鸡白痢沙门菌SpiC蛋白的原核表达及其应用

目的进行鸡白痢沙门菌Spi C蛋白原核表达并建立以Spi C蛋白为检测抗原的间接ELISA。方法以鸡白痢沙门菌S06004基因组DNA为模板,PCR扩增384 bp的spi C基因。将spi C基因克隆至原核表达载体p ET30a中,构建重组原核表达质粒p ET30a-spi C,再转化到表达宿主菌E.coli BL21(DE3)中,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析鉴定,纯化His-Spi C蛋白,建立Spi C蛋白为检测抗原的间接ELISA并检测临床血清样品。结果通过对诱导后重组菌裂解产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,重组菌可以表达相对分子质量(Mr)约19 200的可溶性重组蛋白His-Spi C。重组蛋白GST-Spi C免疫无特定病原体鸡,所获得的高免血清能识别重组蛋白His-Spi C,表明体外表达的重组蛋白His-Spi C有良好的免疫反应原性。所建立的以重组蛋白His-Spi C介导的间接ELISA有较好的特异性,能够区分spi C基因缺失型疫苗候选株免疫与野生菌自然感染。结论重组蛋白His-Spi C呈可溶性表达,具有良好的免疫原性,以重组蛋白His-Spi C建立的间接ELISA,可以作为区分感染和免疫动物(DIVA)鸡白痢疫苗免疫的鉴定方法。     

肺部铜绿假单胞菌(PAE)感染患者前后肺角质细胞生长因子(KGF)的变化

目的:探讨患者在肺部铜绿假单胞菌(PAE)感染前后肺角质细胞生长因子(KGF)的变化情况。方法:选取肺炎患者62例为观察对象,对其PAE感染前后肺组织进行检测,观察其KGF水平变化情况。结果:对本组患者进行免疫印迹定量测试后,结果表明,所有患者在PAE感染后,肺组织KGF蛋白表达水平同感染前对比,明显较高,差异存在统计学意义(P<0.05),且随时间推移,患者KGF表达水平呈较明显上升趋势,在72 h后,KGF值达到最高水平。本组患者中PAE感染前,肺组织KGF蛋白含量较为稳定,PAE感染后各时间段,患者肺组织KGF含量均明显高于感染前,差异存在统计学意义(P<0.05)。结论:在PAE感染后,患者肺组织KGF水平会出现明显变化,随病程发展而增长。对KGF水平进行严密监测,同时采取辅助干预措施,能有效改善症状,促进患者痊愈。     

铜绿假单胞菌注射液对肺癌A549细胞自噬及PI3K/Akt通路的影响

目的探究铜绿假单胞菌注射液(PA-MSHA)对肺癌A549细胞自噬及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路的影响。方法体外培养人肺癌A549细胞,随机分为空白对照组、LY294002组(加入20μmol/L LY294002),PA-MSHA干预组(加入0.5×10^9/mL、1.0×10^9/mL、2.0×10^9/mL PA-MSHA)。干预培养48 h后,MTT法检测各组细胞活性,平板克隆形成实验检测各组细胞增殖能力,透射电子显微镜观察各组细胞自噬情况,Western blot检测各组细胞中自噬相关蛋白p62、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ及PI3K/Akt通路相关蛋白PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt表达。结果与空白对照组相比,LY294002组、0.5×10^9/mL、1.0×10^9/mL、2.0×10^9/mL PA-MSHA组细胞增殖抑制率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达显著升高(P<0.05),自噬体个数增加,细胞克隆形成率、p62、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达显著降低(P<0.05);与LY294002组相比,0.5×10^9/mL、1.0×10^9/mL PA-MSHA组细胞增殖抑制率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达显著降低(P<0.05),自噬体个数减少,细胞克隆形成率、p62、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达显著升高(P<0.05);与0.5×10^9/mL、1.0×10^9/mL PA-MSHA组相比,2.0×10^9/mL PA-MSHA组细胞增殖抑制率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达显著升高(P<0.05),自噬体个数增加,细胞克隆形成率、p62、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论PA-MSHA可能通过调控PI3K/Akt信号通路,促进肺癌A549细胞自噬,抑制细胞增殖。     

