面向21世纪的药学科学发展趋势

药学科学的研究对象是药物,包括药物的发现、设计、制备、性能、应用以及有关理论、方法和技术的研究。是包括许多分支学科的综合性科学。其主要分支学科有药物化学、药理学、毒理学、药剂学、药物学析、制药工程、医院药学等。面对21世纪的社会发展,药学科学具     

尿蛋白质组双向电泳的样品制备

目的 建立与优化非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者尿液全蛋白双向凝胶电泳技术(2-DE).方法 采用4种不同的方法制备尿液蛋白质样品,以非线性预制胶条进行第一向等电聚焦,12%的SDS-PAGE进行第二向电泳,银染显色.结果 以乙腈沉淀蛋白后经过超滤制备的蛋白质样品,在300μg上样量时,可获得图像清晰、分辨率高、重复性好的双向电泳图谱.结论 建立了较稳定的非小细胞肺癌患者尿蛋白质组双向凝胶电泳技术.     

吡格列酮对胰岛素抵抗HepG2细胞胰岛素受体底物表达的影响

目的探讨毗格列酮对胰岛索抵抗（IR）HepG2细胞胰岛素受体底物（IRS）蛋白表达的影响。方法胰岛素抵抗HepG2细胞模型建立后,培养液中加入吡格列酮共同孵育,观察吡格列酮对模型细胞葡萄糖掺入率的影响;应用免疫细胞化学染色法观察吡格列酮对IR HepG2细胞IRS-1、IRS-2表达的影响。结果与模型细胞组比较,1×10^-5mol／L吡格列酮显著提高了HepG2细胞的葡萄糖掺入率（P〈0．01）,使IRHepG2细胞IRS-1、IRS-2蛋白的表达显著增加（P〈0．05）。结论吡格列酮的胰岛素增敏作用可能与胰岛素信号转导分子IRS-1、IRS-2蛋白的表达增强有关。     

肝癌细胞线粒体蛋白的MALDI-TOF质谱鉴定方法研究

目的:探索胶上蛋白原位酶切、肽质量指纹图(PMF)分析以及数据库检索方法的优化条件,建立适合于亚细胞比较蛋白质组学研究的质谱鉴定策略.方法:从考马斯亮蓝染色的2-DE胶上取下牛血清白蛋白(BSA)标准蛋白进行胶内原位酶切,与基质(CHCA)混匀后进行MALDI-TOF MS分析;对来源于人肝细胞癌细胞株QGY-7703线粒体的差异表达的候选蛋白点L9,按照通过BSA标准蛋白优化的条件进行MALDI-TOF质谱鉴定;其肽质量指纹图(PMF)经MS-Fit检索.结果:经数据库检索,BSA的肽质量指纹图(PMF)匹配肽质量数为10/11,序列覆盖率为19%,说明实验条件完全可信.候选蛋白点L9的PMF数据经数据库检索后,排名前两位的蛋白均为OXCT(3-oxoacid CoA transferase 1 precursor),其匹配肽段为9/13,序列覆盖率为24%;且OXCT的理论分子量(56kda),理论等电点(7.1),与胶上L9蛋白的位置相符.故候选蛋白点L9确认为OXCT(3-oxoacid CoAtransferase1 precursor).结论:本文所确定的鉴定策略适用于线粒体比较蛋白质组学的研究.     

CCAAT增强子结合蛋白α在甾醇类新药NSC67657诱导HL60细胞向单核系分化中的作用

目的 探讨CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)在甾醇类新药NSC67657诱导HL60细胞向单核系分化中的作用.方法 采用NSC67657诱导HL60细胞分化,流式细胞仪检测细胞表面分化抗原CD14的表达.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法连续检测C/EBPα基因和蛋白在细胞分化前后的表达情况.构建pDsRed-C/EBPα真核表达载体,基因测序后采用电转染技术,将真核表达载体转入HL60细胞中,并进行表达验证.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、瑞氏染色和流式细胞技术,观察转染细胞在NSC67657作用前后的增殖和分化情况.结果 10 μmol/L NSC67657可以诱导HL60细胞向单核系分化,连续诱导5 d后,有93.9%的细胞有CD14阳性表达.分化后的HL60细胞中,C/EBPα基因和蛋白表达均先升高后下降,分别在第2天和第3天达到峰值.真核表达载体构建成功,通过电转染和G418筛选,可获得90%以上阳性克隆.C/EBPα高表达可使HL60细胞增殖明显减缓,表面抗原CD11b的表达可达到(50.44±4.92)%.在NSC67657处理的重组质粒转染HL60细胞中,细胞单核系分化受到抑制,保留部分粒系分化.结论 NSC67657诱导HL60细胞向单核系分化不一定通过C/EBPα蛋白的协调作用,但C/EBPα蛋白高表达可以阻止NSC67657诱导HL60细胞向单核系分化的进程.     

