HSP70-肿瘤肽复合物的纯化及其对肝癌细胞株HepG-2增殖的作用

目的:应用快速蛋白液相色谱(FPLC)系统从肝癌组织中分离和纯4EHSP70-肽复合物,并研究其对肝癌细胞系HepG-2增殖的影响．方法:将组织进行匀浆、高速离心提取总蛋白后依次进行ConA-Sepharose亲和层析和 DEAE-Sephacel子交换层析分离纯化,所得蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot进行蛋白分子质量及性质鉴定,Bradford 法测定蛋白浓度;利用MTT方法检测HSP70- 肽复合物对HepG-2细胞增长的情况．结果:分离、纯化得到的蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、考马斯量蓝鉴定为单一带, 分子质量为70 kDa;Western blot结果证实为 HSP70,每10 g组织最终获得1．5 mg的HSP70; HSP70刺激组12,48,72 h与对照组的A值之间有显著差异(0．1 mg／L:t=-0．2500,P=0．00; t=-0．1777,P=0．001:t=-0．3094,P=0．001; 0．5 mg／L:t=-0．2878,P=0．00;t=-0．2044,P= 0．00;t=-0．3285,P=0．00;1 mg／L:t=-0．3118, P=0．00;t=-0．2592,P=0．00;t=-0．1994, P=0．025;5 mg／L:t=-0．4007,P=0．00;t= -0．1302,P=0．016;t=-0．2537,P=0．005),细胞存活率明显高于对照组(P<0．01)．结论:使用本分离纯化方法可获得高纯度 HSP70肽复合物;HSP70肽复合物可以促进 HepG-2细胞的生长．     

尼古丁对兔骨髓源成骨细胞生物学特性的影响

体外成骨诱导兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),使之分化为骨髓源成骨细胞(MOOBs),用含不同浓度尼古丁的成骨条件培养液培养MOOBs,于第1、3、5、7天采用MTT比色法检测MOOBs的增殖力,用磷酸苯二钠比色法测定MOOBs的碱性磷酸酶(ALP)活性.与对照组相比,10、100 μg/ml尼古丁对MOOBs的增殖有抑制作用(P<0.05),降低其ALP活性(P<0.05),并呈时间依赖性.提示尼古丁对兔MOOBs的增殖及ALP活性有抑制作用,这对种植体骨整合可能有影响.     

小续命汤氯仿提取物的极性分离及其活性组分的筛选

目的:筛选、分离中药复方小续命汤的活性组分.方法:小续命汤氯仿提取物进行极性划断,用MTT的方法筛查氯仿提取物中5组分不同浓度分别对HEK293细胞、PC12细胞活力的影响.结果:氯仿提取物分离得到(A-B-C-D-E)5个组分.A组分不溶于DMSO去除;B 组分在浓度为2.5ug/ml 到100ug/ml时可能促进P...     

大肠癌细胞对化疗药物的体外敏感性研究

目的利用噻唑蓝(MTT)比色法探讨大肠癌细胞对肿瘤化疗药物的体外敏感性。方法对36例患者的大肠癌组织进行体外培养,利用MTT法测定6种临床常用化疗药物的抑制率。结果 36例大肠癌试验中,化疗药物的敏感性从高到低依次为丝裂霉素(MMC)、顺铂(DDP)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、依托泊苷(VP-16)、奥沙利铂(L-OHB)、阿霉素(ADM)。其中18例结肠癌试验中,化疗药物的敏感性从高到低依次为MMC,DDP,5-FU,VP-16,L-OHB,ADM;18例直肠癌试验中,化疗药物的敏感性从高到低依次为MMC,DDP,5-FU,L-O-HB,VP-16,ADM。结论对于大肠癌,MMC,DDP,5-FU的敏感性较高,可作为首选药物;对于结肠癌和直肠癌,也有相似的规律性。     

比色法测定二至丸中总黄酮的含量

目的:建立二至丸中总黄酮含量的测定方法。方法:采用比色法,测定波长为500nm。结果:总黄酮回归方程为Y=0.4275X+0.0032(r=0.9996),其精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加样回收率试验的RSD均<2%。结论:该方法精密度、重复性好,可以作为提取液中总黄酮含量测定的方法。     

《中国药典》中纯化水硝酸盐检查浅谈

目的:对《中国药典》2010年版二部纯化水中硝酸盐检查方法提出修改建议.方法:对纯化水中硝酸盐检查方法的比色器皿的使用、操作方法进行分析、比较.结果:纯化水硝酸盐检查方法存在比色器皿使用不妥当、操作不规范而使结果判断产生偏离.结论:应完善纯化水中硝酸盐检查方法并及时修订.     

