睡眠剥夺引起大鼠海马神经元凋亡及相关基因表达的变化

背景:睡眠剥夺是否引起细胞变性,其信号传导是否与某些基因调控有关。目的:探讨睡眠剥夺引起的神经元凋亡与相关基因表达的变化。设计:随机对照实验研究。地点和材料:实验地点:郑州大学医学院生理学实验室。成年健康SD大鼠,雌雄不限,体质量(200±20)g,由河南省实验动物中心提供。干预:采用TUNEL染色观察了快眼动睡眠剥夺大鼠海马神经元形态学变化,应用原位杂交检测了快眼动睡眠剥夺大鼠海马bcl-2,baxmRNA表达。主要观察指标:睡眠剥夺大鼠海马神经元形态学变化;海马bcl-2和baxmRNA表达。结果:快眼动睡眠剥夺大鼠海马CA1,CA3区神经元阳性凋亡细胞数增多,异相睡眠剥夺组海马CA1～CA4区细胞凋亡率分别为(6.60±2.24)%,(1.69±0.45)%,(6.87±1.32)%,(1.74±0.98)%。CA1,CA3区细胞凋亡率和CA2,CA4区相比较差异有显著性意义(t=5.26～6.95,P<0.05)。bcl-2mRNA阳性信号表达积分值较强,四个区之间差异无显著性意义,baxmRNA表达增强犤CA1为(211.12±59.85);CA3为(205.56±56.99)犦与CA2和CA4区犤(123.42±22.80),(124.21±20.47)犦比较差异有显著性意义(t=3.20～4.36,P<0.05)。结论:睡眠剥夺可引起大鼠海马神经元凋亡,与凋亡相关的bcl-2,baxmRNA基因表达的变化可能涉及神经元的凋亡机制。     

高温对老年小鼠腹腔巨噬细胞热休克蛋白及其它免疫指标表达的影响

目的　研究高温对老年小鼠腹腔巨噬细胞热休克蛋白 (HSP) 70、诱导性一氧化氮合酶 (i NOS)及其基因 (i NOS m RNA)表达的影响 ,探讨提高老年机体对缺血、缺氧及其它有害刺激的预适应能力及免疫调节能力的途径。方法　将小鼠分为实验组和对照组。采用免疫组化、组织化学、原位杂交及完整细胞斑点印迹技术检测 HSP70、i NOS及 i NOS m RNA的表达 ,对所有斑点印迹信号作薄层扫描 ,并用 t检验对扫描值进行统计学处理。结果　 HSP70、i NOS及 i NOS m RNA的表达实验组为 5.97± 2 .1 1、1 1 .0± 1 .2及 2 1 .4± 1 .8;对照组为 2 .1 4± 0 .76、7.3± 0 .7及 1 4 .4±1 .8;两组相比有显著差异 (P<0 .0 1 )。结论　高温对老年机体免疫调节及对有害刺激的预保护能力有促进作用。     

纳米脂质体槲皮素诱导人食管癌癌干样细胞凋亡的研究

目的检测纳米脂质体槲皮素对人食管癌癌干样细胞凋亡的诱导作用，并探讨其机制。方法以氯仿-DMSO预溶的脂质体槲皮素经负压旋转蒸发、超声破碎及80nm过滤制备纳米脂质体槲皮素。将其作用于人食管癌细胞系Eca109／9706细胞的生长抑制率（MTT法），及作用后食管癌细胞中羟自由基（OH^-）、NO、PTEN、NF-κB及Caspase-3的表达（免疫组化法）及凋亡率（采用TUNEL法）。检测Eca109／9706细胞中CD133、MDR1的髟双免疫酶标及单、双荧光标记的复合率。结果纳米脂质体槲皮素处理的Eca109／9706细胞的生长抑制率、OH^-、NO、PTEN、NF-KB及Caspase-3表达和凋亡率均显著高于对照组（P〈0.01）。Eca109／9706细胞的的单免疫荧光／单免疫酶标率各为80％及70％，双免疫荧光／双免疫酶标的复合率为30％-43％。结论纳米脂质体槲皮素可诱导Eca109／9706细胞产生氧化应激反应并激活PTEN、NF-κB的转导途径，最终通过Caspase-3诱导细胞凋亡；CD^＋133、MDR1^＋可作为癌干样细胞的标志。     

癌基因与急性髓细胞性白血病

细胞原癌基因 (ｐｒｏｔｏｏｎｃｏｇｅｎｅ)是存在于正常细胞基因组中具有高度保守性的基因 ,它们的表达受到严格的时空控制 ,在调控细胞正常的生长、增殖、分化和发育中起着至关重要的作用。但在细胞生长过程中 ,原癌基因可以通过基因扩增、染色体移位、插入及点突变等途径被激活转变成癌基因(ｏｎｃｏｇｅｎｅ) ,使细胞获得不死性和恶性增生的能力 ,这对肿瘤的发生起重要的作用。急性髓细胞性白血病 (Ａｃｕｔｅｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓｌｅｕｋｅｍｉａ ,ＡＭＬ)是由于髓性造血细胞在发育的不同阶段发生恶性转化 ,引起细胞的恶性无限制增…     

