大鼠垂体β-内啡肽样免疫反应性的光镜和电镜观察

本实验应用辣根过氧化物酶标记的葡萄球菌蛋白A的免疫组化方法(HRP-S_PA法)及其免疫酶电镜技术,对大鼠垂体β-内啡肽样免疫反应性(β-EP-IR)进行了观察。结果发现,β-EP-IR阳性呈棕色颗粒位于中间叶所有的细胞内,颗粒大小不均,反应程度强弱不一;在前叶,β—EP—IR阳性     

8-Br-cAMP和槲皮素单独和联合应用对Eca-109细胞凋亡和Bcl-2、Bax、XRCC1等凋亡相关蛋白的作用

目的探讨8-Br-cAMP和槲皮素联合应用对Eca-109细胞的凋亡和Bcl-2、Bax、XRCC1等凋亡相关蛋白的作用.方法将Eca-109细胞随机分为4组①8-Br-cAMP组(Br组); ②槲皮素组(Q组); ③(Br+Q)组; ④不加药物的对照(C)组.同时培养48 h,对以上4组细胞制备细胞滴片及硝酸纤维素膜(NCM)滴膜2种标本,分别进行Bcl-2、Bax、XRCC1的免疫组化和免疫斑点印迹实验,并以TUNEL法检测各组细胞凋亡率.结果细胞凋亡率,C组为4%,(Br+Q)组为70%,Br组为42%,Q组为35%,(Br+Q)组>Br组或Q组>C组,P<0.001.Br、Q及(Br+Q)组与对照组相比,Bcl-2-IR及XRCC1-IR皆低于C组,P<0.001,而Bax-IR则高于C组,P<0.001;Br组Q组或Br组(Br+Q)组,P>0.05.Bcl-2-IR与XRCC1-IR呈显著正相关,与Bax-IR和Bax-IR与XRCC1皆呈显著负相关.结论Br与Q联合用药与单独用药皆可下调Bcl-2及XRCC1表达,上调Bax表达;联合用药的细胞凋亡率显著高于单用Br或Q.提示,中西医联合用药可能更具有临床治疗意义.     

冰冻切片抗体在石蜡切片免疫组化中的应用

目的：探讨经抗原系列修复后冰冻切片抗体应用于石蜡切片的免疫组化技术。方法：在常规免疫组化的基础上,于Triton X-100处理后,用0．1mol／L的甘氨酸4℃过夜或0．2mol／L的甘氨酸室温2h。0．01mol／L枸橼酸缓冲液pH6．095--98℃微波10min进行组织抗原修复。观察比较GDNF,Caspase-3和：XRCC1冰冻切片抗体在石蜡切片中的免疫反应性(IR)。结果：经过上述条件处理后,石蜡切片中均出现3种冰冻抗体的IR阳性。其中GDNF IR反应性优于Caspase-3和XRCC1-IR,但3种冰冻抗体在冰冻切片或滴片中的IR均高于石蜡切片。结论：石蜡切片经系列抗原修复后免疫反应有一定改善,但与应用的抗体类型有关。     

8-Br-cAMP对Hela细胞wtp53，mtp53，c-myc和iNOS基因表达的影响

目的探讨8-Br-cAMP对Hela细胞癌基因和抑癌基因等表达的影响.方法将培养的Hela细胞分为3组①8-Br-cAMP组(Br组) 加至8-Br-cAMP终浓度为2×10-5mol/L;②阳性对照组(60Co组)给予60Co 照射量4 Gy,720 s;③阴性对照组(C组)仅加含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液.各组细胞均培养48 h后,将1×107 ml-1细胞悬液滴加至预先处理过的硝酸纤维素膜和载玻片上.应用原位杂交和完整细胞原位斑点印迹技术分别检测3组Hela细胞中野生型p53(wtp53)、突变型p53(mtp53)、c-myc和iNOS基因的表达.结果8-Br-cAMP组与阳性对照组相比,差异无统计学意义,P>0.05;与阴性对照组相比,上调wtp53和iNOS基因的表达,同时下调mtp53和c-myc基因的表达,P<0.01.结论结果提示8-Br-cAMP可能通过调控Hela细胞癌基因和抑癌基因的表达对Hela细胞起到生长抑制和促分化作用.     