酶标仪比色法测定单胺氧化酶活性

目的建立用酶标仪比色测定单胺氧化酶A(monoamine oxidase A,MAO A)和MAO B活性的方法。方法以大鼠肝组织匀浆作酶原,分别以血清素(5-HT)和苄胺作为MAO A和MAO B底物,以2,4-二硝基苯肼(DNPH)和氢氧化钠为显色剂,在450 nm处用酶标仪比色测定。结果该方法能快速、灵敏、稳定、选择性地测定MAO活性。结论建立了以酶标仪比色法测定MAO活性的方法用于筛选药物。     

显微手术联合敏感药物间质化疗治疗复发性脑恶性胶质瘤

目的探讨显微手术联合敏感药物间质化疗治疗复发性脑恶性胶质瘤的临床疗效。方法回顾性分析85例复发性脑恶性胶质瘤患者的临床资料,其中治疗组50例,复发后予开颅显微手术切除肿瘤,术中于瘤腔内放置Omm aya囊,并采用MTT法行化疗药物体外敏感性检测,分别于术后第1、4、8、12、16周行经皮Ommaya囊穿刺注入敏感化疗药物治疗;对照组35例,复发后采取显微手术并术后常规化疗治疗。随访2年,观察比较两组患者治疗后不良反应、KPS评分及死亡率。结果对照组35例患者治疗后KPS评分改善10例,无明显变化17例,加重8例,而治疗组50例患者术后KPS评分均有不同程度的改善,生存质量得到明显改善;对照组和治疗组1、2年死亡率分别为60.0%、42.0%和82.9%、64.0%,两者相比具有统计学差异(P<0.05)。结论显微手术尽可能地全切除肿瘤,并采用敏感药物行间质内化疗,能有效抑制肿瘤生长,控制复发,延长生存期,改善生存质量,是治疗复发性脑恶性胶质瘤安全有效的方法。     

十溴联苯醚BDE-209对人卵巢癌细胞及仓鼠卵巢上皮细胞生长的影响

目的:探讨十溴联苯醚(BDE-209)对人卵巢癌细胞株OVCAR-3及中国仓鼠卵巢上皮细胞株CHO细胞增殖和细胞周期的影响。方法:采用MTT检测法、免疫荧光化学检测法以及流式细胞仪等方法观察不同浓度BDE-209(0～100nmol/L)作用于OVCAR-3和CHO细胞0～72h,其细胞形态学变化、OD值改变、K i67表达变化及细胞周期的变化。结果:(1)0～100nmol/L BDE-209作用于细胞72h,倒置显微镜下观察随着浓度增高细胞增殖明显,细胞间隙变小甚至消失,细胞密集排布,细胞形态变小;(2)MTT法检测发现BDE-209促进两种细胞增殖,其增殖率呈时间依赖性和浓度依赖性;(3)0～100nmol/L BDE-209作用72h后,K i67阳性细胞数量增多,表达强度增强,呈现浓度依赖性;(4)流式细胞术检测发现BDE-209改变了细胞周期分布,OVCAR-3细胞G2/M期及CHO细胞S期细胞比例明显增高,且增殖指数(PI)随药物浓度增加而升高。结论:BDE-209明显促进OVCAR-3细胞和CHO细胞体外增殖,并使G2/M期或S期细胞比例增加。     

白藜芦醇调控癫痫持续状态大鼠海马内源性巯醇抗氧化剂(酶)的作用

目的 探讨白藜芦醇(Res)在氯化锂联合重复低剂量匹罗卡品诱导癫痫持续状态大鼠模型中的抗氧化作用及其机制.方法 54只SD大鼠随机分为 3 组:对照组、癫痫模型组和Res治疗组,采用氯化锂联合重复低剂量匹罗卡品腹腔注射制备癫痫持续状态大鼠模型,Res治疗组同时给予白藜芦醇预防性治疗.对大鼠按痫性分级标准进行行为学观测;...