醋酸吲哚实验在卡他莫拉菌快速鉴定中的临床应用

目的通过对醋酸吲哚酚(ACIND)实验与经典生化鉴定结果的一致性分析,评价ACIND的临床应用价值。方法选取某院分离的273株卡他莫拉菌(MC)疑似菌株为实验菌株,同时应用ACIND与VITEK-2compact进行鉴定,对鉴定结果进行统计学分析,结合药物敏感性数据,评价其快速检测结果对临床用药的参考价值。结果 273株疑似菌株经生化鉴定为257株MC及16株非MC,257株MC经ACIND鉴定有254株显阳性,而16株非MC中也有6株显阳性或弱阳性。ACIND对MC的灵敏度与特异度分别为98.83%(254/257)与62.50%(10/16),阳性预测值与阴性预测值分别为96.15%(254/260)及76.92%(10/13),Kappa值为0.672。该菌β-内酰胺酶阳性率为99.22%(255/257),对复方磺胺甲噁唑、头孢克诺及头孢呋辛的不敏感率均在20%～30%,对其他抗菌药物不敏感率低于5%。结论 ACIND鉴定结果与经典生化鉴定结果具有较好一致性,结合该地区MC耐药监测数据对临床用药具有较好的指导作用及临床应用前景。     

粪菌移植替代多巴胺能药物治疗帕金森病案例分析

目的观察粪菌移植替代多巴胺能药物治疗帕金森病(PD)的疗效,探讨潜在的机制。方法为1例因服用多巴胺能药物出现幻觉而拒绝服药的PD患者行粪菌移植治疗,应用汉密尔顿抑郁量表(HAMD)、汉密尔顿焦虑量表(HAMA)、PD问卷(PDQ39)、匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)、Bristol便秘评分、统一PD评定量表Ⅲ(UPDRSⅢ量表)对患者移植治疗前及移植治疗后4周、8周、12周的相关症状进行评分,同时对患者移植治疗前和移植治疗后4周、12周的粪菌进行16 s rRNA高通量基因测序分析菌群。结果与移植治疗前相比,移植治疗后HAMD、HAMA、PDQ39、PSQI、Bristol便秘评分、UPDRSⅢ量表评分均明显降低,粪菌16 s rRNA高通量测序显示粪菌移植治疗后拟杆菌属丰度下降,而瘤胃、布劳特、普雷沃等菌属丰度增高。结论粪菌移植对PD患者的非运动症状和运动症状均显示出明显效果,其机理可能与重建正常功能的肠道菌群密切相关。     

双歧杆菌三联活菌胶囊联合瑞舒伐他汀治疗老年血脂异常的疗效分析

目的探究双歧杆菌三联活菌胶囊联合瑞舒伐他汀治疗老年血脂异常的疗效。方法共纳入上海市金山区众仁老年护理医院诊治的血脂异常患者104例,根据随机数表法分为观察组和对照组,两组均为52例。对照组患者给予瑞舒伐他汀治疗,观察组患者在对照组的基础上给予双歧杆菌三联活菌胶囊治疗。两组患者治疗时间均为8周。比较两组患者治疗前后血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)等血脂指标。观察两组患者临床疗效及不良反应发生率。结果治疗8周后,两组患者TC、TG、LDL-C水平均显著低于治疗前(观察组:t=9. 21,4. 01,3. 33;对照组t=8. 07,7. 58,9. 12; P 0. 05),HDL-C水平显著高于治疗前(t=9. 01,8. 90; P 0. 05),而观察组患者TC、TG、LDL-C水平均显著低于对照组(t=9. 25,9. 02,8. 90,P 0. 05),HDL-C水平显著高于对照组(t=9. 76,P 0. 05)。观察组总有效率(96. 08%)较对照组(78. 85%)高,差异具有统计学意义(χ2=5. 28,P=0. 02);两组双歧杆菌和乳酸杆菌、粪肠球菌数量较前明显上升(观察组:t=2. 64,7. 58;对照组:t=2. 30,2. 02; P 0. 05),大肠埃希菌数量明显下降(观察组:t=2. 43;对照组t=1. 71; P 0. 05),且观察组变化幅度比对照组更明显(t=2. 26,2. 87,2. 26; P 0. 05)。两组不良反应情况的比较差异无统计学意义(P 0. 05)。结论双歧杆菌三联活菌胶囊联合瑞舒伐他汀治疗血脂异常的疗效显著,同时可减少相关副作用。     

