蜕皮甾酮对胰岛素抵抗HepG2细胞胰岛素受体底物表达的影响

目的：探讨蜕皮甾酮对胰岛素抵抗（IR）HepG2细胞胰岛素受体底物（IRS）蛋白表达的影响。方法：胰岛素抵抗HepG2细胞模型建立后,培养液中加入蜕皮甾酮共同孵育,观察蜕皮甾酮及吡格列酮对模型细胞葡萄糖掺入率的影响;应用免疫细胞化学染色法等方法观察蜕皮甾酮对胰岛素抵抗HepG2细胞IRS-1、IRS-2表达的影响。结果：与模型细胞组比较,1×10^-5mol／L蜕皮甾酮可使IR HepG2细胞IRS-1、IRS-2蛋白的表达显著增加。结论：蜕皮甾酮的胰岛素增敏作用可能与胰岛素信号转导分子IRS-1、IRS-2蛋白的表达增强有关。     

HL-60细胞向单核系和粒系分化的比较蛋白质组学研究

背景与目的：已有研究发现NSC67657和全反式维甲酸可以诱导HL-60细胞分别向单核系和粒系分化。本研究比较分析不同诱导剂诱导HL-60细胞向单核系和粒系分化前后以及分化中的蛋白表达差异,发现与单核系和粒系分化有关的关键蛋白。方法：分别采用粒系分化诱导剂全反式维甲酸和单核系分化诱导剂NSC67657诱导HL-60细胞分化,MTT法检测细胞增殖情况：流式细胞技术分析细胞表面特异性分化抗原（CD11b／CD14）的表达,根据CD14表达情况计算细胞分化百分率;细胞化学染色对HL-60的两系分化进行验证。改良双向电泳分离技术对HL-60细胞全蛋白进行分离,PDQuest软件分析寻找差异蛋白点,基质辅助激光解吸-飞行时间质谱（MALDI-TOFMS）对蛋白点进行分析,RT-PCR和免疫印迹对差异蛋白ICAT进行验证。结果：全反式维甲酸和NSC67657均抑制HL-60细胞增殖,并分别诱导HL-60细胞向粒系和单核系分化。在2μmol／LATRA和10μmol／LNSC67657作用5d后．CD11b和CD14的表达均在90％以上,细胞化学染色支持细胞两系分化的结论。蛋白质组学分析表明,HL-60细胞分别向粒系和单核系分化后,有25个差异蛋白点的变化趋势在两系分化中是相同的,有10个差异蛋白点在单核系分化后表达有差异。有15个差异蛋白点在粒系分化后表达有差异：ICAT是其中差异蛋白之一,通过基因和蛋白水平验证．发现ICAT在NSC67657诱导HL-60细胞单核系分化过程中表达升高,而在粒系和非处理细胞中表达无显著性差异。结论：双向电泳／MOLDI-TOFMS对HL-60细胞分化前后细胞全蛋白进行分析．发现了一批与两系分化有关的蛋白分子．为关键蛋白的筛选及其功能研究提供了重要的启示。