新生大鼠耳蜗K(o)lliker器支持细胞ATP释放的机制

目的 观察体外培养的新生大鼠耳蜗K(o)lliker器支持细胞是否存在并释放ATP,初步探讨其释放机制.方法 选取出生后ld的Sprague-Dawley大鼠,分离耳蜗膜迷路,采用机械分离与酶消化相结合的方法获得单离的K(o)lliker器支持细胞.观察膜迷路和K(o)lliker器支持细胞的喹丫因染色情况.采用生物发光法,通过影响K(o)lliker器支持细胞ATP代谢、改变细胞内外Ca2浓度、抑制细胞内磷脂酶信号通路及添加缝隙连接半通道阻断剂,观察K(o)lliker器支持细胞释放ATP浓度的变化.结果 用喹丫因染色体外培养的K(o)lliker器支持细胞,发现胞质中存在大量绿色星点状染色.采用生物发光法检测的ATP标准曲线呈明显的对数线性关系.随着巴佛洛霉素A1浓度增加,K(o)lliker 器支持细胞培养液中ATP浓度逐渐降低,而随着己二酸二癸酯浓度的增加,培养液中ATP浓度逐渐升高;在一定浓度范围内,随着细胞外Ca2浓度增加,K(o)lliker器支持细胞ATP的释放减少,而随着细胞内游离Ca2浓度增加,K(o)lliker器支持细胞释放ATP量增加;培养液中加入甘珀酸钠或乌热酸抑制半通道后可以显著的降低ATP释放.此外,抑制细胞内磷脂酶信号通路也可以减少ATP的释放.结论 体外培养的新生大鼠耳蜗K(o)lliker器支持细胞存在并释放ATP,细胞内、外液中Ca2+浓度的变化可能通过调节半通道的开放而影响其ATP的释放.     

保肝降脂饮对脂肪肝大鼠护肝作用的实验研究

目的探讨保肝降脂饮治疗脂肪肝的药学机制。方法采用高脂饮食诱导大鼠脂肪肝模型,实验分组为脂肪肝模型组、保肝降脂饮大、中、小剂量组、东宝肝泰对照组和正常对照组共6组。观察大、中、小剂量保肝降脂饮和东宝肝泰对大鼠血清中胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)的含量和肝组织的超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响,以及肝组织形态学的变化。结果模型组大鼠血清中TC、TG明显高于正常组和各治疗组(P<005),而其SOD的活性较正常组和各治疗组明显降低。肝组织切片脂滴明显堆积,正常组没有脂滴堆积,各治疗组肝组织切片显示脂滴堆积较模型组轻。结论保肝降脂饮可显著降低脂肪肝大鼠血清TC、TG含量,减轻肝细胞脂滴堆积,提高肝组织SOD活性,从而发挥降脂保肝的作用。     

中药复方合剂减轻大鼠心肌梗死后心肌纤维化

目的探讨中药复方合剂能否减轻心肌梗死后心肌纤维化。方法通过结扎冠状动脉前降支制造大鼠心肌梗死模型。将60只SD大鼠分为六组:14天和56天非治疗组,14天和56天治疗组,14天和56天假手术组。模型制作24h后,14天和56天治疗组开始灌胃给药。结果假手术组、非治疗组、治疗组在第14天及第56天时,体重差异无显著性(P>0.05)。14天非治疗组全心重、左心室重量、全心重/体重、左心室重量/体重与14天假手术组差异均无显著性(P>0.05),而56天非治疗组上述各项指标(分别为1054±22mg,850±21mg,2.77±0.08,2.23±0.04)均显著高于56天假手术组(分别为990±14mg,786±14mg,2.58±0.04,2.05±0.03)(P<0.01)。14天治疗组上述各项指标(分别为778±13mg,607±11mg,2.54±0.04,1.98±0.03)显著低于14天非治疗组(分别为802±14mg,630±16mg,2.69±0.07,2.10±0.06)(P<0.01),56天治疗组上述各项指标(分别为1031±14mg,822±14mg,2.65±0.04,2.11±0.02)显著低于56天非治疗组(P<0.01),但高于56天假手术组(P<0.01)。治疗组第14天及第56天心肌胶原含量(分别为4.37±0.57mg/g,6.04±0.69mg/g)均显著低于非治疗组(分别为5.22±0.52mg/g,4.37±0.57mg/g)(P<0.01),但仍高于假手术组(分别为3.65±0.41mg/g,4.33±0.51mg/g)(P<0.01)。心肌组织病理学检查发现治疗组心肌间质纤维化明显减少。结论中药复方合剂有明显的抑制心肌胶原增生的作用,可减轻心肌梗死后心肌纤维化程度。     