神经内科299株病原菌的临床分布及耐药性分析

目的:分析某院神经内科临床分离菌对常用抗菌药物的敏感性和耐药性,为临床抗感染治疗和预防耐药菌的产生提供理论依据。方法:采用纸片扩散法或自动化仪器法对神经内科近两年的临床分离菌进行药敏试验,并按美国临床和实验室标准化协会(CLSI) 2016版标准对结果进行判断;用WHONET5. 6进行数据分析。结果:共299株病原菌,其中革兰阳性菌106株,占35. 5%;革兰阴性菌193株,占64. 5%。前5位病原菌依次是大肠埃希菌(27. 76%)、金黄色葡萄球菌(12. 71%)、肺炎克雷伯菌(9. 70%)、凝固酶阴性葡萄球菌(Co NS)(9. 70%)、铜绿假单胞菌(9. 03%)。送检标本细菌分离率由高到低依次为尿液42. 47%(127/299)、呼吸道标本40. 13%(120/299)、血标本13. 04%(39/299)。MRSA检出率76. 3%,MRCNS检出率75. 9%,屎肠球菌中VRE检出率12. 5%,大肠埃希菌和克雷伯菌属中ESBLs的检出率分别为49. 4%和17. 2%,肠杆菌科细菌中CRE菌株的检出率0. 8%,肺炎克雷伯菌中XDR菌株的检出率为3. 4%,鲍曼不动杆菌中XDR菌株的检出率为31. 2%,铜绿假单胞菌中XDR株检出率为3. 7%。结论:神经内科住院患者的病情重,治疗难,要合理选择抗生素,防止抗生素不合理使用导致的耐药菌株的出现。     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌对替加环素不同体外药敏试验方法学评估

目的 比较不同药敏试验方法检测替加环素对耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)的敏感性。初步了解辽宁地区CRKP对替加环素的耐药情况，为临床合理用药提供依据。方法 回顾性收集辽宁省内多家大型三甲医院2011年1月-2016年12月分离的CRKP共269株，采用微量肉汤稀释法、KB纸片扩散法、Vitek-2仪器法及E试验法检测替加环素对CRKP的敏感性。结果 微量肉汤稀释法、E试验法、Vitek-2仪器法测定替加环素MIC50和MIC90分别为(0.5/1)、(0.25/0.5)和(0.5/4)μg/mL。按美国食品与药品监督管理局(FDA)和欧洲药敏试验委员会(EUCAST)判读标准，微量肉汤稀释法测得CRKP对替加环素的敏感率为97.4%/93.3%，中介率为2.2%/4.1%，耐药率为0.4%/2.6%。E试验法敏感率最高，为100%/98.9%，Vitek-2法耐药率最高，为8.6%/13.4%，纸片扩散法的中介率最高，为11.9%/46.5%。与微量肉汤稀释法比较，E试验法的基本一致率(EA)和分类一致率(CA)均≥90%，但存在重大误差(VME)，分别为0.4%/1.9%；Vitek-2法EA仅为61.7%，CA为87.4%/72.1%，且大误差(ME)为6.3%/7.4%，无VME；纸片扩散法CA仅为85.9%/46.5%，小误差(mE)为1.9%/2.6%，ME为0.7%/5.6%。结论 辽宁地区绝大多数CRKP对替加环素仍保持较高的敏感性。对于CRKP、E-试验法、Vitek-2仪器法和纸片扩散法均不适合单独检测替加环素敏感性，可考虑联合检测，若结果不一致，均应参考微量肉汤稀释法。