重组人睫状神经因子聚乙二醇化条件的优化

目的 对单甲氧慕聚乙二醇丁醛(mPEG-ButyrALD,相对分子质量20×103)修饰重组人睫状神经因子(rh-CNTF)的条件进行优化.方法 优化了pH值、温度、时间、rh-CNTF与PEG的修饰比例、rh-CNTF浓度等修饰条件,并对修饰产物行分离纯化.鸡胚背根节培养法检测和比较rh-CNTF和PEG-rhCNTF的体外生物学活性.结果 rh-CNTF与PEG的修饰比例、rh-CNTF的浓度和pH值是主要影响因素,最佳pH为6.5,最佳rh-CNTF浓度为1～2 mg/ml,rh-CNTF与PEG的最佳质量比为1:1,时间和温度影响甚微.rh-CNTF的体外神经营养活性约为PEG-rhCNTF的2倍.结论 本法优化了修饰重组人睫状神经因子的条件.     

右旋糖酐40葡萄糖注射液细菌内毒素检测方法的研究

目的:探讨右旋糖酐40葡萄糖注射液是否适用于细菌内毒素检查法.方法:采用中国药典2000版附录细菌内毒素检查法.结果:右旋糖酐40葡萄糖注射液对细菌内毒素检测无干扰作用.结论:右旋糖酐40葡萄糖注射液适用于细菌内毒素检查法.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对人宫颈癌HeLa细胞的凋亡作用

目的 现察不同浓度肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对宫颈癌HeLa细胞的凋亡作用.方法 2006年于重庆医科大学,采用不同浓度的TRAIL作用于HeLa细胞,采用MTT(噻唑蓝)法检测细胞存活分数AO/EB(丫碇橙/嗅乙啶)双重荧光染色观察凋亡细胞结构;流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率.结果 TRAIL作用于HeLa细胞24 h后,TRAIL对细胞生长抑制率及细胞凋亡率具有量效关系;AO/EB双重荧光染色可见到早期、晚期凋亡细胞;流式细胞仅检测有王二倍峰出现;细胞周期发生改变.结论 TRAIL对HeLa细胞生长有抑制作用,并可诱导其凋亡.     

茅莓提取物对大鼠局灶性脑缺血再灌注神经细胞凋亡及其相关蛋白表达的影响

目的：探讨茅莓提取物(RP)对缺血性脑损伤的神经保护机制。方法：采用大鼠大脑中动脉阻塞造成局灶性脑缺血2 h再灌注24 h模型,TUNEL标记和免疫组化的方法观察茅莓提取物5,10 g·kg^-1ig对神经细胞凋亡数目及其相关蛋白Bcl-2,Bax表达的变化。结果：茅莓提取物5,10 g·kg^-1显著抑制神经细胞凋亡,增加Bcl-2阳性细胞的表达,降低Bax阳性细胞的表达,Bcl-2/Bax的表达比例增加。结论：茅莓提取物抗凋亡机制可能与增加Bcl-2阳性细胞的表达,降低Bax阳性细胞的表达,提高Bcl-2/Bax有关。     

茅莓总皂苷对大鼠局灶性脑缺血的保护作用

目的:研究茅莓总皂苷(TGRP)对局灶性脑缺血的保护作用。方法:采用大脑中动脉阻塞(MACO)法制备大鼠局灶性脑缺血模型;脑梗死区重量用TTC染色法测定,超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及细胞凋亡均采用测试药盒测定。结果:TGRP 10,20 mg.kg^-1可改善大鼠异常神经症状,使MACO大鼠的SOD,GSH-Px活力提高,MDA生成减少,减少脑皮层细胞凋亡数。结论:TGRP对脑梗死有保护作用,其作用机制可能与抗自由基、抑制细胞凋亡有关。