同一细胞非放射性双原位杂交信号显示技术

目的：探讨同一细胞内双原位杂交信号的显示技术。方法：以地高辛标记的polβ探针加生物素标记的表皮生长因子受体(EGFR)探针或生物素标记的wtp53探针对人食管癌Eca-109细胞同时进行原位杂交后,以anti-Dig-AP孵育,以AP-Red为底物显色,杂交信号呈桔红色或桔黄色细颗粒。继之以SA-AP孵育后以NBT／BCIP底物显色,杂交信号呈蓝紫色颗粒。结果：在同一细胞内可见桔黄色和蓝紫色颗粒双杂交信号。结论：应用非放射性双杂交信号的原位杂交技术可观察单个细胞内2种基因共表达的情况。     

全反式维甲酸对人食管癌细胞增殖及DNA聚合酶β表达的影响

目的研究全反式维甲酸对人食管癌细胞诱导分化作用.方法在体外细胞培养的基础上,观察细胞形态学的变化,细胞增殖动力学的变化.采用MTT比色法测定细胞增殖抑制率,免疫组化和western blot 方法检测DNA聚合酶β(polβ)蛋白表达.结果经全反式维甲酸处理后,人食管癌Eca109细胞的细胞形态趋向良性分化,细胞增殖指数明显降低.polβ表达降低.结论全反式维甲酸对人食管癌Eca109细胞有诱导分化作用,其机理可能是抑制polβ的表达,改变细胞的形态结构和生物学特性,促进癌细胞的分化趋向正常.     

胃癌组织端粒长度的变化

目的探讨胃癌组织端粒长度的变化。方法采用Southern blot分别检测每例胃癌标本中癌、癌旁和相应正常胃黏膜组织的端粒长度。结果32例胃癌标本中癌组织的平均端粒长度为5.088±1.712kb,癌旁组织的平均端粒长度为5.969±1.659kb,正常组织的平均端粒长度为6.728±1.707kb;胃癌组织的平均端粒长度变化与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移等病理参数无显著相关性。结论本研究的结果显示胃癌组织较相应癌旁和正常胃黏膜组织的平均端粒长度明显缩短;并提示端粒长度变化不宜作为判断胃癌恶性程度的生物标志。     

ACUPUNCTURE EFFECTS ON INDUCIBLE NITRIC OXIDE SYNTHASE mRNA, iNOS PRODUCT AND HEAT SHOCK PROTEIN IN PERITONEAL MACROPHAGES OF THE MOUSE

Inourpreviousexperimentsitwasfoundthatacupuncturecouldcontributetoimmunoreg-ulationandimmunefunctionin.i..[l].Nitricoxide(NO)actingasanubiquitousmessengermoleculeandneurotransmitterplayedandessen-tialroleinrelaxingvesselsandcytotoxicitya-gainstinvadingmic…     

野生型DNA聚合酶β转染Eca-109细胞后增变基因表型变化

目的:探讨野生型DNA聚合酶β(polbeta)转染人食管癌Eca-109细胞后对其增变基因表型的效应.方法:将经过鉴定的重组pcDNA 3.1质粒(插入野生型, wt)-polbeta转染培养的人食管癌Eca-109细胞.将Eca-109细胞分为3组:转染实验组(E)、空质粒转染对照组(C1)和未转染对照组(C2).应用原位杂交技术显示wt-polbeta和wt-p53的杂交信号,免疫细胞化学染色显示POLB-免疫反应性(IR)和多药耐受(MDR1)-IR,免疫印迹显示wt-polbeta和突变(mt)-polbeta的带型,细胞化学技术检测各组细胞的增殖与分化细胞的比率.结果:polbeta免疫印迹结果显示E组呈现增强的wt-polbeta主带, C1、C2 组呈现很弱wt-polbeta主带和显著突变的(mt)-polbeta主带(P<0.01);polbeta免疫细胞化学结果显示E组的强信号定位于细胞核内,C1、C2 组信号皆很弱(P<0.01).E组的wt-polbeta及 wt-p53原位杂交的信号强于C1、C2 组(P<0.01).E组MDR1的免疫反应性和增殖与分化细胞的比率低于C1、C2 组(P<0.01).结论:wt-polbeta转染的Eca-109细胞呈现wt-polbeta及wt-p53表达上调而mt-polbeta及MDR1表达下调的增变基因表型减弱.