人脐血单个核细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死的实验研究

目的探讨人脐血单个核细胞(HUCBC)移植治疗急性心肌梗死(AMI)的可行性及疗效。方法雄性Wistar大鼠45只随机分为:心肌梗死(MI)对照组、MI+细胞移植组和正常组(每组各15只)。结扎冠状动脉左前降支制作大鼠AMI模型,以HES沉淀加Ficoll密度梯度离心的方法制备HUCBC,并以BrdU标记细胞。移植组大鼠模型制作成功后即刻在梗死区周边注射经分离并标记的HUCBC混悬液,在MI对照组相同位置注入等量DMEM培养液,正常组不做任何处理。移植4周后用超声评价心功能和左心导管检测血流动力学改变,并取心脏组织行HE染色、抗血管性血友病因子(vWF)和BrdU组化染色,观察心肌病理改变、毛细血管增生及移植细胞成活情况。结果在移植组显示移植的单个核细胞可在梗死心肌内存活并参与梗死心肌修复。超声心动图见移植组各项心功能指标改善。血流动力学检查显示移植组与MI对照组相比,左心室舒张末压明显降低[LNEDP (21．08±8．10)mm Hg(1 mm Hg=0．133 kPa)比(30．82±9．59)mm Hg,P<0．05],左心室内压力最大上升速率明显增快[+dp／dtmax(4．29±1．27)mm Hg／ms比(3．24±0．75)mm Hg／ms,P< 0．05],最大下降速率亦显著提高[-dp／dtmax(3．71±0．79)mm Hg／ms比(3．00±0．49)mm Hg／ms, P<0．05]。免疫组化染色发现移植组梗死区周边毛细血管数显著增加(P<0．01)。结论HUCBC在未使用免疫抑制剂的条件下可成功移植到大鼠MI区,并提示能改善MI大鼠心功能,促进新生血管形成。     

苦参碱对大鼠供肝冷保存再灌注损伤中肝细胞凋亡及调控基因表达的影响

目的:探讨苦参碱对大鼠原位肝移植供肝冷保存再灌注损伤中肝细胞凋亡及调控基因表达的影响.方法:应用延长保存的大鼠原位肝移植模型,大鼠84只随机分为对照组、低剂量苦参碱治疗组(40mg/kg)、高剂量苦参碱治疗组(80mg/kg)和假手术组,将供肝在4℃林格液中保存5h后植入受体,各组大鼠于再灌注后4和24h后取样.采用TUNEL法分别检测移植术后肝细胞凋亡,流式细胞仪检测凋亡相关基因Bcl-2,FasL蛋白的表达,光镜下观察移植肝脏病理形态学的改变.结果:与对照组比较,苦参碱低、高剂量治疗组术后肝脏细胞凋亡指数显著降低(6.07±1.68,6.17±0.83vs14.87±2.10,P<0.01),肝组织Bcl-2表达增加(59.32±14.09,58.90±16.70vs17.00±8.01,P<0.01),但FasL表达量无显著差异(P>0.05),肝细胞凋亡指数、Bcl-2和FasL表达在苦参碱低、高剂量组间也无显著差异.对照组肝细胞损伤的病理表现相当严重,而治疗组的病理表现显著改善.结论:苦参碱通过促进抑制凋亡基因Bcl-2的表达来抑制冷保存再灌注导致的肝细胞凋亡.     