银屑病患者指甲和鳞屑的蛋白质SDS-电泳图谱和转谷氨酰胺酶活性探讨

目的:探讨银屑病患者指甲和鳞屑蛋白质十二烷基硫酸钠(SDS)-电泳图谱和转谷氨酰胺(transglutaminase 1,TGase1)酶的活性.方法:各取5例银屑病患者的指甲和鳞屑与5例健康人的指甲和鳞屑,分别提取蛋白质进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE).应用辣根过氧化物酶(HRP)-单丹酰尸胺结合物对鳞屑铺片标本检测TCase 1酶活性.结果:健康人指甲和鳞屑的SDS-PAGE图谱皆呈现4条主带:63 ku、54 ku、48 ku及38 ku,银屑病患者指甲及鳞屑的SDS-PAGE图谱也呈现此4条主带,但多数主带扫描数值的水平较高,P<0.01.健康人的鳞屑铺片标本TGase 1酶活性呈现为棕黄色细颗粒定位于角质深层角质形成细胞(KC)的周缘;相比之下银屑病患者的TGase 1酶活性缺乏.结论:指甲及鳞屑的SDS-PAGE主带相似,前者图谱更清晰可能与其蛋白较稳定有关.银屑病患者比健康人的SDS-PAGE图谱主带表达水平升高,提示其KC可能呈增生状态,表达产物较多;患者TGase 1酶活性的缺如提示其表皮屏障功能有缺陷,可能与其参与代偿性增生有关.     

神经免疫肽对人多形核白细胞吞噬功能的影响

用改良的NBT还原法观察了亮氨酸脑啡肽(LEK).甲硫酸脑啡肽(MEK)和P物质(SP)对正常人周缘血多形核白细胞(PMN)细胞吞噬杀伤作用的影响。结果表明:低浓度(10~(-10)mol/L)的三种神经免疫肽可使PMN的NBT阳性率分别提高到57.9%、49.8%和73.6%;而对照的阳性率为11.2%。表明三种神经免疫肽均能不同程度地增强正常人PMN的吞噬杀伤能力。不同神经免疫肽增强效应的差异可能是由于PMN的兴奋性和抑制性受体同时被激活后不同的净结果所致。     

板层状鱼鳞病患者外周血白细胞生长、分化相关基因的表达

目的:探讨板层状鱼鳞病(LI)患者外周血白细胞有关生长、分化的基因的表达情况.方法:LI患者与健康人各8例,分离外周血白细胞,采用原位杂交和RNA斑点印迹方法,检测c-fos、ras、c-myc、EGFR、iNOS 基因的表达;应用免疫细胞化学染色和蛋白质斑点印迹方法,检测MAPK、CyelinD1、Filaggrin、Involucrin及K10蛋白的表达.结果:LI组外周血白细胞c-fos、ras、c-myc、EGFR、iNOS基因和MAPK、Filaggrin、Involucrin、K10蛋白的表达较健康对照组降低(P<0.01),而CyelinD1的表达差异无统计学意义(P>0.05).结论:LI患者外周血白细胞有关生长、分化的基因多旱现表达下调.     

针刺对小鼠腹腔巨噬细胞的热休克蛋白、诱导性一氧化氮合酶及其基因表达的效应

目的研究针刺对小鼠腹腔巨噬细胞的热休克蛋白（ＨＳＰ）、诱导性一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）及其ｍＲ－ＮＡ表达的效应。方法将２４只昆明小鼠腹腔注射无菌石蜡油后,随机分为３组：电针（ＥＡ）组、对照１（Ｃ１）组和对照２（Ｃ２）组。将３组收集的腹腔巨噬细胞制备成玻片和硝酸纤维素膜（ＮＣＭ）两种标本,应用原位杂交、免疫细胞化学、细胞化学及斑点印迹技术检测ＨＳＰ７０、ｉＮＯＳ及ｉＮＯＳｍＲＮＡ。结果ＨＳＰ７０定位于巨噬细胞的胞质和胞核;ｉＮＯＳｍＲＮＡ及ｉＮＯＳ均定位于巨噬细胞的胞质;３组的ｉＮＯＳｍＲＮＡ、ｉＮＯＳ、ＨＳＰ７０的斑点印迹的扫描数值均为ＥＡ组＞Ｃ２组＞Ｃ１组（Ｐ＜０．０１）。结论电针可显著提高小鼠腹腔巨噬细胞的ＨＳＰ７０、ｉＮＯＳ及ｉＮＯＳｍＲ－ＮＡ表达。     

槲皮素诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡及相关蛋白表达的研究

目的 探讨槲皮素诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的作用.方法 将Eca-109细胞随机分为两组①槲皮素(Q)组;②不加药物对照(C)组,同时培养48h,分别进行Bcl-2、Bax和XRCC1免疫组化和免疫斑点印迹检测.以TUNEL法检测各组细胞凋亡率.结果 细胞凋亡率,C组为4%,Q组为35%(P＜0.001);Q组的Bcl-2和XRCC1的免疫反应性(IR)皆低于C组(P＜0.001),Bax高于C组(P＜0.001);Bcl-2与XRCC1呈显著正相关,与Bax呈显著负相关.结论 槲皮素可诱导Eca-109细胞凋亡,同时下调Bcl-2和XRCC1的表达,上调Bax表达.