑制作用,了解LDE作为抗肿瘤药物靶向载体的可行性。方法：采用密度梯度离心和SephadexG-50层析以主超声法制备LDE和LDE－ACM复合物,建立裸鼠胃癌皮下移植肿瘤模型,观察LDE－ACM对移植肿瘤的抑制作用。结果：LDE－ACM复合物可明显抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,与其他实验对照组比较,LDE－ACM组的瘤重明显减轻,抑瘤率产高,而外周白细胞计数无明显降低,结论：LDE－ACM复合物有较强的抑制肿瘤效应用副作用明显减轻;LDE作为抗肿瘤药物靶向载体是可行的。     

人巨细胞病毒先天性感染胎鼠大脑皮质钙调素基因mRNA表达的研究

目的 研究先天性人巨细胞病毒（HCMV）感染致脑损害后钙调素（calmodulin,CaM)基因mRNA表达的改变,以探讨先天性HCMV感染所致脑损害的机制。方法 选用10周龄Balb/c小鼠,雌雄小鼠腹腔内分别注射1.0ml、0.5ml、0.25ml HCMV后合笼交配以建立先天性HCMV中枢神经系统（CNS）感染小鼠模型,并以腹腔注射1.0ml 1640液鼠为对照。剖腹取21天胎龄小鼠大脑皮质,以自行设计的CaM cDNA编码区的一对引物与一条CaM特异性探针,分别用逆转录聚合酶链反应（RP－PCR）技术CaM mRNA相对含量,用原位杂交检测大脑皮质细胞内相应mRNA的表达及定位。结果 母鼠腹腔内接种HCMV量为1.0ml与0.5ml的临产胎鼠大脑皮质分离出相应病毒,病理学检查等确诊发现了侵袭性脑膜脑炎性病理改变,证实HCMV可以小鼠宫内传播至CNS。1.0ml组与0.5ml组胎鼠RT－PCR产物浓度明显高于0.25ml组及对照组,而1.0ml组与0.5ml组间亦有明显差异。电泳结果显示对照组与0.25ml组胎鼠未见阳性条带,而1.0ml组胎鼠特异性条带信号强于0.5ml胎鼠,仅略低于同组母鼠。原位杂交显示CaM mRNA不但出现在1.0ml组胎鼠大脑皮质大神经元胞核及胞浆内,在中小神经元及胶质细胞的胞核及胞浆亦有高密度表达,阳性细胞的突起中亦有弱信号存在。结论 本研究结果揭示先天性感染HCMV胎鼠大脑皮质内CaM mRNA表达量明显增加,且神经元及胶质细胞均有表达,并与感染剂量有依赖关系。提示CaM mRNA表达增高可直能直接参与了HCMV先天性感染脑损害的过程。     

人急性白血病淋巴细胞HSP70及 HSP70 mRNA的表达研究

目的：检测急性白血病病人血淋巴细胞热休克蛋白70（HSP70）及其mRNA的表达。方法：ELISA法检测HSP70,RT－PCR法检测HSP70 mRNA。结果：化疗前急性白血病病人淋巴细胞HSP70及mRNA明显低于正常人;而化疗后,急性白血病病人淋巴细胞HSP70及mRNA明显高于正常人（P＜0．01）,结论：HSP70与急性白血病癌细胞关系密切,对癌细胞起保护作用。     

胃癌中p16、Rb基因蛋白的表达及意义

目的 探讨p16、Rb基因蛋白的表达与胃癌的发生及临床病理参数的关系。方法 采用S－P免疫组化方法检测了80例胃癌及28例癌旁正常胃粘膜组织中p16和Rb蛋白的表达。结果 胃癌中p16、Rb蛋白表达阳性率（分别为58．8％和55．0％）显著低于癌旁正常胃粘膜（100％）（P＜0．01）,Rb蛋白中度阳性或强阳性胃癌p16蛋白中度阳性或强阳性表达率明显低于Rb蛋白阴性或弱阳性胃癌（P＜0．01）。p16蛋白在胃癌中的表达与肿瘤细胞分化程度、Lauren分型和淋巴结转移密切相关。结论 16、Rb蛋白表达的缺失与胃癌的发生密切相关,p16蛋白的表达可用于判断胃癌患者的预后,p16和Rb蛋白的表达相互抑制,呈明显的负相关。     

早期肝癌中端粒酶活化与细胞增殖相关性研究

目的：研究早期肝癌中端粒酶基因蛋白(hTRT)与细胞增殖核抗原（PCNA）表达及其相关性。方法：在20例早期肝癌中用原位杂交检测hTRT基因,免疫组化方法检测PCNA的表达。结果：hTRT阳性信号检出率80．0％,PCNA强阳性率为55．0％;癌中hTRT阳性信号、PCNA表达强度显著高于癌旁非癌组织（P＜0．05）;癌不则分化组中PCNA表达有显著差异（P＜0．05）;癌中hTRT阳性信号分布有模型和浆型两种形式,其分布形式、 信号强度均与PCNA阳性强度密切相关（P＜0．01）。结论;肝癌发生与细胞增殖密切相关。端粒酶活化是肝癌发生的早期事件,是肝细胞增生和恶性转化所必需,其检出结果对鉴别肿瘤恶变有重要意义。