脑源性神经营养因子缓释微球对周围神经损伤大鼠的神经保护作用

目的 观察脑源性营养因子缓释微球(BDNF-PLGA缓释微球)对大鼠周围神经损伤的保护作用。方法 采用复乳化溶剂挥发法制备BDNF-PLGA缓释微球。40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、BDNF组和BDNF-PLGA缓释微球组;除假手术外,其它30只SD大鼠,制备坐骨神经钳夹损伤模型。术后神经损伤局部注射BDNF-PLGA缓释微球,观察大鼠的大体形态、步态、关节活动等情况;术后4周进行神经行为学评分,检查神经传导速度(NCV)、波幅、潜伏期和复合肌肉动作电位(CMAP)的幅度,以及组织病理学观察。结果 BDNF-PLGA缓释微球组明显改善坐骨神经损伤大鼠的步态、关节活动等一般状况。BDNF-PLGA缓释微球可有效地改善大鼠损伤神经功能,到第4周时已基本恢复正常,对神经功能恢复明显快于BDNF组。与模型组比较,BDNF-PLGA缓释微球组显著提高大鼠NCV,增大电位波幅,缩短潜伏期(P<0.01)。术后4周,BDNF-PLGA缓释微球组的大鼠坐骨神经NCV、波幅和潜伏期,CMAP波幅及恢复率均显著优于BDNF组。BDNF-PLGA缓释微球明显改善坐骨神经髓鞘和轴突结构破坏,髓神经纤维的髓鞘肿胀、碎裂,神经纤维中的空泡及空泡变性等组织病理学改变。结论 BDNF-PLGA缓释微球对周围神经损伤具有显著的保护作用。     

The mobilization of stem cells promote the recovery of the ischemia brain injury after cardiopulmonary resuscitation北大核心CSCD

Objective: To explore the therapeutic potential and mechanism of stem cells mobilized by granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) and AMD3100 to repair global cerebral ischemia injuries in a rat model of cardiac arrest (CA) and cardiopulmonary resuscitation (CPR). Methods: Cardiac arrest was induced by asphyxia. Fifty-six SD rats were randomly assigned into four groups: G-CSF group, G-CSF + AMD3100 group, CPR control group and sham operated group. The animals were sacrificed at 3d and 6d after CPR respectively. The neurological status and morphological changes of damaged cerebrum, the apoptosis of nerve cells and vascular endothelial growth factor (VEGF) expressed in brain tissue and capillary density in hippocampus and temporal lobe cortex were measured and analyzed by means of neurological deficit score (NDS), adhesive tape removal test (TRT), ELISA, MRI and immunofluorescence. Results: NDS in G-CSF + AMD3100 group (61. 4 ± 10. 7) was significantly higher than that in CPR control group (49. 9 ± 10. 4) at 3 d after CPR (P <0. 05). And less time consumption for TRT found in G-CSF + AMD3100 group (85. 5 ±28. 9) s rather than was in CPR control group (148. 1 ± 23.8) s and G-CSF group (118.5±30.4) s (P < 0. 05). The severity of cerebral injury assessed by MRI was significantly milder at both 3 d and 6 d in the two stem cell mobilization groups. The apoptosis rate of nerve cells in G-CSF + AMD3100 group (0.23 ±0.06) was significantly lower than that in G-CSF group (0. 34 ± 0. 08) at 3 d after CPR, and that in both stem cell mobilization groups was lower than that in CPR control group (0.44 ± 0. 09) (P < 0. 05). At 3 d and 6 d after CPR, the levels of VEGF in brain tissue were (106. 2 ± 23. 3) pg/mL and (79. 9 ± 18. 4) pg/mL in G-CSF + AMD3100 group, and were (50. 6 ± 13. 7) pg/mL and (73. 9 ± 16. 6) pg/mL in G-CSF group, which were both significantly higher than that in CPR control group (23. 1 ± 10. 2) pg/mL and (36. 2 ± 12. 8) pg/mL (P < 0. 05). At 3 d after CPR, the cerebral capillary density (351. 8 ±67. 9) branches in every high power field (A/HPF) was significantly higher in G-CSF+ AMD3100 group than that (301. 4 ±77. 3) A/HPF in G-CSF group and (250.4 ±48.0) A/HPF in CPR control group (P < 0. 05). The cerebral capillary density in G-CSF group elevated to (348. 4 ±76. 7) A/HPF at 6 d after CPR which was significantly higher than that at 3 d (P <0. 05), and there was no difference between that at 3 d and 6 d in G-CSF + AMD3100 group. Conclusions: The mobilization stem cells improve the impaired neurological function. The increased expression of VEGF in brain tissue, the neo-vascularization promoted by the mobilized stem cells and the inhibition of nerve cell apoptosis may be associated with the protective effects of the stem cell mobilization.     

不同铁剂食品与机体氧化应激程度关联的大鼠实验研究

目的研究不同铁剂食品与机体氧化应激程度的关联。方法野生型3月(WT)C57Bl/6(Ly5.1;CD45.2)雄性大鼠24只,均为500 g,将其分为4组,每组6只。第一组每天给予血红素铁(猪血),第二组给予铁离子补铁剂(葡萄搪酸亚铁),第三组给予多糖铁复合物(壳寡糖),第四组给予米汤不给铁剂。前3组每天给且只给予3餐铁共1个月。尾静脉取血进行氧化应激指标[丙二醛(MDA)、血浆谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)、超氧化物歧化酶(SOD)]检测。结果血红素铁组和多糖铁复合物组的MDA、GSH-PX均低于铁离子补铁剂组,且差异具有统计学意义(P0.05);SOD均高于铁离子补铁剂组,且差异具有统计学意义(P0.05)。血红素铁组和多糖铁复合物组之间的MDA、GSH-PX及SOD的差异无统计学意义(P0.05)。血红素铁组、铁离子补铁剂组、多糖铁复合物组与未给铁组之间,给药后MDA、GSH-PX及SOD的差异均具有统计学意义(P0.05)。MDA、GSH-PX和SOD在给药前后的差异具有统计学意义(P0.05)。未给铁组三指标前后差异无统计学意义(P0.05)。结论大鼠实验提示:食品、血红素铁、多糖铁复合物补铁引起的氧化应激反应比铁离子补铁剂较少。     

二甲双胍对2型糖尿病大鼠肠道L细胞及味觉受体的影响

目的观察二甲双胍对于2型糖尿病大鼠肠道L细胞功能及味觉受体相关蛋白的影响。方法将18只健康的8~10周龄雄性Wistar大鼠经高糖高脂饮食4周后予链脲佐菌素(STZ)成模。随机分为三组:模型组+二甲双胍、模型组+普食;对照组。分别于成模干预前和干预第6周时行口服糖耐量实验(OGTT),并测血脂及胰高血糖素样肽-1(GLP-1)表达量。第6周时处死大鼠,并留取肠道组织标本运用real-time RT-PCR法检测胰高血糖素原(PG)基因,Western blot检测葡萄糖转运蛋白-2(GLUT-2)、味觉受体T1R2、T1R3及Gαgust蛋白的表达。结果干预后二甲双胍组和正常组的随机血糖均较干预前明显下降,差异有统计学意义(P0.01),且二甲双胍组下降更明显(P0.05)。干预后二甲双胍组血清总胆固醇(CHOL)较干预前明显改善(P0.05),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)均较干预前也有所下降,但差异无统计学意义(P0.05),且与正常组、对照组干预后相比,二甲双胍组CHOL明显下降(P0.01),LDL-C及TG也有所下降,但差异无统计学意义(P0.05)。干预6周后,二甲双胍组空腹血清GLP-1的表达量较干预前增加,且比正常组和对照组高,差异有统计学意义(P0.05);高糖负荷后,二甲双胍组血清GLP-1表达水平明显增加,且与正常组及对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论二甲双胍具有良好的降糖降脂的作用;二甲双胍可能具有通过上调肠道L细胞内PG基因的表达,从而促进肠道L细胞GLP-1的产生,同时影响GLUT-2、味觉受体及其下游的信号因子Gαgust表达,进而间接起到降糖的作用。     

大鼠创伤后应激障碍与腹侧背盖区多巴胺转运体和多巴胺D2受体的关系

目的探讨大鼠创伤后应激障碍(PTSD)易感性差异的腹侧被盖区(VTA)多巴胺D2受体(D2R)和多巴胺转运体(DAT)机制。方法 150只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为试验组120只和对照组30只。实验组建立PTSD模型,根据旷场试验(OFT)和强迫游泳试验(FST)测评指标将大鼠分为高、中、低易感组。在应激模型建立后3 h、4周和6周分别处死高、低易感组和对照组大鼠各8只,原位杂交检测大鼠VTA区D2R和DAT的表达。结果高易感组VTA区DAT的灰度值在三个时点高于低易感组,且差异均有统计学意义(P0.01);高易感组D2R的灰度值在三个时点均低于低易感组,且差异有统计学意义(P0.01)。结论 VTA区DAT的低表达和D2R高表达状态与大鼠PTSD高易感性有关。